PCD-007 光化學(xué)柱后衍生器
——提高檢測(cè)靈敏度和重復(fù)性的利器
成都摩爾科學(xué)儀器有限公司
目錄
1 的危害 ........................................................................................................................ 1
2 的檢測(cè)方法 ................................................................................................................ 1
3 檢測(cè)所需試劑及耗材 ............................................................................................... 2
4 艾力析實(shí)驗(yàn)科技有限公司研制的光化學(xué)柱后衍生器 ................................................................ 3
4.1 儀器介紹 ........................................................................................................................... 3
4.2 產(chǎn)品特點(diǎn) ........................................................................................................................... 4
4.3 產(chǎn)品參數(shù) ........................................................................................................................... 4
4.4 安裝使用 ........................................................................................................................... 4
4.5 常見(jiàn)故障及簡(jiǎn)易排除方法 ................................................................................................ 4
4.6 注意事項(xiàng)及日常維護(hù) ....................................................................................................... 5
4.7 檢測(cè)的解決方案 ............................................................................................ 5
4.7.1 營(yíng)養(yǎng)米粉類嬰幼兒輔食 ........................................................................................ 5
4.7.2 乳制品 ................................................................................................................... 7
4.7.3 糧油 ........................................................................................................................ 9
4.7.4 花生及其制品 ..................................................................................................... 11
4.7.5 飼料 ..................................................................................................................... 13
4.7.6 中藥材 ................................................................................................................. 15
4.8 磺胺類藥物的檢測(cè) .......................................................................................................... 17
4.9 其他應(yīng)用 ......................................................................................................................... 18
1 的危害
是一組化學(xué)結(jié)構(gòu)類似的二呋喃的衍生化合物，可以由曲霉菌黃曲霉、寄生曲霉、集峰曲霉和偽滯曲霉產(chǎn)生。常常存在于發(fā)生霉變的中藥材、谷物、農(nóng)作物、堅(jiān)果、奶制品以及動(dòng)物飼料中等相關(guān)的產(chǎn)品中。其中 B1、B2、G1、G2易污染多種農(nóng)作物、食品、飼料及中藥材。被世界衛(wèi)生組織（WHO）的癌癥研究結(jié)構(gòu)（IARC）劃定為 I 類致癌物，是一種毒性的物質(zhì)，其毒性是的 10 倍，其中以 B1毒性zui大。當(dāng)人攝入量大時(shí)，可發(fā)生急性中毒，出現(xiàn)急性肝炎、出血性壞死、肝細(xì)胞脂肪變性和膽管增生。當(dāng)微量持續(xù)攝入，可造成慢性中毒，生長(zhǎng)障礙，引起纖維性病變，致使纖維組織增生。
2 的檢測(cè)方法
是當(dāng)前食品及藥品中污染zui嚴(yán)重的真菌毒素之一。因此，GB/T 2761-2011嚴(yán)格規(guī)定了各類食品中的*，zui值是 0.5μg/kg,所建立的檢測(cè)方法必須達(dá)到 0.05μg/kg 的zui低定量限才能滿足*的檢測(cè)。同時(shí)在 2015 版藥典七大變化之一安全性控制項(xiàng)
目大幅提升中，明確規(guī)定并強(qiáng)制推行中藥材中的*檢測(cè)。對(duì)《中國(guó)藥典》收載的柏子仁、蓮子、使君子、檳榔、麥芽、肉豆蔻、決明子、遠(yuǎn)志、薏苡仁、大棗、地龍、蜈蚣、水蛭、全蝎等 14 味藥材及其飲品品種項(xiàng)下增加“”檢查項(xiàng)目，限度為“ B1不得超過(guò) 5μg/kg; B2、 G1、 G2總量不得超過(guò)10μg/kg”。目前，對(duì)食品和中藥材中的檢測(cè)方法主要有：薄層色譜法（TLC），酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）,親和層析法（AFTB1）、免疫親和-液相色譜法（HPLC 法）及液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法（LC-MS）。其中將免疫親和柱與高效液相色譜法結(jié)合應(yīng)用，由于其前處理方法簡(jiǎn)單、儀器使用成本相對(duì)較低、可異構(gòu)體分離、分離靈敏度高、穩(wěn)定性好等******性，近年來(lái)已經(jīng)得到廣泛的應(yīng)用。由于 B1、G1采用液相色譜熒光檢測(cè)直接檢測(cè)時(shí)易發(fā)生猝滅而導(dǎo)致靈敏度較低，因此需要對(duì)其進(jìn)行衍生后才能達(dá)到痕量檢測(cè)的要求?，F(xiàn)行的檢測(cè)采用的衍生方法主要分為柱前衍生（TFA 柱前衍生）和柱后衍生法（光化學(xué)柱后衍生、溴和碘柱后衍生）。采用 TFA 柱前衍生法，雖然檢測(cè)靈敏度高，但需要用到有毒有害試劑（三、正己烷），且操作較其他幾種方法繁瑣；溴和碘柱后衍生法，在
