產(chǎn)品屬性:
產(chǎn)品名稱 | 檢測方法 | 規(guī)格 | 貨號 |
輔酶ⅠNAD測試盒50管/24樣 | 可見分光光度法 | 50管/24樣 | BJ-01S9511 |
商品介紹:
測定意義
輔酶ⅠNAD(H)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中,NAD+是糖酵解(EMP)和三羧酸循環(huán)(TCA)的主要氫受體,生成的NADH經(jīng)呼吸電子鏈(ETC)傳遞把電子交給氧,在合成ATP的同時,形成大量的ROS,同時NADH再生為NAD+。糖、脂、蛋白質三大代謝物質分解中的氧化反應絕大部分通過這一體系完成。NAD(H)含量和NADH/NAD+比值的高低可用于評價糖酵解和TCA循環(huán)的強弱。較高的NAD(H)及NADH/NAD+比值說明細胞呼吸耗氧量較高,處于過氧化狀態(tài)。此外,NADH/NAD+比值升高也可抑制糖酵解和TCA循環(huán)。另外,NAD+降解產(chǎn)物對細胞信號傳導、代謝和基因表達等具有重要的調(diào)控作用。
測定原理
分別用酸性和堿性提取液提取樣品中NAD+和NADH,NADH通過PMS的遞氫作用,還原氧化型噻唑藍(MTT)為甲瓚,在570nm下檢測吸光值;而NAD+可被乙醇脫氫酶還原為NADH,進一步采用MTT還原法檢測。
需自備的儀器和用品
可見分光光度計、臺式離心機、移液器、1 mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
注意事項:
①加入試劑的順序應一致,以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照雞血紅蛋白(HB)ELISA檢測試劑盒說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。
④底物A應揮發(fā),避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標板時應充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質。
⑧試劑應按標簽說明書儲存,使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄,不可保存。
⑨不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用
樣品制備:
1). 直接或稀釋使用清亮無色中性液體樣品,體積可達2.000ml。
2). 過濾混濁溶液。
3). 除去樣品中的CO 2 (果糖含量測試盒說明書過過濾)。
4 ). 果糖含量測試盒說明書過加氫氧化鉀或氫氧化鈉將酸性樣品的PH值調(diào)至8.0。
5 ). 調(diào)整酸性淺色樣品的PH值至8.0,孵育約15分鐘。
6 ). 用空白樣品做對照測定有色樣品(如有必要調(diào)整PH值至8.0)。
7 ). 用PVPP( 聚乙烯吡咯烷酮)或聚酰胺處理深色未經(jīng)稀釋或體積更大的樣品。
8 ). 壓碎、攪勻固體或半固體樣品,用水溶解提取。
9 ). 用Carrez試劑將含有蛋白質的樣品去蛋白。
10).含脂肪的樣品用熱水提取。
乙醇脫氫酶(ADH)測試盒 微量法 乙醇脫氫酶測試盒100管/96樣
乙醇脫氫酶(ADH)測試盒 紫外分光光度法 乙醇脫氫酶測試盒50管/48樣
單脫氫抗壞血酸還原酶(MDHAR)測試盒 微量法 單脫氫抗壞血酸還原酶測試盒100管/96樣
單脫氫抗壞血酸還原酶(MDHAR)測試盒 紫外分光光度法 單脫氫抗壞血酸還原酶測試盒50管/48樣
甲醛脫氫酶(FDH)測試盒 微量法 甲醛脫氫酶測試盒100管/96樣
甲醛脫氫酶(FDH)測試盒 紫外分光光度法 甲醛脫氫酶測試盒50管/48樣
乙醛脫氫酶(ALDH)測試盒 微量法 乙醛脫氫酶測試盒100管/96樣
乙醛脫氫酶(ALDH)測試盒 紫外分光光度法 乙醛脫氫酶測試盒50管/48樣
輔酶ⅡNADP(H)含量測試盒 微量法 輔酶ⅡNADP測試盒100管/48樣
輔酶ⅡNADP(H)含量測試盒 可見分光光度法 輔酶ⅡNADP測試盒50管/24樣
NADP磷酸酶(NADPase)測試盒 微量法 NADP磷酸酶測試盒100管/96樣
NADP磷酸酶(NADPase)測試盒 可見分光光度法 NADP磷酸酶測試盒50管/48樣
6磷酸葡萄糖脫氫酶(G6PDH)/葡萄糖6磷酸脫氫酶測試盒 微量法 6磷酸葡萄糖脫氫酶測試盒100管/96樣
6磷酸葡萄糖脫氫酶(G6PDH)/葡萄糖6磷酸脫氫酶測試盒 紫外分光光度法 6磷酸葡萄糖脫氫酶測試盒50管/48樣
胞漿異檸檬酸脫氫酶(ICDHc)測試盒 微量法 胞漿異檸檬酸脫氫酶測試盒100管/96樣
胞漿異檸檬酸脫氫酶(ICDHc)測試盒 紫外分光光度法 胞漿異檸檬酸脫氫酶測試盒50管/48樣
NADP蘋果酸酶(NADPME)測試盒 微量法 NADP蘋果酸酶測試盒100管/96樣
NADP蘋果酸酶(NADPME)測試盒 紫外分光光度法 NADP蘋果酸酶測試盒50管/48樣
小鼠骨髓間充質干細胞(EGFP標記)
人骨髓間充質干細胞(hMSCs)
人間充質干細胞-脂肪
人間充質干細胞-肝
人間充質干細胞-臍帶
小鼠神經(jīng)干細胞
小鼠海馬神經(jīng)膠質細胞(EGFP標記)
小鼠皮層神經(jīng)膠質細胞(EGFP標記)
小鼠神經(jīng)干細胞(EGFP標記)
人腦微血管內(nèi)皮細胞
人腦血管平滑肌細胞
人海馬神經(jīng)元
人少突膠質細胞
人星形膠質細胞
小鼠成纖維細胞(EGFP標記)
mCF, 小鼠心臟成纖維細胞
MN-c, 小鼠皮質神經(jīng)元
輔酶ⅠNAD測試盒50管/24樣MN-h, 小鼠海馬神經(jīng)元
MSC, 小鼠雪旺細胞
MA, 小鼠星形膠質細胞
MLF, 小鼠淋巴成纖維細胞
mRTEC, 小鼠腎小管上皮細胞
操作流程:
1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2. 設置標準品孔和樣本孔,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL;
3. 樣本孔中加入待測樣本50μL;空白孔不加。
4. 除空白孔外,標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5. 棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液(350μL),靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復洗板5次(也可用洗板機洗板)。
6. 每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
7. 每孔加入終止液50μL,15min內(nèi),在450nm波長處測定各孔的OD值。