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貨號(hào)	BJ-X97468

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產(chǎn)品名稱	小鼠骨髓樹突狀細(xì)胞(DC細(xì)胞)
規(guī)格	5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
貨號(hào)	BJ-X97468

商品屬性：

名稱小鼠骨髓樹突狀細(xì)胞(DC細(xì)胞)

2.組織來(lái)源：骨髓

3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶

4.細(xì)胞簡(jiǎn)介：

小鼠骨髓樹突狀細(xì)胞分離自骨髓；骨髓是機(jī)體的造血組織，位于身體的許多骨骼內(nèi)。成年動(dòng)物的骨髓分兩種：紅骨髓和黃骨髓。紅骨髓能制造紅細(xì)胞、血小板和各種白細(xì)胞。血小板有止血作用，白細(xì)胞能殺滅與抑制各種病原體，包括細(xì)菌、病毒等；某些淋巴細(xì)胞能制造抗體。因此，骨髓不但是造血器官，它還是重要的免疫器官。骨髓是存在于長(zhǎng)骨(如肱骨、股骨)的骨髓腔和扁平骨(如髂骨)的稀松骨質(zhì)間的網(wǎng)眼中，是一種海綿狀的組織，能產(chǎn)生血細(xì)胞的骨髓略呈紅色，稱為紅骨髓。出生時(shí)，紅骨髓充滿全身骨髓腔，隨著年齡增大，脂肪細(xì)胞增多，相當(dāng)部分紅骨髓被黃骨髓取代，最后幾乎只有扁平骨骨髓腔中有紅骨髓。骨髓DC細(xì)胞是由骨髓單核細(xì)胞誘導(dǎo)而成的；DC細(xì)胞，全稱樹突狀細(xì)胞(DC)，是近年來(lái)倍受們關(guān)注的專職抗原呈遞細(xì)胞(APC)，能攝取、加工及呈遞抗原，啟動(dòng)T細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)。由美國(guó)學(xué)者Steinman于1973年在淋巴結(jié)中發(fā)現(xiàn)，從脾臟中分離出一類與粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和淋巴細(xì)胞形態(tài)和功都不同的白細(xì)胞，因其細(xì)胞膜向外伸出，形成與神經(jīng)細(xì)胞軸突相似的膜性樹狀突起，故而命名為樹突狀細(xì)胞。未成熟DC具有較強(qiáng)的遷移能力，成熟DC能有效激活初始型T細(xì)胞，處于啟動(dòng)、調(diào)控、并維持免疫應(yīng)答的中心環(huán)節(jié)。

5.方法簡(jiǎn)介：

()實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠骨髓未成熟DC細(xì)胞采用密度梯度離心法分離骨髓單個(gè)核細(xì)胞、培養(yǎng)過(guò)程添加細(xì)胞因子誘導(dǎo)而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

6.質(zhì)量檢測(cè)：

()實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠骨髓樹突狀細(xì)胞(未成熟DC細(xì)胞)經(jīng)CD86免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

7.培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等

產(chǎn)品貨號(hào)CM-M151A

換液頻率每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性半貼半懸浮

細(xì)胞形態(tài)圓形

傳代特性屬于高度分化細(xì)胞；屬于不增殖細(xì)胞群

消化液0.25%

培養(yǎng)條件氣相：空氣，95%；CO2，5%

細(xì)胞培養(yǎng)步驟:

一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:

1) 準(zhǔn)備DMEM-H培養(yǎng)基(DMEM-H:GIBCO,貨號(hào)12800017, 添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。

2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3) 凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。

二. 細(xì)胞處理:

1) 復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過(guò)夜)。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2) 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

圖片13.jpg

細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。

二．細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

人P0蛋白抗體(IgM)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

犬軟骨寡聚基質(zhì)蛋白(COMP)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝

馬白介素4(IL-4/CXCL4)免疫試劑盒*直銷

大鼠細(xì)胞間粘附分子1(ICAM-1)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝

大鼠兒茶抑素免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

魚補(bǔ)體蛋白3(C3)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

賴脫羧培養(yǎng)基英文名稱：Lysine-decarboxylase Test Broth 產(chǎn)品規(guī)格：5g

酪蛋白胨大豆吐溫20培養(yǎng)基英文名稱：Casein DigestSoy LecithinPolysorbate 20 Medows\system32\EhStorShell.dll

