Counstar Rigel S3在鄰域的應(yīng)用

免疫療法，如CAR-T治療包括從病人收集外周血單核細(xì)胞（PBMC），然后分離所需的T細(xì)胞亞群，通過(guò)基因改造產(chǎn)生工程CAR-T細(xì)胞，CAR-T細(xì)胞在體外大規(guī)模擴(kuò)增后再回輸?shù)交颊摺?Countstar Rigel S3系統(tǒng)可以對(duì)整個(gè)CAR-T生產(chǎn)過(guò)程中細(xì)胞濃度，活率進(jìn)行監(jiān)測(cè)，并且符合GMP的要求。

AO/PI雙熒光法檢測(cè)活率：

吖啶橙和碘化丙啶是可以和細(xì)胞核核酸結(jié)合的熒光染料。AO可以穿透活細(xì)胞和死細(xì)胞對(duì)細(xì)胞核進(jìn)行染色并發(fā)出綠色熒光，PI進(jìn)入死細(xì)胞對(duì)細(xì)胞和進(jìn)行染色并發(fā)出紅色熒光。因此AO/PI為細(xì)胞核染料，可以準(zhǔn)確區(qū)分活細(xì)胞與死細(xì)胞，而且可以排除雜質(zhì)或者非特異細(xì)胞的干擾，進(jìn)行精準(zhǔn)的濃度活率檢測(cè)。

AO/PI雙熒光染色法PBMC細(xì)胞圖像

細(xì)胞凋亡：

細(xì)胞凋亡的測(cè)定是通過(guò)測(cè)量細(xì)胞早期凋亡激活的標(biāo)記來(lái)了解細(xì)胞如何死亡。 這些是凋亡細(xì)胞的特定生物化學(xué)和形態(tài)學(xué)標(biāo)記，而在正常細(xì)胞和壞死細(xì)胞中不發(fā)生的此變化。 使用Countstar FL通過(guò)Hoechst 33342，Annexin V-FITC，PI標(biāo)記細(xì)胞, 可以將細(xì)胞分成不同的階段。 該Counstar軟件可以通過(guò)直接計(jì)數(shù)提供即時(shí)結(jié)果。

圖 4 K562靶細(xì)胞與效應(yīng)細(xì)胞混合培養(yǎng)3h 后，Hoechst 33342，CFSE，PI染色的熒光圖像

GFP轉(zhuǎn)染

GFP可通過(guò)轉(zhuǎn)基因技術(shù)引入動(dòng)物細(xì)胞或其他微生物。 Countstar Rigel S3為檢測(cè)GFP轉(zhuǎn)染提供了一種快速簡(jiǎn)便的檢測(cè)方法。 用Hoechst 33342和碘化丙啶（PI）染色來(lái)確定總細(xì)胞群和死細(xì)胞群以及檢測(cè)表達(dá)GFP的群體。 該軟件可以通過(guò)直接計(jì)數(shù)給出即時(shí)結(jié)果（包括GFP陽(yáng)性百分比，濃度和活率）。

圖 9使用Hoechst 33342（藍(lán)色）定位活細(xì)胞，并且可以容易地確定表達(dá)GFP的細(xì)胞（綠色）的百分比。 用碘化丙錠（PI;紅色）染色死細(xì)胞。