計(jì)數(shù)板的使用
準(zhǔn)備
準(zhǔn)備計(jì)數(shù)時(shí),磨光的表面小心地用擦鏡紙擦干凈。蓋玻片也要擦干凈。
蓋上蓋玻片
在需要蓋的周邊區(qū)域需要用蒸餾水弄的微濕然后蓋玻片要慢慢的從計(jì)數(shù)板的前端推入,直到蓋玻片的前端邊緣與計(jì)數(shù)板的劃格子的區(qū)域處于同位。
注意:蓋玻片是很容易壞掉的!
在外部支持和蓋玻片之間的干擾線(牛頓環(huán))的組成顯示了蓋玻片的準(zhǔn)確位置。
計(jì)數(shù)板加樣
取一個(gè)良好混合型的吸管并且放置一些初期的幾滴液體。
把吸管的外部擦干然后保持吸管一定的角度直到小滴液體被吸管*吸上去。然后這滴液體被放置在蓋玻片和計(jì)數(shù)板之間。由于蓋玻片和計(jì)數(shù)板之間的毛細(xì)管現(xiàn)象作用的結(jié)果,兩個(gè)平面之間的縫隙被灌滿(mǎn)。在溶液要滿(mǎn)出擊數(shù)板截面的邊緣之前,馬上移走吸管的*。如果有可見(jiàn)氣泡或者液體已經(jīng)滿(mǎn)出邊緣并且進(jìn)入其他的溝里,那么計(jì)數(shù)板就要擦干凈并且重新加樣。
計(jì)數(shù)
裝載好的計(jì)數(shù)板被放置在顯微鏡臺(tái)上然后計(jì)數(shù)格在低倍鏡焦距中顯示。高倍物鏡要非常小心的操作,因?yàn)橛?jì)數(shù)板比常規(guī)的要更厚。如果你不小心的話(huà),會(huì)導(dǎo)致計(jì)數(shù)板或者物鏡鏡頭的損傷。
如果可能的話(huà),在作血細(xì)胞計(jì)數(shù)的時(shí)候使用機(jī)械平臺(tái)的顯微鏡。顯微鏡的照明是重要的,太亮了會(huì)影響劃格線的觀察。光可以通過(guò)虹膜光圈減弱直到劃得格子在背景中再次清晰可見(jiàn)。細(xì)胞/質(zhì)粒的計(jì)數(shù)應(yīng)該充分稀釋到他們不再互相重疊,并且均勻的分配。
要完成計(jì)數(shù)檢測(cè)需要擴(kuò)大到期望的可見(jiàn)的細(xì)胞/質(zhì)粒。細(xì)胞數(shù)量的計(jì)算*計(jì)數(shù)100方格作為排除少量的結(jié)果。
計(jì)數(shù)格在超過(guò)劃線區(qū)域使用時(shí)需要均勻的分配,并且這個(gè)通過(guò)藉由三倍之?dāng)?shù)決定的方格支架在進(jìn)入?yún)^(qū)段之內(nèi)。
計(jì)數(shù)完100方格后總數(shù)除100(計(jì)數(shù)的方格數(shù)),來(lái)得到每格的平均值。乘稀釋度,除1/4000(每個(gè)小方格的立方容積1/20 x 1/20 x 1/10 – 1/4000mm3)。這次計(jì)算得到的數(shù)字是原非稀釋流質(zhì)的每立方毫米的細(xì)胞數(shù)量。