胰蛋白胨生理鹽水溶液(TPS)250g/瓶用于樣 品稀 釋(國 家消 毒技 術(shù)規(guī) 范)
pH7.0 緩沖氯化鈉蛋白胨溶液250g/瓶用于藥品樣品的稀釋(USP)
豬睪丸細胞系,ST細胞 氯化鈉胰蛋白胨稀釋液250g/瓶用于樣品的制備與稀釋(SN)
蛋白胨-鹽溶液 250g/瓶用于樣品的稀釋(NY)
酪胨-大豆*-吐溫 20 液體培養(yǎng)基,培養(yǎng)基批發(fā)250g/瓶用于藥品稀釋(USP),每 96ml 培養(yǎng) 基中添加 41 支 20106(吐溫 20)
0.1%蛋白胨水培養(yǎng)基,培養(yǎng)基批發(fā)250g/瓶用于藥品稀釋(中國藥典)
Amies *,培養(yǎng)基批發(fā)250g/瓶用于致病菌標(biāo)本的采集、運輸和保存
ATCC細胞株的品質(zhì),豬睪丸細胞系,ST細胞國內(nèi)細胞的價格。對于初做細胞培養(yǎng)研究的工作者來說,會經(jīng)常出現(xiàn)細胞培養(yǎng)問題,公司在細胞培養(yǎng)問題方面做了些總結(jié),希望對你們能有所幫助。
【培養(yǎng)液pH值變化太快】CO2張力不對。培養(yǎng)瓶蓋擰得太緊。NaHCO3緩沖系統(tǒng)緩沖力不足。培養(yǎng)液中鹽濃度不正確。細菌、酵母或真菌污染。
按培養(yǎng)液中NaHCO3濃度增加或減少培養(yǎng)箱內(nèi)CO2濃度,2.0g/L到3.7g/L濃度NaHCO3對應(yīng)CO2濃度為5%到10%。(2)改用不依賴CO2培養(yǎng)液,松開瓶蓋1/4圈,加HEPES緩沖液至10到25mM終濃度,在CO2培養(yǎng)環(huán)境中改用基于Earle’s鹽配制的培養(yǎng)液,在大氣培養(yǎng)環(huán)境中培養(yǎng)改用Hank’s鹽配制的培養(yǎng)液,丟棄培養(yǎng)物或用抗生素除菌。
【培養(yǎng)液出現(xiàn)沉淀,但pH值不變】用洗滌劑清洗后殘留磷酸鹽將培養(yǎng)基成分沉淀下來。冰凍保存培養(yǎng)液,用去離子水反復(fù)沖洗玻璃器皿,然后除菌,將培養(yǎng)液加熱到37℃,搖動使其溶解如沉淀仍然存在,丟棄培養(yǎng)液。
【培養(yǎng)液出現(xiàn)沉淀,同時pH 發(fā)生變化】細菌或真菌污染,丟棄培養(yǎng)物或用抗生素除菌。
【培養(yǎng)細胞不貼壁】*消化過度;支原體污染;培養(yǎng)液中無貼壁因子,縮短*消化時間或降低*濃度,分離培養(yǎng)物,檢測支原體。清潔支架和培養(yǎng)箱。如發(fā)現(xiàn)支原體污染,丟棄培養(yǎng)物。
【懸浮細胞成簇】培養(yǎng)液中含鈣、鎂離子。支原體污染。蛋白酶過度消化使得細胞裂解釋放DNA,用無鈣鎂*洗滌細胞,輕輕吹吸細胞獲得單細胞懸液,分離培養(yǎng)物,檢測支原體。如發(fā)現(xiàn)支原體污染,丟棄培養(yǎng)物,用DNase I處理細胞。
【原代細胞培養(yǎng)物污染】原代培養(yǎng)組織在進入培養(yǎng)前已污染,培養(yǎng)前用含高濃度抗生素的*反復(fù)沖洗組織。
【培養(yǎng)細胞死亡】培養(yǎng)箱內(nèi)無CO2。培養(yǎng)箱內(nèi)溫度波動太大。細胞凍存或復(fù)蘇過程中損傷。培養(yǎng)液滲透壓不正確。培養(yǎng)液種有毒代謝產(chǎn)物堆積;檢測培養(yǎng)箱內(nèi)CO2檢查培養(yǎng)箱內(nèi)溫度;取新的保存細胞種;檢測培養(yǎng)液滲透壓。注意:大多數(shù)哺乳動物細胞能耐受滲透壓為260–350mOsm/kg。加入額外試劑如HEPES或藥物都有可能影響培養(yǎng)液滲透壓,換入新鮮培養(yǎng)液。
【培養(yǎng)細胞生長減慢】由于更換不同培養(yǎng)液或血清。培養(yǎng)液中一些細胞生長必需成分如*或生長因子耗盡或缺乏或已被破壞。培養(yǎng)物中有少量細菌或真菌污染。試劑保存不當(dāng)。
比較新培養(yǎng)液與原培養(yǎng)液成分,比較新血清與舊血清支持細胞生長實驗。
1)增加起始培養(yǎng)細胞濃度
2)讓細胞逐漸適應(yīng)新培養(yǎng)液。
3)換入新鮮配制培養(yǎng)液。
4)補加*或生長因子。
5)用無抗生素培養(yǎng)液培養(yǎng),如發(fā)現(xiàn)污染,丟棄培養(yǎng)物?;蛴每股爻?。
6)血清需保存在-5℃ 到-20℃。培養(yǎng)液需在2–8℃避光保存。含血清*培養(yǎng)液在2–8℃7)保存,并在2周內(nèi)用完。
8)接種細胞起始濃度太低,細胞已老化,支原體污染。
9)增加接種細胞起始濃度。
10)換用新的保種細胞。
11)分離培養(yǎng)物,檢測支原體。清潔支架和培養(yǎng)箱。如發(fā)現(xiàn)支原體污染,丟棄培養(yǎng)物。
大腸桿菌/大腸菌群液體顯色培養(yǎng)基,培養(yǎng)基批發(fā)1000ml/瓶用于同時快速檢測大腸桿菌、大腸 菌群,24h 內(nèi)出結(jié)果,大腸桿菌有 藍色熒光,大腸菌群呈藍色
改良 LMX 肉湯2 萬 ml/瓶用于同時快速檢測大腸桿菌、大腸 菌群,24h 內(nèi)出結(jié)果
霉菌和酵母菌顯色培養(yǎng)基,培養(yǎng)基批發(fā)1000ml/瓶
磷酸鹽緩沖液(pH7.2)250g/瓶用于樣品稀釋(GB、SN)
pH7.4 磷酸鹽緩沖液(PBS)250g/瓶用于樣品的稀釋、制備(中國藥典)
pH7.2 磷酸鹽緩沖液250g/瓶0.03mol/L ,用 于 樣 品制 備 和稀 釋(國家消毒技術(shù)規(guī)范)
無菌檢驗用洗脫液250g/瓶含 PBS,用于樣品的制備(國家消 毒技術(shù)規(guī)范)