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商品屬性：

細胞培養(yǎng)步驟:

一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:

1) 準備DMEM-H培養(yǎng)基(DMEM-H:GIBCO,貨號12800017, 添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。

2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3) 凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。

二. 細胞處理:

1) 復(fù)蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。

2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。

細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。

二．細胞處理：

1）復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

明膠蛋白胨 英文名稱：Gelatin Peptone 產(chǎn)品規(guī)格：250g

豬Ⅲ型前膠原氨基末端肽(PⅢNP)免疫試劑盒進口、組裝

小鼠可溶性Endoglin(ENG/sCD105)免疫試劑盒進口、分裝

小鼠D-乳酸脫氫(D-LDH)免疫試劑盒進口、分裝

人血漿抗凝蛋白S(PS)免疫試劑盒*直銷

人去乙?；?/span>Sirtuin-7(SIRT7/SIR2L7)免疫試劑盒*直銷

人抗旁瘤抗原Ma2(PNMA2)抗體免疫試劑盒*直銷

人甘露糖(Mannose)免疫試劑盒*直銷

犬(FA)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

綿

兔肌源性干細胞Rhizoma gastrodiae天麻PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周DP1/TFDP1  轉(zhuǎn)錄因子DP1抗體 規(guī)格: 0.1mlHMGCS1  三羥基三甲基輔A合成1 規(guī)格: 0.2ml

Human Papillomavirus 13(HPV-13)人瘤病毒13 LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周streptomycin  抗體 規(guī)格: 0.2mlCYP11B1  細胞色素P450 11B1抗體 規(guī)格: 0.1ml

Human Immunodeficiency Virus 1(HIV-1M-J)人免疫缺陷病毒1型M群J型探針法熒光定量RT-PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周CMYA2/PDE4DIP  心肌相關(guān)蛋白2 規(guī)格: 0.2mlPGLS  磷酸葡萄糖酸內(nèi)酯抗體 規(guī)格: 0.2ml

Rhizoma dioscoreae hypoglaucae粉萆薢探針法PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周CCDC12  卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白12抗體 規(guī)格: 0.2mlbeta-Amyloid(25-35)  β淀粉樣肽（25-35）抗體 規(guī)格: 0.1ml

Xylella fastidiosa苛養(yǎng)木桿LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周CK5+6  細胞角蛋白5+6抗體 規(guī)格: 0.1mlHPGD/PGDH1/Prostaglandin dehydrogenase 1  前列素脫1抗體 規(guī)格: 0.1ml

Salmonella montevideo蒙得維的沙門氏探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周Rabbit Anti-chicken IgG/PE-Cy7  PE-Cy7標記的兔抗雞IgG 規(guī)格: 0.1ml

Flos albiziae合歡花探針法PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周MMS2/EDPF1  腸細胞分化相關(guān)因子1抗體 規(guī)格: 0.2ml

Enterovirus(EV)腸道病毒D組RT-LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周Shadow/shadow of prion protein  新朊蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml

Psoroptes spp. 癢螨通用探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周MMP-1  基質(zhì)金屬蛋白-1抗體 規(guī)格: 0.1ml

Grapevine flavescence dorée phytoplasma葡萄金黃化植原體PCR試劑盒 植物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周DUSP26/MKP8  雙特異性蛋酸26抗體（絲裂原活化蛋白激磷酸8） 規(guī)格: 0.2ml

操作要點：

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。

2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細胞能盡快通過最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。

3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細胞轉(zhuǎn)移至準備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。

4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細胞懸液。

5）將細胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細胞瓶內(nèi)，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。

6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細胞需經(jīng)過2~3次傳代，細胞活力恢復(fù)后才能進行后續(xù)的實驗。