當前位置:上海邦景實業(yè)有限公司>>技術文章>>骨骼肌細胞純化的具體辦法
骨骼肌細胞的貼壁速度比非肌源性細胞慢,為此,可以用差速貼壁法取得較高純度的肌源性細胞。具體辦法是:
1.取原代培育早期的細胞(培育30~40h),經(jīng)洗刷后,用0.25%的胰蛋白酶溶液消化。細胞開端脫壁時以馬血清停止消化。
2.搜集脫壁的細胞,洗刷后用培育液制備成細胞懸液。
3.當即接種到另一培育板上,貼壁40min。此時,大都非肌源性細胞現(xiàn)已貼壁,而骨骼肌細胞仍懸浮在培育液中,或沉降到培育板上但未貼壁。
4.吸出未貼壁細胞,計數(shù)后將細胞調至所需細胞濃度,進行接種。
5.接種后,骨骼肌細胞純度可到達90%以上。該辦法亦可用于直接經(jīng)胰蛋白酶溶液消化的肌肉組織細胞。
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