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漆酶試劑盒測定步驟

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漆酶試劑盒測定意義漆酶(Laccase)是一種含銅的多酚氧化酶,屬于銅藍氧化酶家族,廣泛分布于真菌和高等植物中,具有較強的氧化還原能力,在紙漿生物漂白,環(huán)境污染物降解和木質(zhì)纖維素降解以及生物檢測方面有非常廣泛的應(yīng)用。

樣品測定的準(zhǔn)備:

1、細胞、細菌或組織樣品的制備 :

細菌或細胞:先收集細菌或細胞到離心管內(nèi),棄上清;按照每100萬細菌或細胞加入1mL提取液,超聲波破碎細菌或細胞(功率20%,超聲3秒,間隔10秒,重復(fù)30次),之后置沸水浴振蕩提取10min;10000g,常溫離心10min,取上清,冷卻后待測。

組織:稱取約0.1g組織,加入1mL提取液進行冰浴勻漿;之后置沸水浴振蕩提取10min,10000g,常溫離心10min,取上清,冷卻后待測。

2、血清(漿)樣品:取100μL血清(漿)加入1mL提取液,充分混勻,之后置沸水浴振蕩提取10分鐘,10000g,常溫離心10分鐘,取上清,冷卻后待測。

3、標(biāo)準(zhǔn)品的處理:稱取1mg,將標(biāo)準(zhǔn)品稀釋為15、10、8、6、4、2、1、0 μg/ml。

漆酶試劑盒測定步驟:

1、分光光度計預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至520nm,蒸餾水調(diào)零。

2、取0.5mL上清液(或稀釋后的標(biāo)準(zhǔn)品)+0.5mL試劑一+0.5mL試劑二于有蓋試管中,置沸水浴中保溫30min(蓋緊,防止水分散失),每10min振蕩一次。

3、待冷卻后,在試管中加入1mL試劑三,振蕩30s,靜置片刻,使色素轉(zhuǎn)至試劑三;吸取0.8mL-1mL上層溶液于1mL玻璃比色皿中,用試劑三調(diào)零,于520nm波長處比色,記錄吸光值。

4、根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品吸光值和濃度,建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。

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