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ELISA可用于測(cè)定抗原,也可用于測(cè)定抗體。這種測(cè)定方法中有3種必要的試劑:1.固相的抗原或抗體;2.酶標(biāo)記的抗原或抗體;3.酶作用的底物。
根據(jù)試劑的來(lái)源和標(biāo)本的性狀及檢測(cè)的具備條件,可設(shè)計(jì)出各種不同類型的檢測(cè)方法。
1.雙抗體夾心法測(cè)抗原
針對(duì)抗原分子上兩個(gè)不同抗原決定簇的單克隆抗體分別作為固相抗體和酶標(biāo)抗體。適用于測(cè)定二價(jià)或二價(jià)以上的大分子抗原,不適用于測(cè)定半抗原及小分子單價(jià)抗原,因其不能形成兩位點(diǎn)夾心。
2.競(jìng)爭(zhēng)法測(cè)抗原
首先將特異性抗體包被于固相載體表面,經(jīng)洗滌后分成兩組:一組加酶標(biāo)記抗原和被測(cè)抗原的混合液,另一組只加酶標(biāo)記抗原,經(jīng)孵育洗滌后加底物顯色,這兩組底物降解量之差,即為所要測(cè)定的未知抗原的量。此方法測(cè)定的抗原只要有一個(gè)結(jié)合部位即可,對(duì)小分子抗原如激素和藥物類的測(cè)定常用此法。優(yōu)點(diǎn)是快,缺點(diǎn)是需要較多量的酶標(biāo)記抗原。
3.免疫抑制法測(cè)抗原
被檢標(biāo)本對(duì)底物顯色的抑制程度與標(biāo)本中所含抗原的量成正比,二者之差即為預(yù)測(cè)抗原的量。
4.間接法測(cè)抗體
是檢測(cè)抗體常用的方法,原理為利用酶標(biāo)記的抗抗體以檢測(cè)已與固相結(jié)合的受檢抗體。
本法只要更換不同的固相抗原,可以用一種酶標(biāo)抗體檢測(cè)各種與抗原相應(yīng)的抗體。主要用于對(duì)病原體的檢測(cè)而進(jìn)行傳染病的診斷。
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