Sephadex LH-20/葡聚糖凝膠主要性能參數(shù):
分離范圍 (球蛋白) 100-4000
顆粒大小 ( μm ) 20-150
應(yīng)用范圍 ,脂肪酸,激素,維他命,天然產(chǎn)物
pH穩(wěn)定性 2-13
流速 (cm/h ) 500
Sephadex LH-20/葡聚糖凝膠/乙酸乙酯分離系統(tǒng)的原理及應(yīng)用
除了以甲醇、丙酮、二氯甲烷為流動(dòng)相外,我們還可以使用乙酸乙酯為流動(dòng)相,以Sephadex LH-20為固定相,對(duì)某些混合物進(jìn)行分離。乙酸乙酯,一種中等極性的疏質(zhì)子溶劑,在分離某些低分子量有機(jī)物時(shí),優(yōu)于丙酮和二氯甲烷。在對(duì)混合物的洗脫順序上,乙酸乙酯與丙酮、二氯甲烷相同,但其所使用的固定相Sephadex LH-20的柱床體積較小,分離速度更快。除此之外,Sephadex LH-20在乙酸乙酯中的膨脹程度小于在丙酮中的膨脹程度,因此,導(dǎo)致了膨脹后的Sephadex LH-20凝膠孔體積變小,孔徑變窄,從而使其更易吸附低分子量的中等極性有機(jī)化合物,分離效果更好。乙酸乙酯對(duì)混合物進(jìn)行分離的原理,主要是基于待分離物質(zhì)間的極性和氫鍵的差異。
Sephadex LH-20/葡聚糖凝膠分離的技巧:
?。?/span>1)分離時(shí)流速不可太快,切切不可心急,所謂欲速則不達(dá);接餾分時(shí)可開全速,節(jié)省時(shí)間。
?。?/span>2)柱子盡可能長(zhǎng),Sephadex LH20 柱長(zhǎng)的增加將極大地改善分離,所不要吝惜填料,寧可將填料全裝在一根大柱子中,不要將填料裝成幾根小柱。所謂集中優(yōu)勢(shì)兵力,打擊敵人。
?。?/span>3)餾分一定要接的細(xì),可1/10,或1/20 個(gè)保留體積接成一餾分。
?。?/span>4)洗脫體積一般為2-3個(gè)保留體積,對(duì)特殊保留強(qiáng)的化合物,可洗脫5個(gè)保留體積。
?。?/span>5)鞣質(zhì)成分死吸附嚴(yán)重,如不在乎填料者,可用Sephadex LH20 分鞣質(zhì)
(6)Sephadex LH20 對(duì)黃酮類成分的分離效果,方法很成型,有大量文獻(xiàn)參考。
?。?/span>7)填料反復(fù)使用,每次用完,一般可用甲醇將柱子洗干凈,然后用下一次分離的起步溶劑將甲醇替換出來,待用。暫時(shí)不用試可以水洗→含水醇洗(醇的濃度逐步遞增)→醇洗,最后泡在醇中貯于磨口瓶中備用。如長(zhǎng)期不用時(shí),可在以上處理基礎(chǔ)上,減壓抽干,再用少量洗凈抽干,室溫充分揮散至無醚味后,60~80°C干燥后保存。