樣品預(yù)處理上相對(duì)較簡(jiǎn)單，但檢測(cè)時(shí)需配備傳統(tǒng)的柱后衍生裝置，同時(shí)需要手動(dòng)品配制衍生液，而不同人手動(dòng)配制的衍生液的濃度會(huì)存在差異，從而導(dǎo)致待測(cè)物質(zhì)保留時(shí)間穩(wěn)定性較差。而光化學(xué)柱后衍生法在操作上相對(duì)簡(jiǎn)單，樣品經(jīng)過(guò)處理后可直接進(jìn)樣分析，減少了有機(jī)試劑的接觸；且有效提高檢驗(yàn)靈敏度和重復(fù)性;此外光化學(xué)柱后衍生器較傳統(tǒng)的柱后衍生裝置成本低，且檢測(cè)靈敏度較溴和碘柱后衍生法理想。
4.2 產(chǎn)品特點(diǎn)
（1）無(wú)需使用化學(xué)物質(zhì)（節(jié)約成本的同時(shí)，也避免操作人員接觸有毒化學(xué)物質(zhì)）；
（2）較傳統(tǒng)柱后衍生裝置（化學(xué)衍生泵、混合器、溫控裝置）成本低；
（3）直接連接于色譜柱與熒光檢測(cè)器之間，安裝操作簡(jiǎn)單；
（4）外觀設(shè)計(jì)精巧細(xì)致，節(jié)省實(shí)驗(yàn)室空間；
（5）******采用進(jìn)口配件，******了產(chǎn)品的使用性能；
（6）采用 PHILIP 進(jìn)口紫外燈光源，使用壽命長(zhǎng)達(dá) 8000h；
（7）采用的支架和管線纏繞方式，******了反應(yīng)效率；
（8）可與國(guó)內(nèi)外各種品牌及型號(hào)的熒光檢測(cè)器聯(lián)用；
（9）無(wú)腐蝕性酸流經(jīng)毛細(xì)管，增加 HPLC 儀器的壽命；
（10）可持續(xù)工作數(shù)千小時(shí)，用后無(wú)需沖洗步驟；
（11） B1、B2、G1、G2 的zui低檢測(cè)限均小于 0.5 ppb；
（12）符合 AOAC 2005.08, AOAC 2008.02,AOCS Aa 11-05 ，中國(guó)臺(tái)灣標(biāo)準(zhǔn)（食
字 0981800370 號(hào)公告）和歐盟藥典 2.8.18 標(biāo)準(zhǔn)分析方法要求；
（13）符合中國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)和進(jìn)出口檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)及 2015 版中國(guó)藥典要求（增訂光化學(xué)衍生法）；
4.3 產(chǎn)品參數(shù)
設(shè)備尺寸：411mm×53mm×68mm（長(zhǎng)×寬×高）
凈重： kg
毛重： kg
管線有效長(zhǎng)度：25m
出入端管線長(zhǎng)度：≤500mm
紫外燈壽命：≥4000
工作電源：220V、50Hz
工作功率：11W
環(huán)境溫度：0~45℃
環(huán)境要求：嚴(yán)禁浸水、淋水，內(nèi)含易碎物質(zhì)避免沖擊及跌落。
4.4 安裝使用
（1）將衍生器上的聚四氟乙烯管，用配套規(guī)格的的 PEEK 接頭，一端連接色譜柱，一段連接檢測(cè)器，無(wú)連接方向要求
（2） 啟動(dòng) HPLC 恒流并且流量壓力均穩(wěn)定后，檢測(cè)各連接器件有無(wú)漏液情況，確定無(wú)誤通電并打開(kāi)電源開(kāi)關(guān)（正面綠色自鎖開(kāi)關(guān)），系統(tǒng)進(jìn)入紫外燈管預(yù)熱狀態(tài)。此時(shí)紫外燈點(diǎn)亮并預(yù)熱，大約 10min 光線穩(wěn)定后即可正常衍生反應(yīng)。
4.5 常見(jiàn)故障及簡(jiǎn)易排除方法
（1）儀器安裝完畢后，務(wù)必開(kāi)啟高壓泵經(jīng)過(guò) 1~2min 恒壓運(yùn)行，用濾紙檢查儀器前后連接件確定無(wú)漏液后再開(kāi)啟電源使用，漏液應(yīng)及時(shí)清潔，避免流動(dòng)相溶劑對(duì)設(shè)備的腐蝕。避免環(huán)境影響，縮短平衡時(shí)間。
