ELISA試劑盒靈敏性判斷的話，因?yàn)楦鞣NELISA試劑盒的機(jī)能之間沒有明顯的水平差異，但是在InBios試劑盒檢測到的數(shù)據(jù)體現(xiàn)愈甚的原尺度低（P / N <10）以及介質(zhì)（10≤P / N <20）CDC JEV IgM抗體陽性標(biāo)本的XCyton套件。不亂性包含長期不亂性，開蓋不亂性，運(yùn)輸不亂性，有必要還要添加熱加速不亂性等。拿核酸類試劑來說，敏捷度有的時(shí)候叫*低檢測線，就是拿一個(gè)已知濃度樣本稀釋下去，直到試劑盒檢測不出來為止，從而得到該試劑盒敏捷度到什么程度，特異性就是用該試劑盒檢測與目的病原微生物在相同感染部位的陰性樣本，檢測試劑盒是否泛起假陽性結(jié)果，精密型比較簡樸，檢測一份接近但高于*低檢測線樣本重復(fù)十次，計(jì)算CV值，一般核酸類試劑要求小于5%，酶免不清晰。 假如要判定ELISA試劑盒的敏捷度，樣品應(yīng)該著眼于四周的疾病預(yù)防控制中央的數(shù)據(jù)為根據(jù)，對試劑盒的敏捷度進(jìn)行了分析，通過對比套件結(jié)果與CDC日本腦炎病毒IgM抗體陽性的結(jié)果，以及從疾病的發(fā)病樣品采集的天數(shù)分類，有著明顯的機(jī)能差異。通過試劑盒的檢測結(jié)果與CDC日本腦炎病毒IgM抗體陽性的結(jié)果進(jìn)行了對比確定的尺度：分為低、中、高，其主要依據(jù)是看比例。

底物范圍較廣，包括二氨基聯(lián)苯胺(DAB)、氯萘酚和氨乙基咔唑等。HRP底物范圍較廣，包括二氨基聯(lián)苯胺(DAB)、氯萘酚和氨乙基咔唑等。

一、二氨基聯(lián)苯胺／金屬鹽

DAB是辣根過氧化物酶最敏感、常用的底物。它產(chǎn)生強(qiáng)烈的棕色產(chǎn)物，在水和醇中不溶解。多數(shù)情況下，推薦在DAB中加入不同的金屬離子。當(dāng)加入金屬鹽如鈷、鎳至底物液中，辣根過氧化物酶可以更加敏感。此類反應(yīng)產(chǎn)物呈暗藍(lán)灰色至黑色，且在水及醇中穩(wěn)定。DAB／金屬鹽染色應(yīng)用的組織染色范圍較廣。

1.     需要的溶液和特殊設(shè)備

DAB，0.05 mol／LTris緩沖液(pH7.6), 0.3％ (W/V) 氯化鎳/水貯存液, 30％過氧化氫, DPX, 光學(xué)顯微鏡(通常帶有照相機(jī)以便于記錄結(jié)果).

2.     操作步驟

(1) 用 9 mL 0.05 mol/L Tris緩沖液(pH7.6)溶解6 mg DAB；

(2) 加 l mL 0.3％(W/V)氯化鎳/水貯存液(也可以用等量的氯化鈷替代)；

(3) 加0.1 mL 3％過氧化氫。過氧化氫一般以30％的溶液提供，貯存在4 ℃，此條件可以持續(xù)1個(gè)月；

(4) 如果出現(xiàn)沉淀，用濾紙過濾；

(5) 加此溶液至標(biāo)本，并孵育1~20 min水洗終止反應(yīng)；

(6) 優(yōu)化：如果需要可復(fù)染；

(7) 用DPX封片。

二、氯萘酚

氯萘酚可以形成一種藍(lán)黑色產(chǎn)物。敏感性低于DAB，且產(chǎn)物可溶于醇中。它適用于當(dāng)DAB反應(yīng)形成較高背景或要求改變產(chǎn)物的顏色。

1.     需要的溶液和特殊設(shè)備

0.03％氯萘酚，用無水乙醇溶解(貯存在-20℃)，0.05 mol／LTris(pH7.6)，過氧化氫，Gelvatol或者M(jìn)owiol，光學(xué)顯微鏡(通常帶有照相機(jī)以便于記錄結(jié)果)。

2.     操作步驟

(1) 氯萘酚貯存液的準(zhǔn)備：用10 mL無水乙醇溶解0.3 g氯萘酚，貯存于-20℃；

(2) 加100 μL 氯萘酚貯存液至10 mL 0.05 mol/LTris(pH7.6)；

(3) 加0.1 mL 3％過氧化氫于水中。過氧化氫一般是以30％的溶液提供，4℃可存放1個(gè)月；

(4) 白色沉淀可用濾紙過濾去除；

(5) 加此溶液到標(biāo)本中，并在室溫孵育10～40 min，水洗終止反應(yīng)；

(6) 優(yōu)化：如果需要，進(jìn)行復(fù)染，但只可使用水溶性染料；

(7) 用Gelvatol或者M(jìn)owiol封片。

三、氨乙基咔唑

氨乙基咔唑(AEC)產(chǎn)生紅色產(chǎn)物，其敏感性低于DAB，但可用于DAB反應(yīng)產(chǎn)生較高背景或要求改變產(chǎn)物顏色的實(shí)驗(yàn)。此產(chǎn)物可溶于醇，但不溶于水。

1.     需要的溶液和特殊設(shè)備

0.4％ AEC用 N,N—二甲基甲酰胺(DMF)溶解， 0.1 mol/L乙酸鈉緩沖液(pH5.2)，過氧化氫， Gelvatol或Mowiol，光學(xué)顯微鏡(通常帶有照相機(jī)以便于記錄結(jié)果)。

2.     操作步驟

(1) 用 l mL DMF溶解 4 mg AEC。AEC在DMF中穩(wěn)定，因此，可以用100 mL DMF溶解0.4 g AEC作為貯存液備用；

(2) 加 l mL AEC溶液至15 mL 0.1 mol/L的乙酸鈉緩沖液(pH5.2)中，并攪拌；

(3) 加0.15 mL 3％過氧化氫于水中。過氧化氫一般是30％的溶液提供，在4℃可存放1個(gè)月；

(4) 用濾紙過濾；

(5) 加此溶液到標(biāo)本中，并于室溫孵育10～40 min，水洗終止反應(yīng)；

(6) 優(yōu)化：如果需要復(fù)染，只可用水溶性染料；

(7) 用Gelvatol或Mowiol封片。