D2804-1μg 昆蟲(chóng)桿狀病毒表達(dá)質(zhì)粒-儀表網(wǎng)

公司介紹主營(yíng)產(chǎn)品

北京百奧創(chuàng)新科技有限公司是一家專(zhuān)注于生命科學(xué)的科技企業(yè)，由在國(guó)內(nèi)科研試劑領(lǐng)域有著豐富從業(yè)經(jīng)驗(yàn)的技術(shù)團(tuán)隊(duì)和管理團(tuán)隊(duì)組建而成，專(zhuān)營(yíng)進(jìn)口生物試劑，科學(xué)儀器，實(shí)驗(yàn)消耗品，化工原料及藥物中間體等。公司與諸多國(guó)外品牌簽下代理，RD、Abcam、CST、Genetex、Biolegend、ebioscience、polypure、polyplus、Bethyl、Novus等，能為廣大科研用戶(hù)提供數(shù)萬(wàn)種試劑、儀器和實(shí)驗(yàn)消耗品。
公司將不斷把上優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品引入國(guó)內(nèi)市場(chǎng)，滿足客戶(hù)的需求，公司也將緊跟生命科學(xué)的發(fā)展，為廣大科研工作者探索生命科學(xué)的奧秘奉獻(xiàn)綿薄之力！

一、輻射五大服務(wù)方向：

1.國(guó)內(nèi)試劑耗材經(jīng)銷(xiāo)代理；

2.國(guó)外試劑訂購(gòu)（直訂，或境外代理）；

3.基因組測(cè)序（二代，二代三代）；

4.基因分型（SNP檢測(cè)）：低/中/中高通量項(xiàng)目；

5.生物樣本運(yùn)輸（國(guó)內(nèi)、）；

二、百奧創(chuàng)新多家代理品牌，涉及30多種品牌，經(jīng)營(yíng)代理500多個(gè)品牌：

Qiagen、Sigma、R&D、Epigentek、ThermoFisher、DNA Genotek、USA Scientific、

Matreya、Sage Science、List Labs、Macrocyclics、Steraloids、

NIBSC、mobio、immunodx、cellsystems、medicago、abcam

CST、Roche、Bethyl、sino Biological、clodrosome、adi

BIO-WORLD、TOKU-E、HYPHEN BioMed、moltox、ZeptoMetrix

International Humic、biocytex、Toxin Technology 、Streck

Elastin、biomax、Orflo Technologies、Accegen、Advbiomart、genlantis、coaChrom

cerilliant、Cygnus Technologies LLC、Enzyme Research、Bio/Data Corporation

Greer Lab 、novusbio、Solarbio、bangslabs、bioline、musechem、Novocastra

stemrd、hyphen-biomed、polyplus、moltox 、exiqon、pentapharm、verichemlabs

GenStar、ALZET、lucernatechnologies 、meridian、origene、zimmerpeacocktech

horizondiscovery、Reagents、megazyme、elisasystems………

北京百奧創(chuàng)新科技有限公司所有生物試劑耗材都可以進(jìn)口，特別是冷門(mén)品牌，均能給客戶(hù)購(gòu)買(mǎi)到。價(jià)格優(yōu)，貨期短，可加急，較快10天到貨；保證服務(wù)質(zhì)量，所有產(chǎn)品均提供售后服務(wù)。大部分客戶(hù)我們提供貨到付款服務(wù)，

百奧創(chuàng)新自成立依靠過(guò)硬的服務(wù)和良好的信譽(yù)與各大企事業(yè)單位、科研單位建立長(zhǎng)期合作?？蛻?hù)包括北大，清華，地大，中科院各所，各大藥企等等。

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產(chǎn)品簡(jiǎn)介在線詢(xún)價(jià)

產(chǎn)地	國(guó)產(chǎn)	加工定制	否	適用領(lǐng)域	科研

昆蟲(chóng)桿狀病毒表達(dá)質(zhì)粒
本質(zhì)粒含有polyhedrin (PH)啟動(dòng)子，可以高效啟動(dòng)目的蛋白和EGFP融合蛋白在昆蟲(chóng)細(xì)胞(如Sf9和Sf21等)中的表達(dá)，其表達(dá)的EGFP有很強(qiáng)的綠色熒光，在顯微鏡下可以非常方便地觀察目的蛋白的表達(dá)情況。

