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當前位置：上海邦景實業(yè)有限公司>>PCR檢測試劑盒>>熒光定量PCR試劑盒>> 牛結(jié)節(jié)疹病毒熒光定量PCR試劑盒探針法
| 產(chǎn)地 | 國產(chǎn) | 加工定制 | 否 |
|---|---|---|---|
| 適用領(lǐng)域 | 科研 | 貨號 | BJ-P9331 |
特別提示：本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
牛結(jié)節(jié)疹病毒熒光定量PCR試劑盒探針法 | Bovine Lumpy Skin Disease Virus(LSDV) | 多種規(guī)格 | BJ-P9331 |
特點：
1. 即開即用，用戶只需要提供病毒樣品。
2. 根據(jù)鮑皰疹樣病毒保守序列設(shè)計的專一性引物，與相關(guān)病毒無交叉反應(yīng)。
3. 靈敏度可以達到幾百拷貝/反應(yīng)。
4. 一管式熒光定量 PCR 檢測，避免后續(xù)污染。
5. 本試劑盒足夠 50 次 20μL 反應(yīng)體系的熒光定量 PCR。
6. 本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。
儲存條件：-20℃以下，有效期12個月。
實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此，擴增不同的基因需要設(shè)計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟 1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。 10×PCR buffer 5μl dNTP mixl 4μl 引物1（10pM） 2μl 引物2（10PM） 2μl Taq酶（2U/μl） 1μl DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl 加ddH2O至 50 μl 視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。 2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。 3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。 4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。 | 三、注意事項 １．PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行。設(shè)立一個專用的PCR實驗室。 ２．純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡單越好。 ３．所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。 ４．PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。 ５．試劑都應(yīng)該以大體積配制，試驗一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量儲存，從而確保實驗與實驗之間的連續(xù)性。 ６．試劑或樣品準備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。 ７．PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開，并且要充分混勻。
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操作流程
1. 整個檢測過程應(yīng)嚴格按照本說明書要求分別在試劑準備區(qū)、樣本處理區(qū)和PCR擴增區(qū)進行操作，各區(qū)實驗服、儀器 、耗材應(yīng)獨立使用，不能混用；實驗用吸頭采用帶濾芯吸頭；樣本處理區(qū)應(yīng)配有生物安全柜，樣本處理在生物安全柜中進行操作；三個區(qū)應(yīng)該配有紫外線殺菌裝置。
2. 為避免RNA降解，樣本處理過程應(yīng)在0-4℃條件下操作，且完成實驗后立即上機檢測；樣本處理過程中使用的器具耗材應(yīng)經(jīng)過無核酶處理。
3. 每次實驗應(yīng)該設(shè)置陰、陽性對照。
4. 所有試劑在使用應(yīng)該在常溫下充分融化混勻，并應(yīng)瞬時離心。
5. 試劑盒內(nèi)所配陰性和陽性對照在一次使用應(yīng)全部轉(zhuǎn)移至標本準備區(qū)，并單獨存放。
6. 為防止熒光干擾，應(yīng)避免裸手直接接觸PCR反應(yīng)管，并應(yīng)避免在PCR反應(yīng)管上進行任何標記。
7. 儀器 擴增相關(guān)參數(shù)應(yīng)按照本說明書相關(guān)要求進行設(shè)置；不同批號試劑不能混用。
8. ABI系列熒光定量PCR儀參數(shù)設(shè)置中不選ROX校正，淬滅基因選擇None。
9. 實驗過程中產(chǎn)品的廢棄物應(yīng)該進行無害化處理后方可丟棄。
50次 非多糖清除劑（DNA專用）
100mL TB Solution-II TB Solution-II 常溫保存
硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基 100ml*20瓶
1瓶 BC3H1細胞株 BC3H1 低溫運輸和保存
四硫磺酸鹽煌綠增菌液基礎(chǔ)（TTB）顆粒 Tetrathionate Broth Base 300ml/袋*10
7次 克必隆eTS 細菌基因組差減雜交試劑盒
125mL NP40 Lysis Buffer with Glycerol,2X（含甘油型NP40裂解液，2X） NP40 Lysis Buffer with Glycerol,2X 常溫保存
20次 克必隆零背景T載體 Zero Background T Vector 低溫保存
2 ug pMSCV pMSCV 低溫運輸，-20℃保存
水解乳蛋白 250g
50mL EGTA Solution（EGTA溶液）,1M,pH8.0 EGTA Solution,1M,pH8.0 常溫保存
牛結(jié)節(jié)疹病毒熒光定量PCR試劑盒探針法小鼠 LTA 基因全長ORF克隆大鼠胰島素樣因子3(INSL3)免疫試劑盒進口、組裝
小鼠 SERPINA1B 基因全長ORF克隆大鼠胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白6(IGFBP-6)免疫試劑盒進口、分裝
小鼠 FGF14 轉(zhuǎn)錄變體1 基因全長ORF克隆大鼠胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白5(IGFBP-5)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)
小鼠 FGF12 轉(zhuǎn)錄變體1 基因全長ORF克隆大鼠胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白4(IGFBP-4)免疫試劑盒*直銷
小鼠 XCL1 基因全長ORF克隆大鼠胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白3(IGFBP-3)免疫試劑盒進口、組裝
小鼠 AOC3 基因全長ORF克隆大鼠胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白2(IGFBP-2)免疫試劑盒進口、分裝
小鼠 CD300A 基因全長ORF克隆大鼠胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白1(IGFBP-1)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)
小鼠 IFNZ 基因全長ORF克隆大鼠胰島素樣生長因子2(IGF-2)免疫試劑盒*直銷
小鼠 IFNE 基因全長ORF克隆大鼠胰島素樣生長因子1受體(IGF-1R)免疫試劑盒進口、組裝
小鼠 IFNA4 基因全長ORF克隆大鼠胰島素樣生長因子1(IGF-1)免疫試劑盒進口、分裝
小鼠 IFNA13 基因全長ORF克隆大鼠胰島素受體底物2(IRS2)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)
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