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明膠培養(yǎng)基說明書

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更新時間:2022-09-08 09:22:34瀏覽次數(shù):133次

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產(chǎn)地 國產(chǎn) 加工定制
適用領域 科研 貨號 BJ-01R3350
明膠培養(yǎng)基說明書的公司*:
Rabbit Anti-Bovine IgM/Gold 膠體金標記的兔抗牛IgM 規(guī)格: 2mlHsp93 熱休克蛋白93抗體 規(guī)格: 0.2mlMouse Anti-human IgM/PE-CY5 PE-CY5標記的小鼠抗人IgM 規(guī)格: 0.1mlSCN1A SCN1A抗體 規(guī)格: 0.1mlGoat Anti-Mouse IgG/PE PE標記的

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產(chǎn)品名稱:明膠培養(yǎng)基說明書

貨號:BJ-01R3350

規(guī)格:10×10ml

分類:培養(yǎng)基

儲存條件:4℃,6個月

用途:多用于植物菌種或其他菌種的培養(yǎng),亦可用于菌株明膠液化實驗。

注意事項:無菌溶液。又稱明膠液化培養(yǎng)基主要由高純度明膠、蛋白胨、去離子水等組成,經(jīng)無菌處理,室溫下多呈淡黃色粘稠液體或膠凍狀,如果需要液體形態(tài)則加熱溶解后使用。

注意事項:

1、盡注意無菌操作,避免污染。

2、避免反復凍融。

3、為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。

標準溶液的配制:

1.直接配制法    對于純凈的物質(zhì)(稱做基準物質(zhì))可準確進行稱量,用蒸餾水溶解后,轉(zhuǎn)移到一定容積的容量瓶中稀釋至標線,溶液的準確濃度可以直接計算出來。溶質(zhì)的純度、性質(zhì)等對濃度有較大影響,為此,對用來直接配制標準溶液用的基準物質(zhì)必須具備以下條件:

(1)物質(zhì)的純度要高,含量不得低于99.9%,雜質(zhì)的含量應當少到可以忽略的程度。

(2)物質(zhì)的分子組成應與其化學式*符合,包括結水合物中的結品水含量也必須與其化學式相符合。如硼砂Na2B4O7·10H2O等。

(3)性質(zhì)穩(wěn)定,貯蔵時應不發(fā)生變化,不易吸收空氣中的水分、二氧化碳等氣體而改變其成分,不易風化潮解和被空氣氧化,烘干時不易分解等。此外最好使用分子量較大的基準物質(zhì)以減小稱量誤差。

2.間接配制法    凡不符合基準物質(zhì)條件的物質(zhì),可先配制成近似所需濃度的溶液,再用基準物質(zhì)溶液或能與其發(fā)生定量反應的標準溶液進行滴定,求其準確濃度,這種通過滴定來確定準確濃度的操作叫做“標定"。間接法配制近似濃度溶液時不需用分析天平稱量和容量瓶配制,可用臺秤、量筒等器皿。將稱好的物質(zhì)轉(zhuǎn)移到干凈的試劑瓶中,先加少量蒸餾水將其溶解,繼續(xù)用量筒加蒸餾水至需要量即可。由于大多數(shù)試劑不符合基準物的條件,故間接法配制標準溶液是經(jīng)常的。如固體NaOH因易吸收空氣中的水分而潮解和吸收CO2使表面變質(zhì);濃鹽酸因易揮發(fā)而無法準確稱量;不易得到分析純級的試劑等,這些物質(zhì)的標準溶液須用間接法來配制,經(jīng)標定后再做標準溶液使用。

2.png 

標準溶液的標定:

1.用基準物質(zhì)標定法

(1)多次稱量法    用減重法精密稱取幾份(如2~3份)基準物質(zhì),分別倒入編號的干凈錐形瓶(或燒杯)內(nèi),各加少量蒸餾水溶解,再加指示劑后分別用待標定溶液滴定至等當點,各自記錄所消耗待標定溶液的體積,結合基準物質(zhì)的重量分別算出溶液的準確濃度,最后取平均值做為標準溶液的濃度。

(2)移液管法    精密稱取一份基準物質(zhì),在干凈的小燒杯內(nèi)加少量蒸餾水溶解,順玻棒全部轉(zhuǎn)移到已校正好的容量瓶中,多次沖洗燒杯洗液并入容量瓶中,最后配成一定體積的溶液,混勻。每次滴定用配套的移液管吸取并轉(zhuǎn)移至錐形瓶中,加指示劑后用待標定溶液滴定至等當點,每次做好記錄,根據(jù)所消耗待標定溶液的體積,結合基準物質(zhì)的重量,分別算出溶液的準確濃度取平均值做為標準溶液的濃度。

2.比較法標定    如果待標定溶液能與某標準溶液進行反應,可吸量一定體積的某標準溶液,用待標定溶液滴定,或吸量一定體積的待標定溶液,用某標準溶液滴定。根據(jù)兩溶液所消耗的毫升數(shù)及某標準溶液的濃度,按N1V1=N2V2式可以計算出待標定溶液的準確濃度。這種用標準落液來測定待標定溶液準確濃度的過程稱為“比較法"標定。如果某標準溶液的濃度由于某些原因不夠準確時,就會直接影響待標定溶液濃度的準確性,顯然比較法不如用基準物質(zhì)直接標定的方法精確,但比較法簡便易行。

標定完畢,蓋緊標準溶液試劑瓶塞,瓶簽上注明標準溶液名稱、準確濃度和日期等。

Treponema spp.螺旋體通用LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 20度 一年 2-3周CKLFH8/CMTM8  趨化素樣因子超家族成員8抗體 規(guī)格: 0.2ml

