北京眾力挽生物科技有限公司
郝運(yùn)興
Thermo NanoDrop one紫外/可見分光光度計
檢測時選擇不同檢測模式,可以得到zui快速的結(jié)果:
● Nucleic Acid – 吸收光譜、230nm, 260nm, 280nm吸收值(換算成10mm光徑吸收值)、260/280 ratio、260/230 ratio及核酸濃度。
● UV-Vis – 190~840nm間所有波長的吸收值及光譜(以1mm光徑吸收值呈現(xiàn))。
● A280蛋白質(zhì)定量法 – 280nm吸收值(換算成10mm光徑吸收值)、260/280 ratio及蛋白質(zhì)濃度。僅適用于純化后的蛋白質(zhì),須具有已知的質(zhì)量消光系數(shù)(mass extinction coefficient)方可計算。
● BCA、Bradford及Lowry – 依不同呈色劑提供不同波長吸收值結(jié)果,自動畫出標(biāo)準(zhǔn)曲線并計算R square,待測蛋白質(zhì)濃度。
* 蛋白質(zhì)檢測模式目前提供BCA、Bradford及Lowry三種常見定量呈色劑,因呈色劑隨時間會逐漸加深,使用前請詳閱試劑說明書并制備不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品,在*時間內(nèi)完成檢測,以得到良好的標(biāo)準(zhǔn)曲線。每個標(biāo)準(zhǔn)曲線zui多可有七個標(biāo)準(zhǔn)品,每個標(biāo)準(zhǔn)品zui多可做五重復(fù)。
* 測蛋白質(zhì)時樣品體積需使用 2ul,每個樣品檢測后需以Kimwipes 低塵擦拭紙(編號: 34155 )擦拭15~20回,以避免呈色劑與蛋白質(zhì)的殘留。
濃度范圍:
Thermo NanoDrop one紫外/可見分光光度計
樣品種類 | zui低濃度 | zui高濃度 (超過時請稀釋樣品) | 再現(xiàn)性 (五重復(fù)以上) |
核酸 | 2 ng/ul | 15000 ng/ul (dsDNA) 12000 ng/ul (RNA) | 濃度范圍在 2-100 ng/ul 時,SD為 ± 2 ng/ul 濃度范圍大于 100 ng/ul 時,CV為 ± 2% |
純BSA | 0.10 mg/ml | 100 mg/ml | 濃度范圍在 0.05-10 mg/ml 時,SD為 ± 0.10 mg/ml 濃度大于 10 mg/ml 時,CV為 ± 2% |
蛋白質(zhì),以BCA方式定量 | 0.2 mg/ml | 8.0 mg/ml | CV:± 2% (在可偵測的濃度范圍內(nèi)皆然) |
蛋白質(zhì),以modified Lowry方式定量 | 0.2 mg/ml | 4.0 mg/ml | CV:± 2% (在可偵測的濃度范圍內(nèi)皆然) |
蛋白質(zhì),以Bradford方式定量 | 100 ug/ml | 8000 ug/ml | 濃度范圍在 100-500 ug/ml 時,SD為 ± 25 ug/ml 濃度大于 500 ug/ml 時,CV為 ± 5% |
蛋白質(zhì),以Mini Bradford方式定量 | 15 ug/ml | 100 ug/ml | 濃度范圍在 15-50 ug/ml 時,SD為 ± 4 ug/ml 濃度大于 50 ug/ml 時,CV為 ± 5% |
技術(shù)參數(shù):
檢測孔測量時:
1、波長范圍: 190-840nm;
2、波長精度: 1nm;
3、分辨率: <1.8 nm (FWHM at Hg 253.7 nm);
4、其它: 1mm光程長度(可自動調(diào)整到0.05mm);
5、檢測下限:2ng/μl(dsDNA);
6、檢測上限:15000ng/μl(dsDNA);
7、吸光率精確度:0.002 absorbance (1mm光程);
8、吸光率準(zhǔn)確性:2%(at 0.76 at 257 nm);
9、吸光率范圍:0.02-300 (相當(dāng)于10mm光程);
10、核酸檢測周期:< 5s;
11、體積:14cm×20cm。
比色杯測量時:
1、光柱高度:8.5 mm;
2、控溫精確,37 ± 0.5 °C;
3、攪拌速度: 150 – 850 rpm;
4、四種光徑可供選擇,分別為1,2,5,10mm;
5、吸光率范圍:0.002 – 1.5;
6、檢測下限:0.4 ng/μl (dsDNA);
7、檢測上限:750 ng/μl (dsDNA);
8、檢測時間:< 3 s;
9、重量:2.1 kg.