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貨號	BJ-X97032

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產(chǎn)品名稱	大鼠支氣管上皮細胞
規(guī)格	5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
貨號	BJ-X97032

商品屬性：

名稱 大鼠支氣管上皮細胞

2.組織來源：支氣管組織

3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶

4.細胞簡介：

大鼠支氣管上皮細胞分離自支氣管組織；支氣管（Bronchi），是指由氣管分出的各級分枝，由氣管分出的一級支氣管，即左、右主支氣管。左主支氣管與右主支氣管相比較，前者較細長，走向傾斜；后者較粗短，走向較前者略直，所以經(jīng)氣管墮入的異物多進入右主支氣管。支氣管和氣管還有以區(qū)別就是，氣管是以“C"型的氣管軟骨為支架，而支氣管不是。支氣管上皮是氣道與外界環(huán)境接觸的第一道防線，不僅是各種病原體、炎癥介質(zhì)作用的靶細胞，還作為效應(yīng)細胞合成、釋放多種炎性介質(zhì)和細胞因子，從而參與氣道炎癥及免疫反應(yīng)。支氣管上皮細胞在哮喘、慢性阻塞性肺疾病、肺癌、肺囊性纖維化以及一些感染性呼吸道疾病的發(fā)病機制中均起著重要的作用。體外培養(yǎng)的原代支氣管上皮細胞因與體內(nèi)組織在形態(tài)結(jié)構(gòu)和功能活動上存在很大的相似性，因此，在基礎(chǔ)及臨床研究中極為重要。

5.方法簡介：

()實驗室分離的大鼠支氣管上皮細胞采用-混合消化法結(jié)合機械刮刷并通過上皮細胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

6.質(zhì)量檢測：

()實驗室分離的大鼠支氣管上皮細胞經(jīng)PCK免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

7.培養(yǎng)信息：

包被條件鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培養(yǎng)基含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

產(chǎn)品貨號CM-R007

換液頻率每2-3天換液一次

生長特性貼壁

細胞形態(tài)上皮細胞樣

傳代特性可傳1-2代

消化液0.25%

培養(yǎng)條件氣相：空氣，95%；CO2，5%

細胞培養(yǎng)步驟:

一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:

1) 準備DMEM-H培養(yǎng)基(DMEM-H:GIBCO,貨號12800017, 添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。

2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3) 凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。

二. 細胞處理:

1) 復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。

2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。

圖片13.jpg

細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。

二．細胞處理：

1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

重組小鼠 IL5 蛋白 (His 標簽)

重組大鼠 Interleukin-2 / IL-2 蛋白

重組人 IL16 / Interleukin-16 蛋白 (His 標簽)

重組食蟹猴 IL13 / ALRH 蛋白 (His 標簽)

重組人 IL13 / ALRH 蛋白

重組人 Interleukin-21 / IL-21 蛋白

重組人 Interleukin-2 / IL-2 蛋白

重組人 IL-3 / Interleukin-3 蛋白 (His 標簽)

重組人 IL-9 / Interleukin-

大鼠支氣管上皮細胞Ophiocordyceps Sinensis冬蟲夏草PCR鑒定試劑盒中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次低溫負20度一年 2-4周phospho-STAT5b(Ser731) 磷酸化信號轉(zhuǎn)導和轉(zhuǎn)錄激活因子5b抗體規(guī)格: 0.1ml

Jaagsiekte Sheep Retrovirus(JSRV)羊肺腺瘤病毒RT-LAMP試劑盒動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次低溫負20度一年 2-3周Defensin β1 防御素β1抗體規(guī)格: 0.1ml

Avian Paramyxovirus 2(APMV)禽副粘病毒2型探針法熒光定量RT-PCR試劑盒動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次低溫負20度一年 2-3周CD45/B220 白細胞共同抗原抗體規(guī)格: 0.1ml

Folium artemisiae argyi艾葉染料法PCR鑒定試劑盒中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次低溫負20度一年 2-4周Mouse Anti-Bov IgG/Gold 膠體金標記的小鼠抗牛IgG 規(guī)格: 0.5ml

Acarapis woodi武氏盾螨LAMP試劑盒動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次低溫負20度一年 2-3周L-Selectin/CD62L L選擇素抗體規(guī)格: 0.1ml

Coxsakie Virus(CV)柯薩奇病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次低溫負20度一年 2-3周DDRGK1 DDRGK1蛋白抗體規(guī)格: 0.2ml

Fructus piperis longi蓽茇染料法PCR鑒定試劑盒中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次低溫負20度一年 2-4周BMP1 骨形態(tài)發(fā)生蛋白1/膠原C蛋白肽鏈內(nèi)切抗體規(guī)格: 0.2ml

Actinomadura madurae馬杜拉放線LAMP試劑盒動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次低溫負20度一年 2-3周FPR1 甲酸基肽受體1抗體規(guī)格: 0.2ml

Trypanosoma cruzi克氏錐蟲探針法熒光定量PCR試劑盒動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次低溫負20度一年 2-3周CD56/NCAM1 神經(jīng)細胞粘附分子1抗體規(guī)格: 0.1ml

Herpesvirus Saimiri(HVS)松鼠猴皰疹病毒染料法熒光定量PCR試劑盒動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次低溫負20度一年 2-3周Rabbit Anti-mouse IgM/Alexa Fluor 647 Alexa Fluor 647標記的兔抗小鼠IgM 規(guī)格: 0.1ml

操作要點：

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養(yǎng)基。

2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細胞能盡快通過最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。

3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細胞轉(zhuǎn)移至準備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。

4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細胞懸液。

5）將細胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細胞瓶內(nèi)，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。

6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經(jīng)過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續(xù)的實驗。