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185次豚鼠白介素2elisa檢測試劑盒的試劑盒的組成:
組成:
(1)結(jié)合物及標(biāo)本的稀釋液;
(2)洗滌液,在板式ELISA中,常用的稀釋液為含0.05%吐溫20磷酸緩沖鹽水;
(3)酶標(biāo)記的抗原或抗體(結(jié)合物);
(4)酶的底物;
(5)陰性對照品和陽性對照品(定性測定中),elisa試劑盒參考標(biāo)準(zhǔn)品和控制血清(定量測定中);
(6)已包被抗原或抗體的固相載體(免疫吸附劑)
豚鼠白介素2elisa檢測試劑盒的操作步驟
1.加樣:分別設(shè)標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔、空白孔。設(shè)標(biāo)準(zhǔn)孔 7 孔,依次加入 100μL 不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品 (見試劑準(zhǔn)備 2)。空白孔加 100μL(見試劑準(zhǔn)備第二步*后一管),余孔加待測樣品 100μL,酶標(biāo)板加上覆膜,37℃ 溫育 2 小時(shí)。
2.棄去液體,甩干,不用洗滌。
3.每孔加檢測溶液 A 工作液 100μL(臨用前配制),酶標(biāo)板加上覆膜,37℃ 溫育 1 小時(shí)。
4.棄去孔內(nèi)液體,每孔用 300μL 的洗滌液洗滌,浸泡 1-2 分鐘,吸去 (不可觸及板壁) 或甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體,在實(shí)驗(yàn)臺上鋪墊幾層吸水紙,酶標(biāo)板朝下用力拍幾次 (也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干),重復(fù)洗板 3 次。*后一次洗滌后,要把孔內(nèi)的洗滌液*甩干。自動(dòng)洗板機(jī)亦可。
5.每孔加檢測溶液 B 工作液 (臨用前配制)100μL,加上覆膜,37℃ 溫育 1 小時(shí)。
6.棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板 5 次,方法同步驟 4。
7.每孔加底物溶液 90μL,酶標(biāo)板加上覆膜,37℃ 避光顯色 (反應(yīng)時(shí)間控制在 15-25 分鐘,不要超過 30 分鐘。當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)孔的前 3-4 孔有明顯的梯度藍(lán)色,后 3-4 孔梯度不明顯時(shí),即可終止)。
8.每孔加終止溶液 50μL,終止反應(yīng),此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物溶液的加入順序相同。如出現(xiàn)顏色不勻一,請輕輕晃動(dòng)酶標(biāo)板以使溶液混合均勻。
9.在確保酶標(biāo)板底無水滴及孔內(nèi)無氣泡后,立即用酶標(biāo)儀在 450nm 波長測量各孔的光密度 (O.D. 值)。
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