肉，蛋，飼料抗生素殘留檢測(cè)試劑盒介紹：
EXPLORER 是一種檢測(cè)原料肉和蛋里面抑制劑和抗生素殘留的試劑。這是一種快速簡單的方法，
可以在4 個(gè)小時(shí)內(nèi)檢測(cè)到樣品里面的抗生素藥物是否超標(biāo)（超過歐盟規(guī)定MRL）。

原理：
EXPLORER 的原理是基于抑制微生物生長。肉，蛋，飼料抗生素殘留檢測(cè)試劑盒是以96 孔板的形式來設(shè)計(jì)，每個(gè)小孔里面都
含有均勻擴(kuò)散了geobacillus stearothermophilus 孢子的瓊脂培養(yǎng)基，同時(shí)還含有氧化還原指示劑。
當(dāng)試劑孔在 65℃培養(yǎng)時(shí)，孢子開始被激活，并且生長繁殖，細(xì)胞的生長改變了培養(yǎng)基里面的氧化
還原潛力，使瓊脂的顏色從藍(lán)色變成橘紅色（橙色）。如果樣品內(nèi)的抗生素濃度超過了試劑盒的檢
測(cè)限，則孢子就不會(huì)被激活，細(xì)菌就不會(huì)生長繁殖，瓊脂的顏色不會(huì)改變。

組成：
可獨(dú)立拆分的檢測(cè)板--96個(gè)檢測(cè)--480個(gè)檢測(cè)
微孔板--1--5
粘膠紙--2--10
產(chǎn)品規(guī)格書--有--有

穩(wěn)定性和儲(chǔ)藏：
試劑盒要存放在 4-12℃的環(huán)境中，并且避光保存。在適合環(huán)境保存可以存放6 個(gè)月，具體的保質(zhì)
期在試劑板的上面。

附加設(shè)備（試劑盒不包括的）：
微量加樣槍
恒溫器（FX INCUBATOR，由ZEU 公司提供），或者水浴和恒溫箱（可以調(diào)到65℃）
磁力攪拌機(jī)
分析天平
肝樣稀釋溶液-EX（稀釋肝樣的溶液）（產(chǎn)品訂貨號(hào)：ZE/EX/SOLD8）
肉和肝的陰性控制樣（無抗生素標(biāo)準(zhǔn)樣品）（產(chǎn)品訂貨號(hào)：ZE/EX/CN1/1，ZE/EX/CN1/5）
蛋的陰性控制樣（無抗生素標(biāo)準(zhǔn)樣）（產(chǎn)品訂貨號(hào)：ZE/EX/CN2）
飼料陰性控制樣：PBST（看樣品準(zhǔn)備過程中有列出組成成分）
陽性控制樣 —— 凍干的* G（可選，ZEU 公司提供，貨號(hào)ZE/PG5）
 
安全：
在使用本試劑時(shí)*使用良好實(shí)驗(yàn)室操作規(guī)范，MSDS 可以找當(dāng)?shù)氐慕?jīng)銷商或者ZEU 公司；

注意：
◆ 陰性控制樣是用來決定每次檢測(cè)時(shí)的培養(yǎng)時(shí)間，在附加材料里面查看肉、肝、腎、蛋的陰
性控制參數(shù)。PBST 是飼料的陰性控制樣（在樣品準(zhǔn)備過程中看組成）；
◆ *使用陽性控制樣（高濃度抗生素殘留的樣品）；
◆ 每次必須使用新的加樣頭；
◆ 肝樣需要添加附加的溶液（看樣品準(zhǔn)備有介紹，或者供應(yīng)商）；
◆ 切碎的肉，閹制的肉，以及煙熏肉等等因?yàn)樗麄儽旧淼奈锢硪约盎瘜W(xué)的一些特點(diǎn)會(huì)抑制本試劑
的微生物生長，這種抑制現(xiàn)象與肉里面的抗生素以及磺胺藥物的殘留無關(guān)；
◆ 樣品收集后必須馬上開始實(shí)驗(yàn)，在冷藏環(huán)境下不能超過24 小時(shí)，冷凍可以保持較長時(shí)間；
◆ 樣品的添加量非常重要，所以必須矯正加樣槍；
◆ 每一次必須使用新的加樣頭；
◆ 使用直徑為1.5cm 的耐熱塑料管或者玻璃管作為樣品準(zhǔn)備容器；
◆ 本檢測(cè)試劑對(duì)任何抗生素和任何的抑制物（例如消毒劑和清潔劑）都特別的敏感，所以要避免
這些抑制物的污染；

