1）加入1ml Trizol試劑，混勻，冰上孵育10min。

2）4℃，12000rpm離心10min，小心轉(zhuǎn)移上清液到不含顆粒的新EP管中。

3）加入200ul氯仿，劇烈振蕩15秒，室溫孵育5min。

4）4℃，12000rpm離心15min?；旌弦悍秩龑樱ㄗ钕旅娴?span style="font-family: arial; font-size: 20px; font-weight: 600; background-color: rgb(255, 255, 255);">C6H5OH - 氯仿有機(jī)相，中間相和上層水相。小心轉(zhuǎn)移上層水相到新的EP管（大約60％體積的Trizol），不要吸取中間相，可留下少量上層液體?。∟ote：質(zhì)量比數(shù)量更重要?。?/span>

5）加入等體積的異丙醇，輕輕地顛倒混勻約10次，室溫放置10min。

6）4℃，12000rpm離心10min。棄上清，1ml 75％乙醇洗滌RNA沉淀兩次。

7）4℃，12000rpm離心5min，棄上清，室溫下風(fēng)干5-10min（不要太干，過度干燥會(huì)導(dǎo)致RNA難溶解！）。將RNA溶于15μl-50μlDEPC水中。

8）立即進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，或先-80℃長(zhǎng)期保存。