（2）請(qǐng)匆自行拆開(kāi)儀器或任意改變溫度控制器的內(nèi)部設(shè)置，普通用戶對(duì)于復(fù)雜的系統(tǒng)參數(shù)設(shè)置不熟悉時(shí)盡量使用出廠默認(rèn)值或儀器自動(dòng)設(shè)定值，如有問(wèn)題請(qǐng)及時(shí)與本公司聯(lián)系。
（3）儀器通電衍生后，出峰變小或異常峰；燈管光照不足或燒壞，使用備用系統(tǒng)或返廠更換維修；上述問(wèn)題您無(wú)法解決時(shí)，請(qǐng)與經(jīng)銷商或廠家聯(lián)系。
4.6 注意事項(xiàng)及日常維護(hù)
（1）使用前請(qǐng)檢查電源插座是否良好接地，若沒(méi)有請(qǐng)用線接好背面保護(hù)地線！柱大量漏液時(shí)可能對(duì)電氣有腐蝕作用，長(zhǎng)期腐蝕可能引起漏電，造成事故損失，因此請(qǐng)確保儀器良好接地。
（2）應(yīng)保持柱箱部件的清潔，不用時(shí)請(qǐng)切斷電源。
（3）嚴(yán)禁非維修人員拆解儀器，內(nèi)有紫外光線，請(qǐng)勿直視漏光部位。
（4）燈管為專用燈管，更換時(shí)請(qǐng)務(wù)必確認(rèn)切斷電源。
（5）儀器自然散熱，工作中請(qǐng)******通風(fēng)，勿覆蓋影響散熱。
4.7 檢測(cè)的解決方案
4.7.1 營(yíng)養(yǎng)米粉類嬰幼兒輔食
嬰幼兒正直身體發(fā)育時(shí)期，應(yīng)該營(yíng)養(yǎng)均衡搭配，提倡給嬰幼兒吃大自然提供給人類的各種食物。而在這些食物中，嬰幼兒米粉（稱“嬰幼兒配方谷粉”、“營(yíng)養(yǎng)米粉”或“嬰幼兒米糊”），是母乳或嬰兒配方食品不能滿足嬰兒營(yíng)養(yǎng)需要以及嬰兒斷奶期間時(shí)，為補(bǔ)充嬰幼兒營(yíng)養(yǎng)的非常重要的輔助食品。由于營(yíng)養(yǎng)米粉以小米、大米為主要原料，而小米和大米若儲(chǔ)藏不當(dāng)，******容易受到的污染。據(jù)不******統(tǒng)計(jì)，2015 年以來(lái)，國(guó)家食藥監(jiān)總局共公布了 64 批次存在食品安全風(fēng)險(xiǎn)的嬰幼兒輔食，其中等污染物超標(biāo)達(dá) 15
批次。因此，企業(yè)和國(guó)家質(zhì)檢部門有必要加強(qiáng)對(duì)嬰幼兒輔食中霉菌毒素的檢測(cè)與監(jiān)管，保障嬰幼兒食品的安全。
針對(duì)嬰幼兒營(yíng)養(yǎng)米粉中 B1 的檢測(cè)，青島艾力析實(shí)驗(yàn)科技有限公司為您提供了整套解決方案。滿足我國(guó)嬰幼兒食品中 B1(GB2761-2011)的 0.5μg／kg 的要求。
（1）色譜條件
色譜柱：Sepax Sapphire C18 5um 4.6*300mm(PN:320185-4630)
流動(dòng)相：甲醇—水 （55/45，v/v）
柱溫：25℃
流速：0.8mL/min
進(jìn)樣量：20μL
檢測(cè)器：熒光檢測(cè)器
檢測(cè)波長(zhǎng)：EX（激發(fā)波長(zhǎng)）=360nm,EM（發(fā)射波長(zhǎng)）=420nm
進(jìn)樣前2min開(kāi)啟光化學(xué)衍生池電源
光化學(xué)衍生化系統(tǒng)：光化學(xué)衍生器（連接于色譜柱后，然后通向熒光檢測(cè)器）
（2）樣品處理
? 提取
? ******稱取 25.000g 樣品于 500mL 的具塞玻璃容量瓶中，加入 125mL 甲醇-水(體積比為 70∶30)溶液；
? 在高速勻質(zhì)機(jī)上勻質(zhì) 2～3min；
? 取 30mL 左右勻質(zhì)后的樣液以 4000r／min 離心 5min；
? 取上層清液 10mL 加入 30mL 水稀釋，搖勻后過(guò)玻璃纖維濾紙過(guò)濾，濾液備用。
? SPE 柱凈化
? 回溫解凍：提前辦小時(shí)將免疫親和柱從冰箱拿出常溫解凍；
? 安裝：將回溫解凍后的免疫親和柱安裝到固相萃取裝置上；
