操作要點：

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。

2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細胞能盡快通過最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。

3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。

4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細胞懸液。

5）將細胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細胞瓶內(nèi)，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。

6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細胞需經(jīng)過2~3次傳代，細胞活力恢復(fù)后才能進行后續(xù)的實驗。

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商品屬性：

細胞培養(yǎng)步驟:

一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:

1) 準(zhǔn)備DMEM-H培養(yǎng)基(DMEM-H:GIBCO,貨號12800017, 添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。

2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3) 凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。

二. 細胞處理:

1) 復(fù)蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。

2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。

細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。

二．細胞處理：

1）復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

食蟹猴 CD32a / Fc gamma RIIA / FCGR2A ELISA配對抗體

人 CD44 ELISA配對抗體

人 CD21 ELISA配對抗體

人 CD19 ELISA配對抗體

人 AFP / alpha-fetoprotein ELISA配對抗體

人 REG4 ELISA配對抗體

小鼠 Endoglin / CD105 / ENG ELISA配對抗體

人 FAS / CD95 / APO-1 / TNFRSF6 ELISA配對抗體

大鼠 ICAM-1 / CD54 ELISA配對抗體

雞外周血單核細胞Arisaema cum bile染料法PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周RAB7  RAS基因相關(guān)蛋白RAB7抗體 規(guī)格: 0.1ml

Rhizopus microspous小孢子酒曲LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 1-2周ZNF431  鋅指蛋白431抗體 規(guī)格: 0.2mlRabbit anti-MG IgG/APC  APC標(biāo)記的兔抗爪沙鼠IgG 規(guī)格: 0.1ml

Bluetongue Virus(BTV)藍舌病病毒8型探針法熒光定量RT-PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周CRCT1  富含半胱C端蛋白1抗體 規(guī)格: 0.2mlphospho-ATF2(Ser94)  磷酸化活化復(fù)制因子2抗體 規(guī)格: 0.1ml

Exocarpium benincasae冬瓜皮染料法PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周ERM/Etv5  轉(zhuǎn)錄因子Ets差異基因5抗體 規(guī)格: 0.2mlhHBrk1  微絲相關(guān)蛋白hHBrk1抗體 規(guī)格: 0.1ml

Akabane Disease Virus(AKAV)牛赤羽病毒RT-LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周G6PDH/H6PD  己糖6磷酸脫抗體 規(guī)格: 0.2mlSMN1  運動神經(jīng)元生存蛋白1 規(guī)格: 0.1ml

Columbid Herpes Virus 1(CHV-1)鴿皰疹病毒1型探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周ETV7  轉(zhuǎn)錄因子ETV7抗體 規(guī)格: 0.2mlpresenilin 1/PS-1 (NT)  早老素蛋白-1抗體 規(guī)格: 0.1ml

Aster yellows phytoplasma翠菊黃化病植原體PCR試劑盒 植物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周Phospho-BLNK(Tyr96)  磷酸化T淋巴細胞連接蛋白抗體 規(guī)格: 0.1mlLaminin B2 gamma 1  層粘連蛋白B2γ1抗體 規(guī)格: 0.1ml

Eperythrozoon ovis綿羊附紅  體（綿羊嗜血支原體）探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用） 50次 低溫 負20度 一年 2-3周Rabbit Anti-Biotin/Alexa Fluor 555  Alexa Fluor 555標(biāo)記的兔抗抗體IgG 規(guī)格: 0.1mlNanog  胚胎干細胞關(guān)鍵蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml

Neisseria meningitidis腦膜炎奈瑟LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周Persephin  PSP抗體 規(guī)格: 0.1mlMMP-7  基質(zhì)金屬蛋白-7抗體 規(guī)格: 0.1ml

Theileria buffeli水牛泰勒蟲探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周EPCR/CD201  內(nèi)皮細胞活化蛋白受體抗體 規(guī)格: 0.2mlphospho-EGFR (Tyr1092)  磷酸化表皮生因子受體抗體 規(guī)格: 0.1ml