大鼠elisa檢測試劑盒免疫熒光方法中的重要環(huán)節(jié)
前幾日在*新舉辦的技術(shù)探討會(huì)議上有同事提出關(guān)于成功測定免疫熒光方法中的重要環(huán)節(jié)該注意什么，對(duì)此小編特別將技術(shù)部發(fā)布的九點(diǎn)具體技術(shù)攻略整理編輯，希望可以幫到大家，感謝您對(duì)上海恒遠(yuǎn)的信賴與支持，祝大家實(shí)驗(yàn)成功！
1、冰凍切片制備：建議用新鮮組織，否則組織細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)破壞，易使抗原彌散。選用干凈鋒利的刀片、組織一定要冷凍適度等，防止裂片和脫片嚴(yán)重。
2、組織切片固定：切好片風(fēng)干后立即用冰丙酮等固定液進(jìn)行固定5-10min，尤其要較長時(shí)間保存的白片，一定要及時(shí)固定和適當(dāng)保存。
3、血清封閉：為防止內(nèi)源性非特異性蛋白抗原的結(jié)合，需要在一抗孵育前先用血清（與二抗來源一致）封閉，減弱背景著色。血清封閉的時(shí)間是可以調(diào)整的，一般10-30min。
4、一抗孵育條件：在免疫組化反應(yīng)中*重要，包括孵育時(shí)間和抗體濃度。一抗孵育溫度有幾種：4度、室溫、37度，其中4度效果時(shí)：這與溫度、抗體濃度有關(guān)，一般37度1-2h，而4度過夜和從冰箱拿出后37度復(fù)溫45min。具體條件還要摸索。
5、二抗孵育條件：二抗一般室溫或37度30min-1h，具體時(shí)間需要摸索，而濃度一般有工作液，若是濃縮液還要摸索濃度，切記要避光反應(yīng)。但在免疫熒光中我們一般先把二抗?jié)舛群头跤龝r(shí)間先定下，然后去摸索一抗?jié)舛群头跤龝r(shí)間。*后，熒光素標(biāo)記的二抗隨著保存時(shí)間的延長，可能后有大量的游離熒光素殘留，需要注意配制時(shí)小包裝和并進(jìn)行適當(dāng)?shù)碾x心。
6、復(fù)染：目的是形成細(xì)胞輪廓，從而更好地對(duì)目標(biāo)蛋白進(jìn)行定位。一般常用DAPI復(fù)染。
7、封片：為了長期保存，我們一般用緩沖甘油等封片，此外還有專門的抗熒光萃滅封片液。避免產(chǎn)生氣泡，方法是直接在載玻片組織上滴一滴封片液，然后一手拿住蓋片某一拐角，而另一手拿對(duì)面的那個(gè)拐角，接近封片液近端的拐角先降低，直至接觸到液體時(shí)為止；當(dāng)發(fā)現(xiàn)液體接觸面在不斷彌散時(shí)，則可以緩慢降低另一拐角，這樣一般不會(huì)產(chǎn)生氣泡。
8、切片清洗：為了防止一抗、二抗等試劑殘留而引起非特異性染色，所以適當(dāng)?shù)丶訌?qiáng)清洗（延長時(shí)間和增多次數(shù)）尤為重要，我一般在一抗孵育前的清洗是3min*3次，而一抗孵育后的清洗均為5次*5min。注意（1）單獨(dú)沖洗，防止交叉反應(yīng)造成污染。（2）溫柔沖洗，防止切片的脫落。我喜歡用浸洗方式；（3）沖洗的時(shí)間要足夠，才能*洗去結(jié)合的物質(zhì)。（4）PBS的PH和離子強(qiáng)度的使用和要求。這方面我有慘痛教訓(xùn)，當(dāng)時(shí)我買的抗體稀釋液偏酸，結(jié)果背景一片黃（未見特異性染色），建議PH在7.4-7.6濃度是0.01M。（中性及弱鹼性條件（PH7－8）有利于免疫復(fù)合物的形成，而酸性條件則有利于分解；低離子強(qiáng)度有利于免疫復(fù)合物的形成，而高離子強(qiáng)度則有利于分解）
9、拍照：有條件的話立即拍照，若不能及時(shí)拍照，也要封好片和用指甲油封固，保持避光和濕度。使用熒光顯微鏡注意嚴(yán)格按照熒光顯微鏡出廠說明書要求進(jìn)行操作，不要隨意改變程序；應(yīng)在暗室中進(jìn)行檢查；防止紫外線對(duì)眼睛的損害，在調(diào)整光源時(shí)應(yīng)戴上防護(hù)眼鏡；檢查時(shí)間每次以1~2h為宜，超過90min，超高壓汞燈發(fā)光強(qiáng)度逐漸下降，熒光減弱；標(biāo)本受紫外線照射3~5min后，熒光也明顯減弱或褪色；激發(fā)光長時(shí)間的照射，會(huì)發(fā)生熒光的衰減和淬滅現(xiàn)象；所以*多不得超過2~3h；熒光顯微鏡光源壽命有限，標(biāo)本應(yīng)集中檢查，以節(jié)省時(shí)間，保護(hù)光源。天熱時(shí)，應(yīng)加電扇散熱降溫，新?lián)Q燈泡應(yīng)從開始就記錄使用時(shí)間。燈熄滅后欲再啟用時(shí)，須待燈光充分冷卻后才能點(diǎn)燃。一天中應(yīng)避免數(shù)次點(diǎn)燃光源。關(guān)閉汞燈至少在開啟15-30分鐘后；標(biāo)本染色后立即觀察，因時(shí)間久了熒光會(huì)逐漸減弱。若將標(biāo)本放在聚乙烯塑料袋中4℃保存，可延緩熒光減弱時(shí)間，防止封裱劑蒸發(fā)；使用的玻片等載體，都必須厚度均勻，無明顯的自發(fā)熒光，如果使用油鏡，還必須保證鏡油為無熒光鏡油；電源裝穩(wěn)壓器，否則電壓不穩(wěn)不僅會(huì)降低汞燈的壽命，也會(huì)影響鏡檢的效果。
大鼠elisa檢測試劑盒腎上腺皮質(zhì)抗體(ACA)ELISA試劑盒 ，英文名： PTK ELISA Kit

