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源性RNA酶污染RNA制品途徑

時(shí)間:2024/8/5閱讀:150
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外源性RNA酶可以通過(guò)下述途徑污染RNA制品:
1、玻璃制品、塑料制品和電泳槽 滅菌的一次性使用的塑料制品基本上無(wú)RNA酶,可以不經(jīng)預(yù)處理直接用于制備和貯存RNA。實(shí)驗(yàn)室用的普通玻璃器皿和塑料制品經(jīng)常有RNA酶法染,使用前必須于180 ℃干烤8小時(shí)或更長(zhǎng)時(shí)間(玻璃器皿)或用氯仿沖洗(塑料制品)。另一種方法是用0.1 %焦碳酸二乙酯(DEPC)的水溶液浸泡用于制備RNA的燒杯,試管和其他用品。DEPC是RNA酶的強(qiáng)烈抑制劑,但其作用并不是絕對(duì)的(Fedorcsak和Ehrenberg,1966)。灌滿DEPC的玻璃或塑料器皿在37℃放置2小時(shí),然后用滅菌水淋洗數(shù)次, 并于100℃干烤15分鐘(Kumar和Lindberg,1972)。在15 lbf/in2(1.034x105Pa)高壓蒸氯滅菌15分鐘。上述處理可以除去器甲上痕量的DEPC,以防DEPC通過(guò)羧甲基化作用對(duì)RNA的嘌呤堿基進(jìn)行修飾。
  羧甲基化的RNA在無(wú)細(xì)胞體系中翻譯效率很低,然而,除非其中大部分嘌呤堿基均被修飾,否則其形成DNA:RNA或RNA:RNA雜交休的能力并不明顯降低。用于RNA電泳的電泳槽應(yīng)用去污劑洗干凈,再用水沖洗,用乙醇干燥,然后灌滿3%的H2O2溶液,于室溫放置10分鐘,然后用0.1 %DEPC處理過(guò)的水徹di沖洗電泳槽。最好能留出一些玻璃器皿、塑料制品和電泳槽作上特殊標(biāo)記,存放在zhi定地點(diǎn),為RNA實(shí)驗(yàn)專(zhuān)用。
2、研究人員造成的污染 RNA酶最主要的潛在污染源是研究人員的手。因此,在準(zhǔn)備分離的和分析RNA的材料和溶液時(shí),主有涉及RNA的一切操作過(guò)程中,都應(yīng)戴一次性手套,接觸“胖的"玻璃器皿和其他物品以后,手套就可能沾染上RNA酶,因此進(jìn)行RNA實(shí)驗(yàn)時(shí)應(yīng)勤換手套。
3、污染的溶液 用高壓滅菌的水和RNA研究專(zhuān)用的化學(xué)試劑配制溶液,用干烤過(guò)的藥匙稱(chēng)取試劑,將溶液裝入無(wú)RNA酶的玻璃器皿??赡艿脑捜芤壕鶓?yīng)用0.1%DEPC于37℃至少處理12小時(shí),然后于100℃加熱15分鐘或在15lbf/in2(1.034x105Pa)的高壓下蒸氣滅菌15分鐘。注:DEPC可與胺類(lèi)迅速發(fā)生化學(xué)反應(yīng),因些不能用來(lái)處理含有Tris 一類(lèi)的緩沖液。可存幾瓶新的未開(kāi)封的Tris晶體以制備無(wú)RNA酶的溶液。

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