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大鼠組織多肽抗原elisa檢測試劑盒的操作步驟

時間:2018/12/20閱讀:277
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大鼠組織多肽抗原elisa檢測試劑盒  操作步驟

1. 標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

800 ng/L

5號標準品

150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液

400 ng/L

4號標準品

150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液

200 ng/L l

3號標準品

150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液

100 ng/L

2號標準品

150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液

50 ng/L

1號標準品

150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液

2. 加 樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣 品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。

3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。   

4. 配液:將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用

5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。

6. 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。

7. 溫育:操作同3。

8.洗滌:操作同5。

9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.

10.終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。

11.測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。

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