? 上樣：將提取的樣品濾液全部轉(zhuǎn)移到 10mL 玻璃注射器中，調(diào)節(jié)固相萃取裝置上的壓力控制閥，控制樣品溶液以 1 滴/s 的速度通過(guò)免疫親和柱，直至 2~3mL 空氣通過(guò)柱體，棄去流出液；
? 淋洗：向玻璃注射器內(nèi)加入 10mL 水淋洗免疫親和柱，流速位 1 滴/s~2 滴/s，淋洗液兩次。直至空氣進(jìn)入免疫親和柱后有 2~3mL 空氣通過(guò)柱體，棄去全部的流出液，抽干小柱；
? 洗脫：******加入2.0mL流動(dòng)相至注射器內(nèi)，以約為1滴/s的流速將免疫親和柱上的B1洗脫下來(lái),收集全部的洗脫液于干凈的玻璃離心管中,于渦旋混合器上振蕩1min，過(guò)0.45μm濾膜，供液相色譜測(cè)定。
（3）樣品測(cè)定
HPLC 直接進(jìn)樣，經(jīng) C18 色譜柱、光化學(xué)柱后衍生化后熒光檢測(cè)器直接記錄并計(jì)算出 B1 的濃度；圖 3 為嬰幼兒營(yíng)養(yǎng)米粉中 B1 樣品檢測(cè)及加標(biāo)樣品檢測(cè)疊加譜圖。
（1）色譜條件
色譜柱：Sepax Sapphire C18 5um 4.6*300mm(PN:320185-4630)
流動(dòng)相：甲醇—乙腈—水 （25/20/55，v/v）
柱溫：30℃
流速：1.0 mL/min
進(jìn)樣量：20μL
檢測(cè)器：熒光檢測(cè)器
檢測(cè)波長(zhǎng)：EX（激發(fā)波長(zhǎng)）=355nm,EM（發(fā)射波長(zhǎng)）=430nm
進(jìn)樣前2min開(kāi)啟光化學(xué)衍生池電源
光化學(xué)衍生化系統(tǒng)：光化學(xué)衍生器（連接于色譜柱后，然后通向熒光檢測(cè)器）
（2）樣品處理
? 提取
? ******稱取 2.0000g 奶粉樣品，置于 50mL 的離心管中。將 20mL 已預(yù)熱到 50℃的水加入到奶粉中，邊加邊振搖至奶粉******溶解；
? 在渦旋混合器上振蕩 2min 混合均勻；
? 將奶粉乳濁液冷卻至室溫后，于 10000r/min、在-5℃下離心 10min；
? 取 30mL 左右勻質(zhì)后的樣液以 4000r／min 離心 5min；
? 將樣品溶液用玻璃纖維濾紙過(guò)濾，濾液備用。
? SPE 柱凈化
? 回溫解凍：提前辦小時(shí)將免疫親和柱從冰箱拿出常溫解凍；
? 安裝：將回溫解凍后的免疫親和柱安裝到固相萃取裝置上；
? 上樣：將提取的樣品濾液全部轉(zhuǎn)移到 10mL 玻璃注射器中，調(diào)節(jié)固相萃取裝置上的壓力控制閥，控制樣品溶液以 1 滴/s 的速度通過(guò)免疫親和柱，直至 2~3mL 空氣通過(guò)柱體，棄去流出液；
? 淋洗：向玻璃注射器內(nèi)加入 10mL 水淋洗免疫親和柱，流速位 1 滴/s~2 滴/s，淋洗液兩次。直至空氣進(jìn)入免疫親和柱后有 2~3mL 空氣通過(guò)柱體，棄去全部的流出液，抽干小柱；
? 洗脫：******加入1.0mL流動(dòng)相至注射器內(nèi)，以約為1滴/s的流速將免疫親和柱上的B1洗脫下來(lái),收集全部的洗脫液于干凈的玻璃離心管中,用水定容到2mL。于渦旋混合器上振蕩1min，過(guò)0.45μm濾膜，供液相色譜測(cè)定。
（3）樣品測(cè)定
HPLC 直接進(jìn)樣，經(jīng) C18 色譜柱、光化學(xué)柱后衍生化后熒光檢測(cè)器直接記錄并計(jì)算出 B1、B2、G1、G2、M1 和 M2 的濃度；圖 4 為 6 種同時(shí)檢測(cè)的色譜圖。
（1）色譜條件
色譜柱： Sepax Sapphire C18 5um 4.6*300mm(PN:320185-4630)
流動(dòng)相：甲醇—水 （50/50，v/v）
柱溫：30℃
流速：1.0 mL/min
進(jìn)樣量：20μL
檢測(cè)器：熒光檢測(cè)器
檢測(cè)波長(zhǎng)：EX（激發(fā)波長(zhǎng)）=360nm,EM（發(fā)射波長(zhǎng)）=440nm
進(jìn)樣前2min開(kāi)啟光化學(xué)衍生池電源
光化學(xué)衍生化系統(tǒng)：光化學(xué)衍生器（連接于色譜柱后，然后通向熒光檢測(cè)器）
（2）樣品處理
? 提取
