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貨號	BJ-X97030

操作要點(diǎn)：

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。

2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。

3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。

4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。

5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶內(nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。

6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。

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產(chǎn)品名稱	小鼠支氣管上皮細(xì)胞
規(guī)格	5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
貨號	BJ-X97030

商品屬性：

名稱 小鼠支氣管上皮細(xì)胞

2.組織來源：支氣管組織

3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶

4.細(xì)胞簡介：

小鼠支氣管上皮細(xì)胞分離自支氣管組織；支氣管（Bronchi），是指由氣管分出的各級分枝，由氣管分出的一級支氣管，即左、右主支氣管。左主支氣管與右主支氣管相比較，前者較細(xì)長，走向傾斜；后者較粗短，走向較前者略直，所以經(jīng)氣管墮入的異物多進(jìn)入右主支氣管。支氣管和氣管還有以區(qū)別就是，氣管是以“C"型的氣管軟骨為支架，而支氣管不是。支氣管上皮是氣道與外界環(huán)境接觸的第一道防線，不僅是各種病原體、炎癥介質(zhì)作用的靶細(xì)胞，還作為效應(yīng)細(xì)胞合成、釋放多種炎性介質(zhì)和細(xì)胞因子，從而參與氣道炎癥及免疫反應(yīng)。支氣管上皮細(xì)胞在哮喘、慢性阻塞性肺疾病、肺癌、肺囊性纖維化以及一些感染性呼吸道疾病的發(fā)病機(jī)制中均起著重要的作用。體外培養(yǎng)的原代支氣管上皮細(xì)胞因與體內(nèi)組織在形態(tài)結(jié)構(gòu)和功能活動(dòng)上存在很大的相似性，因此，在基礎(chǔ)及臨床研究中極為重要。

5.方法簡介：

()實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠支氣管上皮細(xì)胞采用-混合消化法結(jié)合機(jī)械刮刷并通過上皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

6.質(zhì)量檢測：

()實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠支氣管上皮細(xì)胞經(jīng)PCK免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

7.培養(yǎng)信息：

包被條件鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培養(yǎng)基含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

產(chǎn)品貨號CM-M007

換液頻率每2-3天換液一次

生長特性貼壁

細(xì)胞形態(tài)上皮細(xì)胞樣

傳代特性可傳1-2代

消化液0.25%

培養(yǎng)條件氣相：空氣，95%；CO2，5%

細(xì)胞培養(yǎng)步驟:

一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:

1) 準(zhǔn)備DMEM-H培養(yǎng)基(DMEM-H:GIBCO,貨號12800017, 添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。

2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3) 凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。

二. 細(xì)胞處理:

1) 復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2) 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

圖片13.jpg

細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。

二．細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

重組人 IL17 / IL17A 蛋白

重組人 IL17 / IL17A 蛋白 (His 標(biāo)簽)

重組人 IL-17F / Interleukin-17F 蛋白 (His 標(biāo)簽)

重組小鼠 IL25 蛋白 (His 標(biāo)簽)

重組人 IL25 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

重組食蟹猴 IL-21R / Interleukin-21 Receptor 蛋白 (His 標(biāo)簽)

重組人 IL5 / Interleukin 5 蛋白

重組人 IL-15 / IL15 / Interleukin 15 蛋白 (His 標(biāo)簽)

小鼠支氣管上皮細(xì)胞Fructus kochiae地膚子PCR鑒定試劑盒中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次低溫負(fù)20度一年 2-4周GCN2 蛋白激GCN2蛋白抗體規(guī)格: 0.2mlPRMT1 蛋白質(zhì)甲基轉(zhuǎn)移1抗體規(guī)格: 0.1ml

Equine Coital Exanthema Virus(同馬皰疹病毒3型)馬疹病病毒LAMP試劑盒動(dòng)物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次低溫負(fù)20度一年 2-3周KLF8/KLF3 KLF樣轉(zhuǎn)錄因子8抗體規(guī)格: 0.1mlHeparanase 乙酰肝素抗體規(guī)格: 0.1ml

Zucchini Green Mottle Mosaic Virus(ZGMMV)南瓜綠斑駁花葉病毒RT-PCR試劑盒植物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次低溫負(fù)20度一年 2-3周Phospho-Tuberin/TSC2(Ser540) 磷酸化結(jié)節(jié)性硬化蛋白抗體規(guī)格: 0.1mlMAPK organizer 1/Morg1 絲裂原活化蛋白激組織蛋白1抗體規(guī)格: 0.1ml

Rhizoma atractylodis macrocephalae 白術(shù)LAMP鑒定試劑盒中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次低溫負(fù)20度一年 2-4周ANGEL1 ANGEL1蛋白抗體規(guī)格: 0.2mlDonkey Anti-Goat IgG/PE-CY5 PE-CY5標(biāo)記的驢抗羊IgG 規(guī)格: 0.1ml

Avian Herpesvirus 2(Gallid Herpesvirus-2、GaHV-2)禽皰疹病毒2型LAMP試劑盒動(dòng)物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次低溫負(fù)20度一年 2-3周BRP44 腦蛋白44抗體規(guī)格: 0.2mlFbx15 Fbx15蛋白抗體規(guī)格: 0.2ml

Listeria ivanovii伊氏李斯特探針法熒光定量PCR試劑盒動(dòng)物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次低溫負(fù)20度一年 2-3周Phospho-p90RSK(Ser380) 磷酸化絲/蘇激p90RSK蛋白抗體規(guī)格: 0.1mlPhospho-MAP3K8/Tpl2 (Ser400) 磷酸化絲裂原活化蛋白激激8抗體規(guī)格: 0.1ml

Human Coronavirus(HCoV)人通用染料法熒光定量RT-PCR試劑盒動(dòng)物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次低溫負(fù)20度一年 2-3周IL-14/Taxilin alpha 白介素14抗體規(guī)格: 0.1mlDACH2 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子DACH2抗體規(guī)格: 0.2ml

Actinomyces europaeus歐洲放線PCR試劑盒動(dòng)物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次低溫負(fù)20度一年 2-3周Goat Anti-Chicken IgG/Alexa Fluor 555 Alexa Fluor 555標(biāo)記的羊抗雞IgG 規(guī)格: 0.1mlphospho-P53(Ser46) 磷酸化瘤抑制基因P53抗體規(guī)格: 0.1ml

Actinomyces pyogenes化膿放線LAMP試劑盒動(dòng)物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次低溫負(fù)20度一年 2-3周FAM96B FAM96B蛋白抗體規(guī)格: 0.2mlIGFBP1 胰島素樣生因子結(jié)合蛋白1抗體規(guī)格: 0.1ml

Xanthomonas axonopodis pv. vasculorum甘鹿流膠病PCR試劑盒植物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次低溫負(fù)20度一年 2-3周SCYLV 甘蔗SCYLV抗體規(guī)格: 1mlPhospho-Tuberin/TSC2(Ser664) 磷酸化結(jié)節(jié)性硬化蛋白抗體規(guī)格: 0.1ml