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elisa檢測試劑盒原理的程序

時間:2020/10/14閱讀:263
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elisa檢測試劑盒原理:

    采用競爭法測定金黃地鼠氧化elisa檢測試劑盒水平。用金黃地鼠氧化抗原包被微孔板,制成固相載體,實驗時依次在微孔板中加入標(biāo)本及標(biāo)準(zhǔn)品,并加入HRP標(biāo)記的OXLDL抗體,標(biāo)本及標(biāo)準(zhǔn)品中的抗體和一定量的酶標(biāo)抗體競爭與固相抗原結(jié)合。反復(fù)洗滌后加底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化為藍(lán)色,再用硫酸終止反應(yīng),轉(zhuǎn)變成黃色。標(biāo)本中抗體量越多,結(jié)合在固相上的酶標(biāo)抗體愈少,顏色越淺。顏色的深淺和樣品中的OXLDL含量呈負(fù)相關(guān)。采用酶標(biāo)儀在450nm波長測定吸光度(OD值),根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線,計算測試樣品中OXLDL濃度。

elisa檢測試劑盒操作程序:

1. 棄去液體,甩干,每孔加滿稀釋后洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。如此重復(fù)5次,拍干。

2. 每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘。。

3. 取出酶標(biāo)板,每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。

4.測定:以空白孔調(diào)零,在450nm波長下測量各孔的吸光度值(OD值)。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

5.根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的濃度及對應(yīng)的OD值計算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程,再根據(jù)elisa檢測試劑盒樣品的OD值在回歸方程上計算出對應(yīng)的樣品濃度。也可以使用各種應(yīng)用軟件來計算。應(yīng)記住由于樣品稀釋了的,其實際濃度應(yīng)該乘以總稀釋倍數(shù)。

elisa檢測試劑盒試劑盒性能:

1. 準(zhǔn)確性:標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值,大于等于0.9900。

2. 靈敏度:zui低檢測濃度小于(參考說明書)

3. 特異性:不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。

4. 重復(fù)性:板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于15%。

5. 貯藏:2-8℃,避光防潮保存。

6. 有效期:6個月。 

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