昆蟲(chóng)桿狀病毒表達(dá)質(zhì)粒產(chǎn)品詳情

昆蟲(chóng)桿狀病毒表達(dá)質(zhì)粒 pFastBac1-C-EGFP，全稱(chēng)為pFastBac1-PreScission-C-EGFP-His-tag-Strep-tag，以pFastBac1為基礎(chǔ)構(gòu)建的用于昆蟲(chóng)細(xì)胞表達(dá)目的蛋白C端融合有EGFP蛋白的質(zhì)粒。本質(zhì)粒含有polyhedrin (PH)啟動(dòng)子，可以高效啟動(dòng)目的蛋白和EGFP融合蛋白在昆蟲(chóng)細(xì)胞(如Sf9和Sf21等)中的表達(dá)，其表達(dá)的EGFP有很強(qiáng)的綠色熒光，在顯微鏡下可以非常方便地觀察目的蛋白的表達(dá)情況。同時(shí)EGFP的C端含有編碼8×His標(biāo)簽的序列和編碼短肽親和標(biāo)簽Strep-tag II的序列，因此可以非常便捷地使用鎳柱或Strep-Tactin系統(tǒng)進(jìn)行分離純化。同時(shí)在目的蛋白和EGFP之間含有PreScission酶切位點(diǎn)，便于后續(xù)酶切去除標(biāo)簽。

和EGFP融合表達(dá)，便于觀察表達(dá)水平。采用Bac-to-Bac桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)目的蛋白時(shí)，通常僅僅是根據(jù)細(xì)胞被桿狀病毒感染的外部形態(tài)來(lái)判斷目的蛋白的表達(dá)情況，因此很容易出現(xiàn)收集病毒時(shí)間過(guò)早或過(guò)晚而導(dǎo)致的目的蛋白表達(dá)水平偏低或活性下降的問(wèn)題。將目的蛋白構(gòu)建成EGFP的融合表達(dá)蛋白，因?yàn)楹笳哂泻軓?qiáng)的綠色熒光，在熒光顯微鏡下可以非常方便地觀察目的蛋白的表達(dá)效果從而可以有效避免上述問(wèn)題的發(fā)生。

His和Strep-tag II雙標(biāo)簽系統(tǒng)，便于分離純化。pFastBac1-C-EGFP表達(dá)的目的蛋白EGFP融合蛋白的C端含有編碼8×His標(biāo)簽的序列，因此可以非常便捷地使用鎳柱進(jìn)行分離純化，也可以使用His標(biāo)簽抗體來(lái)識(shí)別目的蛋白融合蛋白的表達(dá)。同時(shí)，本質(zhì)粒表達(dá)的目的蛋白EGFP融合蛋白的C端還含有短肽親和標(biāo)簽Strep-tag II的序列。Strep-tag II是由8個(gè)氨基酸(WSHPQFEK)構(gòu)成的短肽序列，在生理?xiàng)l件下可通過(guò)Strep-Tactin純化介質(zhì)高選擇性地對(duì)Strep-tag II融合蛋白進(jìn)行親和純化，該標(biāo)簽的純化條件比較溫和，能很好地保持目的蛋白的生物活性，并僅通過(guò)一步親和層析后就有可能獲得超過(guò)99%純度的目的蛋白。

帶有PreScission位點(diǎn)，便于去除標(biāo)簽。本質(zhì)粒表達(dá)的融合蛋白，在目的蛋白和EGFP蛋白之間有PreScission蛋白酶識(shí)別的八肽序列LEVLFQGP，因此在目的蛋白純化后或純化的同時(shí)可以利用PreScission蛋白酶切除目的蛋白C端的EGFP蛋白、8×His標(biāo)簽以及Strep-tag II標(biāo)簽。PreScission蛋白酶酶切發(fā)生在八肽序列的Q和G之間，如果目的蛋白基因是通過(guò)無(wú)縫克隆的方法以理想的方式克隆在PreScission酶切位點(diǎn)之后，那么目的蛋白的N端可以只留下兩個(gè)額外的氨基酸殘基GP。

pFastBac1-C-EGFP是基于Bac-to-Bac桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)(Bac-to-Bac Baculovirus Expression System)而設(shè)計(jì)的表達(dá)載體。Bac-to-Bac桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)是由Luckow等人于1993年發(fā)展的一種快速而有效產(chǎn)生重組桿狀病毒的方法。該系統(tǒng)主要包括以下兩個(gè)組分：(1)用于插入目的基因的pFastBac載體，目的基因如EGFP等插入后受桿狀病毒特異性啟動(dòng)子(baculovirus-specific promoter) polyhedrin啟動(dòng)子調(diào)控表達(dá)；(2)含桿狀病毒穿梭載體bacmid (bMON14272, 136kb)和輔助質(zhì)粒(helper plasmid，用于表達(dá)轉(zhuǎn)座必須的轉(zhuǎn)座蛋白)的大腸桿菌DH10Bac宿主菌株(D0346)。將pFastBac重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化該菌株可發(fā)生pFastBac重組質(zhì)粒中mini-Tn7元件和bacmid上的mini-attTN7發(fā)生轉(zhuǎn)座，從而形成重組的bacmid。位點(diǎn)特異的轉(zhuǎn)座會(huì)破壞宿主的lacZα基因，從而可通過(guò)藍(lán)白斑篩選重組克隆。PCR等方法鑒定重組克隆后，提取重組的bacmid轉(zhuǎn)染昆蟲(chóng)細(xì)胞，可以產(chǎn)生重組桿狀病毒，并表達(dá)目的蛋白和融合蛋白。擴(kuò)增重組的桿狀病毒并感染昆蟲(chóng)細(xì)胞，就可以大量表達(dá)純化目的蛋白了。