蛋白聚糖4(PRG4)ELISA試劑盒 ，英文名： PRG4 ELISA Kit

蛋白聚糖(PG)ELISA試劑盒 ，英文名： PG ELISA Kit

蛋白精氨酸脫亞氨酶4(PADI4)ELISA試劑盒 ，英文名： PADI4 ELISA Kit

蛋白精氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶1(PRMT1)ELISA試劑盒 ，英文名： PRMT1 ELISA Kit

蛋白激酶C(PKC)ELISA試劑盒 ，英文名： PKC ELISA Kit

蛋白激酶C beta II(PKC-bII)ELISA試劑盒 ，英文名： PKC-bII ELISA Kit

蛋白激酶B(PKB)ELISA試劑盒 ，英文名： PKB ELISA Kit

蛋白激酶A(PKA)ELISA試劑盒 ，英文名： PKA ELISA Kit

蛋白基因產(chǎn)物9.5(PGP 9.5)ELISA試劑盒 ，英文名： PGP 9.5 ELISA Kit

蛋白二硫化物異構(gòu)酶前體(PDI)ELISA試劑盒 ，英文名： PDI ELISA Kit

蛋白二硫化物異構(gòu)酶A3(PDIA3)ELISA試劑盒 ，英文名： PDIA3 ELISA Kit

蛋白Z(Protein Z)ELISA試劑盒 ，英文名： Protein Z ELISA Kit

蛋白S(ProteinS)ELISA試劑盒 ，英文名： ProteinS ELISA Kit

蛋白S(Protein S)ELISA試劑盒 ，英文名： Protein S ELISA Kit

蛋白C(ProteinC)ELISA試劑盒 ，英文名： ProteinC ELISA Kit

蛋白C(Protein C)ELISA試劑盒 ，英文名： Protein C ELISA Kit

蛋白C(PC)ELISA試劑盒 ，英文名： PC ELISA Kit

蛋白ATP1B4(ATP1B4)ELISA試劑盒 ，英文名： ATP1B4 ELISA Kit

蛋白(肽酰脯氨酰順/反異構(gòu)酶)NIMA結(jié)合1(PIN1)ELISA試劑盒 ，英文名： PIN1 ELISA Kit

蛋白 DJ-1(PARK7)ELISA試劑盒 ，英文名： PARK7 ELISA Kit

彈性蛋白酶(Elastase)ELISA試劑盒 ，英文名： Elastase ELISA Kit

彈性蛋白(ELN)ELISA試劑盒 ，英文名： ELN ELISA Kit

膽酸(Cholic acid)ELISA試劑盒 ，英文名： Cholic acid ELISA Kit

膽酸(CA)ELISA試劑盒 ，英文名： CA ELISA Kit

膽囊收縮素/縮膽囊素八肽(CCK-8)ELISA試劑盒 ，英文名： CCK-8 ELISA Kit

膽囊收縮素/腸促胰酶肽(CCK)ELISA試劑盒 ，英文名： CCK ELISA Kit

膽囊收縮素(CCK)ELISA試劑盒 ，英文名： CCK ELISA Kit

膽堿轉(zhuǎn)運(yùn)體樣蛋白4(SLC44A4)ELISA試劑盒 ，英文名： SLC44A4 ELISA Kit

膽堿乙酰轉(zhuǎn)移酶(ChAT)ELISA試劑盒 ，英文名： ChAT ELISA Kit

膽堿乙?；?CHAc)ELISA試劑盒 ，英文名： CHAc ELISA Kit大鼠elisa檢測試劑盒