小鼠骨髓樹突狀細(xì)胞(DC細(xì)胞)Moschus麝香探針?lè)≒CR鑒定試劑盒中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次低溫負(fù)20度一年 2-4周Calbindin/Calbindin D28k 鈣結(jié)合蛋白D28K抗體規(guī)格: 0.2mlphospho-Bid (Ser65) 磷酸化BH3結(jié)構(gòu)域凋亡誘導(dǎo)蛋白抗體規(guī)格: 0.1ml

Mycobacterium africanum非洲分枝桿LAMP試劑盒動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次低溫負(fù)20度一年 2-3周PCDHGB2 原鈣粘蛋白γB2抗體規(guī)格: 0.2mlRAB40A RAS基因家族蛋白R(shí)AB40A抗體規(guī)格: 0.2ml

Coccidioides immitis粗球孢子探針?lè)晒舛縋CR試劑盒動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次低溫負(fù)20度一年 2-3周Goat Anti-rat IgG/HRP 辣根過(guò)氧化物標(biāo)記的羊抗大鼠IgG 規(guī)格: 0.1mlUBE2E3 泛素蛋白連接E3抗體規(guī)格: 0.2ml

Canine respiratory coronavirus, CRCoV(CRCoV)犬呼吸道病毒染料法熒光定量RT-PCR試劑盒動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用） 50次低溫負(fù)20度一年 2-4周ERAB/HSD17B10 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)Aβ相關(guān)結(jié)合蛋白抗體規(guī)格: 0.1mlBrain protein CG6 腦蛋白CG6抗體規(guī)格: 0.2ml

Canine Adenovirus (CAV)犬腺病毒LAMP試劑盒動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次低溫負(fù)20度一年 2-3周phospho-EIF4EBP1(Ser100) 磷酸化eIF4E結(jié)合蛋白抗體 0.1mlRRAS 原基因R-Ras抗體規(guī)格: 0.2ml

Transmissible Gastroenteritis Virus(TGEV)豬傳染性胃腸炎病毒探針?lè)晒舛縍T-PCR試劑盒動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次低溫負(fù)20度一年 2-3周WNT7B Wnt蛋白家族7B抗體規(guī)格: 0.2mlIL-16 白介素16抗體規(guī)格: 0.1ml

Seneca virus(SVA) 塞內(nèi)卡病毒探針?lè)晒舛縍T-PCR試劑盒動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用） 50次低溫負(fù)20度一年 2-4周ATEXPA10 植物延蛋白（擬南芥）規(guī)格: 1mlMTF-1 金屬應(yīng)答元件結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子-1抗體規(guī)格: 0.2ml

Human Parainfluenza Virus 4A(HPIV-4A)人副流感病毒4A型RT-LAMP試劑盒動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次低溫負(fù)20度一年 2-3周HEF1 蛋白激底物相關(guān)蛋白抗體規(guī)格: 0.2mlMUC15 粘蛋白15抗體規(guī)格: 0.2ml

Aspergillus flavus黃曲霉LAMP試劑盒動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次低溫負(fù)20度一年 2-3周Rabbit Anti-human sIgA/PE-Cy7 PE-Cy7標(biāo)記的兔抗人分泌型IgA 規(guī)格: 0.1mlDonkey Anti-rabbit IgG/PE-CY5 PE-CY5標(biāo)記的驢抗兔IgG 規(guī)格: 0.1ml

Macrobrachium Rosenbergii Nodavirus(MrNV)羅氏沼蝦諾達(dá)病毒探針?lè)晒舛縍T-PCR試劑盒動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次低溫負(fù)20度一年 2-3周RAR Beta 維甲酸受體β抗體規(guī)格: 0.1mlOLIG2 少突膠質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子2抗體規(guī)格: 0.2ml

操作要點(diǎn)：

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無(wú)菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。

2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過(guò)最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。

3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。

4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。

5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。

6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長(zhǎng)至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過(guò)2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。