昆蟲(chóng)桿狀病毒表達(dá)質(zhì)粒為氨芐青霉su抗性。

pFastBac1-C-EGFP質(zhì)粒的主要信息如下：

Feature Nucleotide	Position
f1 origin	2-457
Ampicillin resistance gene	589-1449
pUC origin	1620-2208
Tn 7R	2511-2735
Gentamicin resistance gene	2802-3335
Polyhedrin promoter (P_PH)	3904-3995
Multiple cloning site	4032-4073
PreScission	4074-4097
EGFP sequence	4098-4814
8×His Tag	4815-4838
Strep-tag II	4851-4874
SV40 polyadenylation signal	5007-5141
Tn 7L	5170-5335

pFastBac1-C-EGFP質(zhì)粒(5517bp)的圖譜如下：

pFastBac1-C-EGFP中沒(méi)有的酶切位點(diǎn)(Restriction enzymes that do not cut pFastBac1-C-EGFP)包括：

AatII	AbsI	Acc65I	AfeI	AflII	AgeI	ApaI
AscI	AsiSI	BarI	BbvCI	BfuAI	BlpI	BmgBI
BmtI	BplI	BsiWI	BspDI	BspMI	BssHII	BstAPI
BstEII	Bsu36I	ClaI	CspCI	Eco53kI	EcoNI	FseI
FspAI	KasI	KflI	KpnI	MauBI	MluI	MreI
MteI	NarI	NdeI	NheI	NotI	ENruI	NsiI
PacI	PaqCI	PasI	PflMI	PluTI	PmeI	PmlI
PshAI	PspOMI	PsrI	PvuII	RsrII	SacI	SbfI
SexAI	SfiI	SfoI	SgrAI	SgrDI	SmaI	SpeI
SphI	SrfI	StuI	SwaI	TspMI	XcmI	XmaI
ZraI

pFastBac1-C-EGFP中的單酶切位點(diǎn)(Restriction enzymes that cut pFastBac1-C-EGFP)包括：

AjuI	,(N)₅`(N)₇GAA(N)7TTGG(N)₆,(N)₅`	3063	HpaI	GTT\|AAC	5006
AlwNI	CAG,NNN`CTG	1855	MfeI	C`AATT,G	4993
AvrII	C`CTAG,G	5157	MscI	TGG\|CCA	2709
BaeI	,(N)₅`(N)₁₀ACNNNNGTAYC(N)₇,(N)₅`	2803	NaeI	GCC\|GGC	129
BamHI	G`GATC,C	4032	NcoI	C`CATG,G	4835
BanII	G,RGCY`C	161	NgoMIV	G`CCGG,C	127
BbsI	GAAGACNN`NNNN,	3757	PaeR7I	C`TCGA,G	4068
BclI	T`GATC,A	5142	PflFI	GACN`N,NGTC	3228
BsaHI	GR`CG,YC	836	PfoI	T`CCNGG,A	4378
BseYI	C`CCAG,C	1960	PpuMI	RG`GWC,CY	4092
BsmBI	CGTCTCN`NNNN,	3182	PspXI	VC`TCGA,GB	4068
BspQI	GCTCTTCN`NNN,	2381	PstI	C,TGCA`G	4066
BstBI	TT`CG,AA	4867	PvuI	CG,AT`CG	1007
BstZ17I	GTA\|TAC	3884	SacII	CC,GC`GG	2768
EcoO109I	RG`GNC,CY	4092	SalI	G`TCGA,C	4050
EcoRI	G`AATT,C	4044	SapI	GCTCTTCN`NNN,	2381
EcoRV	GAT\|ATC	2825	SnaBI	TAC\|GTA	3881
Esp3I	CGTCTCN`NNNN,	3182	TfiI	G`AWT,C	2290
FalI	,(N)₅`(N)₈AAG(N)₅CTT(N)₈,(N)₅`	4575	Tth111I	GACN`N,NGTC	3228
FspI	TGC\|GCA	1153	XbaI	T`CTAG,A	4056
HindIII	A`AGCT,T	4878	XhoI	C`TCGA,G	4068

pFastBac1-C-EGFP質(zhì)?？墒褂玫臏y(cè)序引物序列如下：

pFastbac-F primer (3995-4014): 5'-TAT TCC GGA TTA TTC ATA CC-3'

pFastBac-R primer (4909-4927): 5' -ACA AAT GTG GTA TGG CTG A-3'

包裝清單：

產(chǎn)品編號(hào)	產(chǎn)品名稱(chēng)	包裝
D2804-1µg	pFastBac1-C-EGFP	1µg
D2804-100µg	pFastBac1-C-EGFP	100µg
—	說(shuō)明書(shū)	1份

保存條件：

-20℃保存。

注意事項(xiàng)：

本產(chǎn)品僅限于專(zhuān)業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。

為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

關(guān)鍵詞：顯微鏡

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