Fluo-4 AM是常用的檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度的熒光探針之一。分子式為C51H50F2N2O23,分子量為1096.95。
Fluo-4 AM在Fluo-3 AM的基礎(chǔ)上改進(jìn)而成,其特點(diǎn)是加載更快并且在相同條件下熒光更加明亮。Fluo-4 AM將Fluo-3 AM結(jié)構(gòu)中的氯原子替換成了氟原子,導(dǎo)致它的最大激發(fā)波長(zhǎng)會(huì)向短波長(zhǎng)處偏離12nm左右。這個(gè)波長(zhǎng)更接近于氬激光器的波長(zhǎng)488nm,所以用氬激光器激發(fā)時(shí),F(xiàn)luo-4的熒光強(qiáng)度會(huì)比Fluo-3強(qiáng)一倍。由于Fluo-4與鈣離子的親和力和Fluo-3相近,所以使用上和Fluo-3也基本相同,可以使用激光共聚焦顯微鏡、熒光酶標(biāo)儀等熒光檢測(cè)儀器來(lái)測(cè)定細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度的變化。Fluo-4 AM和Fluo-3 AM的結(jié)構(gòu)式參考圖1。
圖1. Fluo-4 AM和Fluo-3 AM的結(jié)構(gòu)式。
Fluo-4 AM是Fluo-4的乙酰甲酯衍生物,是一種可以穿透細(xì)胞膜的熒光染料。Fluo-4 AM的熒光非常弱,其熒光不會(huì)隨鈣離子濃度升高而增強(qiáng)。Fluo-4 AM進(jìn)入細(xì)胞后可以被細(xì)胞內(nèi)的酯酶剪切形成Fluo-4,從而被滯留在細(xì)胞內(nèi)。Fluo-4可以和鈣離子結(jié)合,結(jié)合鈣離子后可以產(chǎn)生較強(qiáng)的熒光,最大激發(fā)波長(zhǎng)為494nm,最大發(fā)射波長(zhǎng)為516nm。實(shí)際檢測(cè)時(shí)推薦使用的激發(fā)波長(zhǎng)為488nm左右,發(fā)射波長(zhǎng)為512-520nm。Fluo-4的激發(fā)光譜和發(fā)射光譜參考圖2。
圖2. Fluo-4的激發(fā)光譜和發(fā)射光譜
用于細(xì)胞內(nèi)鈣離子檢測(cè)時(shí),F(xiàn)luo-4 AM的常用濃度為0.5-5μM。通常用含有0.5-5μM的Fluo-4 AM的適當(dāng)溶液和細(xì)胞一起在20-37℃孵育10-60分鐘進(jìn)行熒光探針裝載,隨后適當(dāng)洗滌,洗滌后可以考慮適當(dāng)再孵育20-30分鐘以確保Fluo-4 AM在細(xì)胞內(nèi)充分轉(zhuǎn)變成Fluo-4。
本Fluo-4 AM(鈣離子熒光探針) 是配制于無(wú)水DMSO (anhydrous DMSO)中的儲(chǔ)存母液,濃度為2mM。
包裝清單:
產(chǎn)品編號(hào) | 產(chǎn)品名稱 | 包裝 |
S1060 | Fluo-4 AM(鈣離子熒光探針,2mM) | 25μl |
— | 說(shuō)明書(shū) | 1份 |
保存條件:
-20℃避光保存,6個(gè)月有效。
注意事項(xiàng):
Fluo-4 AM遇水極易分解,建議第一次使用時(shí),母液分裝并密封保存,同時(shí)注意保持干燥。
Fluo-4 AM在4℃、冰浴等較低溫度情況下會(huì)凝固而粘在離心管管底、管壁或管蓋內(nèi),可以20-25℃水浴溫育片刻至全部融解后使用。
探針的工作濃度、細(xì)胞量、孵育溫度和時(shí)間等需要根據(jù)不同實(shí)驗(yàn)預(yù)先摸索。
熒光染料均存在淬滅問(wèn)題,請(qǐng)盡量注意避光,以減緩熒光淬滅。
本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用,不得用于臨床診斷或治療,不得用于食品或藥品,不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。