? ******稱取 25.000g 糧、油樣品于 500mL 錐形瓶中，加入 5g 氯化鈉、加入 125mL甲醇水(體積比為 70∶30)；
? 在高速勻質(zhì)機(jī)上勻 20mL 水稀釋，搖勻后過(guò)玻璃纖維濾紙過(guò)濾，濾液備用。
? SPE 柱凈化
? 回溫解凍：提前辦小時(shí)將免疫親和柱從冰箱拿出常溫解凍；
? 安裝：將回溫解凍后的免疫親和柱安裝到固相萃取裝置上；
? 上樣：將提取的樣品濾液全部轉(zhuǎn)移到 10mL 玻璃注射器中，調(diào)節(jié)固相萃取裝置上的壓力控制閥，控制樣品溶液以 1 滴/s 的速度通過(guò)免疫親和柱，直至 2~3mL 空氣通過(guò)柱體，棄去流出液；
? 淋洗：向玻璃注射器內(nèi)加入 10mL 水淋洗免疫親和柱，流速位 1 滴/s~2 滴/s，淋洗液兩次。直至空氣進(jìn)入免疫親和柱后有 2~3mL 空氣通過(guò)柱體，棄去全部的流出液，抽干小柱；
? 洗脫：******加入1.0mL甲醇至注射器內(nèi)，以約為1滴/s的流速將免疫親和柱上的B1洗脫下來(lái),收集全部的洗脫液于干凈的玻璃離心管中,加入1.0mL純水于洗脫液中，于渦旋混合器上振蕩1min，過(guò)0.45μm濾膜，供液相色譜測(cè)定。
（3）樣品測(cè)定
HPLC 直接進(jìn)樣，經(jīng) C18 色譜柱、光化學(xué)柱后衍生化后熒光檢測(cè)器直接記錄并計(jì)算出 B1、B2、G1、G2的濃度；圖 4 為各樣品檢測(cè)色譜圖。
（1）色譜條件
色譜柱：Sepax Sapphire C18 5um 4.6*300mm(PN:320185-4630)
流動(dòng)相：甲醇—水 （55/45，v/v）
柱溫：25℃
流速：0.8mL/min
進(jìn)樣量：50μL
檢測(cè)器：熒光檢測(cè)器
檢測(cè)波長(zhǎng)：EX（激發(fā)波長(zhǎng)）=360nm,EM（發(fā)射波長(zhǎng)）=420nm
進(jìn)樣前2min開(kāi)啟光化學(xué)衍生池電源
光化學(xué)衍生化系統(tǒng)：光化學(xué)衍生器（連接于色譜柱后，然后通向熒光檢測(cè)器）
（2）樣品處理
? 提取
? ******稱取 25.000g 粉碎樣品于 500mL 的錐形瓶中，加入 125mL 甲醇-水(體積比
為 70∶30)溶液；
? 在高速勻質(zhì)機(jī)上勻質(zhì) 2～3min；
? 取 30mL 左右勻質(zhì)后的樣液以 4000r／min 離心 10min；
? 用槽紋濾紙過(guò)濾試樣溶液于 50mL 量筒中；
? 收集濾液 15mL，加入 30mL 二次去離子水，混勻，將稀釋后的濾液用玻璃纖維濾紙?jiān)俅芜^(guò)濾。
? SPE 柱凈化
? 回溫解凍：提前辦小時(shí)將免疫親和柱從冰箱拿出常溫解凍；
? 安裝：將回溫解凍后的免疫親和柱安裝到固相萃取裝置上；
? 上樣：將提取的樣品濾液 15mL 轉(zhuǎn)移到玻璃注射器中，調(diào)節(jié)固相萃取裝置上的壓力控制閥，控制樣品溶液以 1 滴/s 的速度通過(guò)免疫親和柱，直至 2~3mL 空氣通過(guò)柱體，棄去流出液；
? 淋洗：向玻璃注射器內(nèi)加入 10mL 去離子水淋洗免疫親和柱，流速位 1 滴/s~2滴/s，淋洗液兩次。直至空氣進(jìn)入免疫親和柱后有 2~3mL 空氣通過(guò)柱體，棄去全部的流出液，抽干小柱；
? 洗脫：加入1.0mL甲醇至注射器內(nèi)，以約為1滴/s的流速將免疫親和柱上的B1、B2、G1、G2洗脫下來(lái),收集全部的洗脫液于干凈的玻璃離心管中,并加入1mL去離子水，于渦旋混合器上振蕩1min，過(guò)0.45μm濾膜，供液相色譜測(cè)定。
（3）樣品測(cè)定
HPLC 直接進(jìn)樣，經(jīng) C18 色譜柱、光化學(xué)柱后衍生化后熒光檢測(cè)器直接記錄并計(jì)算出 B1、B2、G1、G2的濃度；圖 6 為花生粉樣品添加 1.5μg/kg 水平的色譜圖。
根據(jù) GB/T 30955-2014 中飼料中的檢測(cè)方法，青島艾力析實(shí)驗(yàn)科技有限公司提供完整的解決方案。
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