樣品準(zhǔn)備
鮮肉樣品準(zhǔn)備：
1． 稱取 3±0.5 克沒有脂肪或者其他組織的一片瘦肉樣品，剪成小碎片
2． 把瘦肉樣品放入玻璃杯或者直徑 1.5CM 的耐熱塑料管中，密封
3． 在 100℃的水浴中加熱3±0.5 分鐘
4． 把試管浸在冷水中降溫
5． 用鑷子來擠壓肉碎片，盡可能多的擠出肉汁
6． 把肉汁在 2000 轉(zhuǎn)/分鐘下離心3 分鐘（*用eppendorf 離心機(jī)），取上清液?；蛘咭灿?br>0.45um 的濾膜過濾，取濾液
7． 加 100ul 的濾液或者離心后上清液到檢測(cè)微孔開始實(shí)驗(yàn)
肝樣品的準(zhǔn)備：
1． 切取 10±0.5 克肝組織，切成碎片
2． 把樣品放入玻璃杯或者直徑 1.5CM 的耐熱塑料管中，密封
3． 在 100℃的水浴中加熱12±0.5 分鐘
4． 把試管浸在冷水中降溫
5． 把肉汁在 2000 轉(zhuǎn)/分鐘下離心3 分鐘（*用eppendorf 離心機(jī)），取上清液；或者也用
0.45um 的濾膜過濾，取濾液
6． 取 200ul 的汁液，和100ul 的肝稀釋液混合-EX( ZE/EX/SOLD8)；制備成待檢液
7． 加 100ul 混合后待檢液到檢測(cè)微孔開始實(shí)驗(yàn)。
腎臟樣品的準(zhǔn)備：
1． 切取 5±0.5 克腎臟組織（連帶皮和髓汁）
2． 把樣品放入玻璃杯或者直徑 1.5CM 的耐熱塑料管中，密封
3． 在 100℃的水浴中加熱4±0.5 分鐘
4． 把試管浸在冷水中降溫
5． 把肉汁在 2000 轉(zhuǎn)/分鐘下離心3 分鐘（*用eppendorf 離心機(jī)），取上清液；或者也用
0.45um 的濾膜過濾，取濾液
6． 加 100ul 濾液或者上清液到檢測(cè)微孔開始實(shí)驗(yàn)
飼料樣品的準(zhǔn)備：
1． 稱取 1±0.1 克均勻的飼料樣品，放入清潔的試管密封
2． 加 20ml 的預(yù)熱后的PBST（大約40℃）
PBST（5 升）：45 克NaCl，80ml 濃度為0.5 摩爾的*溶液（K2HPO4），16.7ml
濃度為0.5 摩爾的磷酸二氫鉀溶液(KH2PO4)，5ml 的吐溫20，用K2HPO4 或者KH2PO4 調(diào)
節(jié)PH 到7.4。
3． 均質(zhì)混合樣品液 30 分鐘，使用磁力攪拌器直到樣品全部溶解。
4． 2000 轉(zhuǎn)離心15 分鐘，取上清液。或者可以使用0.45um 的濾膜過濾，取濾液。
5． 加 100ul 的濾液或者離心后上清液到檢測(cè)孔開始實(shí)驗(yàn)。
蛋樣品的準(zhǔn)備：
1． 把蛋黃和蛋白都放進(jìn)清潔的容器，然后拍打得到均勻的液體，不能有塊狀。
2． 用蒸餾水 1：4 稀釋均勻的液體（1ml 蛋液+3ml 蒸餾水），裝在玻璃杯或者是直徑1.5CM 的
耐熱塑料管中，密封。
3． 在 100℃的水浴中加熱樣品12±0.5 分鐘
4． 用力攪拌樣品 20-30 秒，避免樣品凝結(jié)成塊狀，在室溫冷卻樣品。
5． 加 100ul 的混合物到檢測(cè)微孔開始實(shí)驗(yàn)

操作過程：
1． 先用刀切開所需要檢測(cè)的小孔，從底部用力把切好的小孔頂出微孔板架。雖然可以單個(gè)使用，
但是我們還是*一次使用8 個(gè)（剛好一條）。
2． 把帶檢測(cè)的試劑條上的鋁薄紙撕去，每個(gè)小孔加100ul 的樣品，同時(shí)做一個(gè)陰性對(duì)照樣（加
100ul 的陰性控制樣）。*使用自動(dòng)加樣槍，檢查其他未使用的檢測(cè)孔是否仍然密封完好，
沒有使用的小孔必須馬上放入袋子里面封好，以免小孔干結(jié)。
陰性
沖洗 3-4 次
擴(kuò)散 培養(yǎng) 陽性
（65℃加熱30 分鐘） （65℃加熱3hr-3hr30 分鐘）
加 100ul 樣品和陰性控制樣在 590nm-650nm 之間讀數(shù)
3． 用粘膠紙把加好樣的小孔密封好，放入65℃的恒溫器中培養(yǎng)30 分鐘，使樣品充分均勻擴(kuò)散
開來。
4． 倒空擴(kuò)散后的樣品液，用蒸餾水沖洗樣品孔，如果使用微量加樣槍時(shí)每個(gè)孔需要加 300ul，
如果使用沖洗瓶則充滿整個(gè)小孔。倒空所有的蒸餾水，并且在吸水紙上面吸去多余的水，這
樣沖洗重復(fù)3-4 次。
5． 用粘膠紙密封檢測(cè)孔，在65℃的恒溫器中培養(yǎng)，直到陰性控制樣孔變成橙色（橘黃色），大
概的培養(yǎng)時(shí)間是3h—3h30min。也可以查看產(chǎn)品規(guī)格書，得到準(zhǔn)確的培養(yǎng)時(shí)間。
6． 結(jié)果說明
◆ 肉眼判讀結(jié)果：觀察小孔底部，藍(lán)紫色為陽性結(jié)果，橙色-棕色為陰性結(jié)果。
◆ 酶標(biāo)儀讀數(shù)：分別在590nm 和650nm 讀數(shù)，結(jié)果說明是用兩個(gè)讀數(shù)的差值來表示，如果陰性
控制樣的讀數(shù)差值（AN590nm-AN650nm）在0.15 和0.25 之外時(shí)，檢測(cè)結(jié)果無效。樣品的結(jié)
果如果大于陰性樣品讀數(shù)差值加0.15 的和時(shí)為判斷為陽性。
陽性：AM590nm-AM650nm≥AN590nm-AN650nm+0.15
AM：樣品的吸光度值
AN：陰性控制樣品的吸光度值
注：上面的判讀方式只適用于陰性控制樣品的吸光度值差在 0.15-0.25 之間的情況。