Influenza Virus A甲型流感()病毒H7N2亞型探針法熒光定量RT-PCR試劑盒 動物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 20度 一年 2-3周ADA/Adenosine deaminase  苷脫氨抗體 規(guī)格: 0.1ml

Caulis lonicerae忍冬藤染料法PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 20度 一年 2-4周Glucocorticoid receptor(GR)  糖皮質(zhì)激素受體抗體 規(guī)格: 0.1ml

Giardia lamblia藍氏賈第鞭毛蟲B型LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 20度 一年 2-3周H5N1 Hemagglutinin  A型毒H5N1凝集素抗體 規(guī)格: 1ml

Parechovirus(PeV) 雙埃柯病毒探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 20度 一年 2-3周phospho-p95 NBS1(Ser343)  磷酸化滑膜細胞凋亡抑制物1抗體 規(guī)格: 0.1ml

Radix bupleuri柴胡LAMP鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 20度 一年 2-4周α-TAT  α微管蛋白乙酰轉(zhuǎn)移1抗體 規(guī)格: 0.2ml

Brucella ovis綿羊布魯氏LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 20度 一年 2-3周SSTR5  生抑素受體5抗體 規(guī)格: 0.1ml

Fusarium equiseti木賊鐮刀探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 20度 一年 2-3周Nrn1/Cpg15/Neuritin  轉(zhuǎn)化神經(jīng)突起蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml

Radix rhapontici漏蘆探針法PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 20度 一年 2-4周ADCY2  苷酸環(huán)化2抗體 0.2ml

Diarrheagenic Escherichia coli致瀉性大腸桿(致瀉性大腸埃希氏)通用LAMP試劑盒,停 動物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 20度 一年 2-3周TNFSF9  瘤壞死因子配體超家族成員9抗體 規(guī)格: 0.1ml

明膠培養(yǎng)基說明書死細胞核染料(碘化丙啶)PI20mg|5mg|10mg

細胞膜橙紅色熒光探針(DiI)DiI10mg

鈣黃綠素AMCalcein,AM10μg

細胞質(zhì)綠色熒光染料100μL

細胞膜紅色熒光染料(DiD)DiD10mg

Hoechst33258染色試劑盒Apoptotic Cell Hoechst 33258 Detection Kit100T

oechst 33258染色液(即用型)10ml|50ml

Hoechst 33342/PI雙染試劑盒Apoptotic Cell Hoechst 33342/PI Detection Kit100T

Hoechst 33342染色液10ml|50ml

碘化丙啶PI染色試劑盒Cell Apoptosis Detection Kit(PI)100T

使用方法:

1.  常用篩選濃度

注意:用來篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)株的工作濃度需要根據(jù)細胞類型,培養(yǎng)基,生長條件和細胞代謝率而變化,推薦使用濃度為50-1000μg/mL。對于第一次使用的實驗體系建議通過建立殺滅曲線(kill curve),即劑量反應性曲線,來確定最佳篩選濃度。

一般而言,哺乳動物細胞50-500μg/mL;細菌/植物細胞20-200μg/mL;真菌300-1000μg/mL。

2. 殺滅曲線的建立

注意:為了篩選得到穩(wěn)定表達目的蛋白的細胞株,需要確定能夠殺死未轉(zhuǎn)染宿主細胞的抗生素濃度,可通過建立殺滅曲線(劑量反應曲線)來實現(xiàn),至少選擇5個濃度。

1)  第一天:未轉(zhuǎn)化的細胞按照20-25%的細胞密度鋪在合適的培養(yǎng)板上,37℃,CO2培養(yǎng)過夜;注:對于需要更高密度來檢測活力的細胞,可增加接種量。

2)  根據(jù)細胞類型,設定合適范圍內(nèi)的濃度梯度。以哺乳動物細胞為例,可設定50,100,250,500,750,1000μg/mL。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/ml,然后按照下表稀釋到相應濃度的工作液。

3)  第二天:替換舊的培養(yǎng)基,換用新鮮配制的含有相應濃度藥物的培養(yǎng)基。每個濃度做三個平行孔。

4)  接下來每3-4天更換新的含藥物培養(yǎng)基。

5)  按照固定的周期(如每2天)進行活細胞計數(shù)來確定阻止未轉(zhuǎn)染細胞生長的恰當濃度。選擇在理想的天數(shù)(通常是7-10天)內(nèi)能夠殺死絕大多數(shù)細胞的濃度為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞篩選用的工作濃度。

3.   穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞的篩選

1)     轉(zhuǎn)染48h后,用含有適當濃度的潮霉素B篩選培養(yǎng)基來傳代細胞(直接傳代或者稀釋后傳代)。

注意:細胞處于活躍分裂狀態(tài)時抗生素的殺傷。則當細胞過于稠密,其效率會降低。為了得到較好的篩選效果,最好將細胞稀釋至豐度不超過25%

2) 每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養(yǎng)液。

3)  篩選7天后觀察并評估細胞克?。洌┑男纬汕闆r。集落的形成可能還需要一周或者更多的時間,這取決于宿主細胞類型,轉(zhuǎn)染,以及篩選效果。

4) 挑取并轉(zhuǎn)移5-10個抗性克隆于35mm細胞培養(yǎng)板,繼續(xù)用含藥物的篩選培養(yǎng)液維持培養(yǎng)7天。

5) 之后更換正常培養(yǎng)基培養(yǎng)即可。

 

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