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貨號	BJ-X97514

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產(chǎn)品名稱	大鼠角膜基質細胞
規(guī)格	5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
貨號	BJ-X97514

商品屬性：

名稱 大鼠角膜基質細胞

2.組織來源：眼角膜組織

3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶

4.細胞簡介：

大鼠角膜基質細胞分離自眼角膜組織；角膜位于眼球前壁的一層透明膜，約占纖維膜的前1/6，從后面看角膜呈正圓形，從前面看為橫橢圓形。角膜厚度各部分不盡相同，中央部最薄。角膜有十分敏感的神經(jīng)末梢，如有外物接觸角膜，眼瞼便會不由自主地合上以保護眼睛。為了保持透明，角膜并沒有血管，透過外界空氣、淚液及房水獲取養(yǎng)份及氧氣。角膜分為五層，由前向后依次為：上皮細胞層、前彈力層、基質層、后彈力層、內皮細胞層。角膜基質層是角膜的主要組成部分，占據(jù)角膜厚度的90%，由角膜基質細胞、膠原纖維和細胞外基質構成。角膜基質層缺損的修復主要由角膜基質細胞的增殖及分泌細胞外基質完成。角膜基質層具有結構規(guī)整，透明度高的特點，正常情況下角膜基質細胞分泌組成基質層的成分，維持角膜的透明度，此細胞對于角膜損傷的修復具有重要意義。角膜基質細胞，存在于角膜基質層中，在正常情況下，處于靜止狀態(tài)。但當角膜損傷時，不同上皮來源的因子及環(huán)境信號，將影響角膜基質細胞的應答反應，決定著角膜能否*被修復。

5.方法簡介：

()實驗室分離的大鼠角膜基質細胞采用膠原酶消化后組織貼塊法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

6.質量檢測：

()實驗室分離的大鼠角膜基質細胞經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

7.培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

產(chǎn)品貨號CM-R168

換液頻率每2-3天換液一次

生長特性貼壁

細胞形態(tài)梭形、多角形

傳代特性可傳2-3代

消化液0.25%

培養(yǎng)條件氣相：空氣，95%；CO2，5%

細胞培養(yǎng)步驟:

一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:

1) 準備DMEM-H培養(yǎng)基(DMEM-H:GIBCO,貨號12800017, 添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。

2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3) 凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。

二. 細胞處理:

1) 復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或將細胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。

2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。

圖片13.jpg

細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。

二．細胞處理：

1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

牛脂酰輔A脫氫免疫試劑盒進口、組裝

細菌瓊脂粉英文名稱：Agar Bacteriological 產(chǎn)品規(guī)格：250g

豬Ⅰ型前膠原羧基端肽(PⅠCP)免疫試劑盒進口、組裝

小鼠MAP激活化蛋白激2(MAPKAPK2)免疫試劑盒*直銷

兔基質金屬蛋白1(MMP-1)免疫試劑盒進口、分裝

人血紅素氧合1(HO-1)免疫試劑盒*直銷

人去乙?；?/span>Sirtuin-2(SIRT2/SIR2L/SIR2L2)免疫試劑盒*直銷

人肝臟甘油三脂脂肪(HTGL)免疫試劑盒進口、分裝

人γ谷氨酰轉移(GGT)免疫試劑ows\system32\EhStorShell.dll

大鼠角膜基質細胞Bovine Cytomegalovirus(BCMV)牛巨病毒染料法熒光定量PCR試劑盒動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次低溫負20度一年 2-3周Phosphor-CBX5 磷酸化CBX5抗體規(guī)格: 0.2ml

乙型流感Victoria/Yamagata亞型（BV/BY)雙重PCR試劑盒定做種屬檢測試劑盒 50次低溫負20度一年 2-3周Goat Anti-Bovine IgG/Alexa Fluor 350 Alexa Fluor 350標記的羊抗牛IgG 規(guī)格: 0.1ml

Avian Infectious Bronchitis Virus(AIBV)禽傳染性支氣管炎病毒Delaware型探針法熒光定量RT-PCR試劑盒動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次低溫負20度一年 2-3周FANK1 HSD13蛋白抗體規(guī)格: 0.1ml

Albugo tragopogi向日葵白銹病PCR試劑盒植物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次低溫負20度一年 2-3周Rabbit anti-MG IgG/Cy7 Cy7標記的兔抗爪沙鼠IgG 規(guī)格: 0.1ml

鷓鴣源性成分LAMP試劑盒種源性檢測/定做種屬檢測試劑盒 50次低溫負20度一年 2-3周TNIK TRAF2和NCK激相互作用蛋白抗體規(guī)格: 0.2ml

Salmonella heidelberg海德堡沙門氏LAMP試劑盒動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次低溫負20度一年 2-3周Bcl G/BCL2 like 14 Bcl2樣凋亡蛋白14抗體規(guī)格: 0.2ml

Bacillus subtilis枯草芽孢桿探針法熒光定量PCR試劑盒動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次低溫負20度一年 1-2周TMEM49 跨膜蛋白49抗體規(guī)格: 0.2ml

Caulis trachelospermi絡石藤探針法PCR鑒定試劑盒中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次低溫負20度一年 2-4周AMPK gamma 3/PRKAG3 苷酸活化蛋白激γ3抗體規(guī)格: 0.2ml

Israeli Acute Paralysis Virus以色列急性癱瘓病毒LAMP試劑盒動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次低溫負20度一年 2-3周ADAM8 去整合素樣金屬蛋白8抗體 0.2ml

Eurytrema spp.闊盤吸蟲通用探針法熒光定量PCR試劑盒動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次低溫負20度一年 2-3周STAT5 信號轉導和轉錄激活因子5抗體規(guī)格: 0.1ml

操作要點：

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養(yǎng)基。

2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內*解凍，使細胞能盡快通過最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。

3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內，將管內細胞轉移至準備好的離心管內，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉移至離心管內。

4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細胞懸液。

5）將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內培養(yǎng)。

6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經(jīng)過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續(xù)的實驗。