一、檢測(cè)原理
在一定條件下，有機(jī)磷和氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥對(duì)*酯酶正常功能有抑制作用，其抑制率與農(nóng)藥的濃度呈正相關(guān)。正常條件下，*酯酶(ChE)催化神經(jīng)傳導(dǎo)代謝產(chǎn)物類(lèi)似物（碘化硫代乙酰*ATCI或碘化硫代丁酰*BTCI）水解，其水解產(chǎn)物與顯色劑（二硫代二硝基苯甲酸DTNB）發(fā)生反應(yīng)，產(chǎn)生黃色物質(zhì)，用分光光度計(jì)或農(nóng)殘測(cè)試儀在412nm處測(cè)定吸光度的變化值（△A），計(jì)算出抑制率可以判斷出樣品中是否有高劑量有機(jī)磷或氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥殘留的存在。
對(duì)于酶抑制率法來(lái)說(shuō)，*酯酶制劑是為關(guān)鍵的因素，其質(zhì)量技術(shù)水平?jīng)Q定了檢測(cè)的靈敏度、穩(wěn)定性和可靠性。*酯酶制劑的研發(fā)工作一直是本公司的重點(diǎn)，我們研究了大量的酶源材料，在提取方法和保持酶活性穩(wěn)定技術(shù)等方面也積累了豐富的經(jīng)驗(yàn)，是目前國(guó)內(nèi)可以根據(jù)客戶需求，生產(chǎn)不同靈敏度和活性的液體酶制劑的生產(chǎn)廠家，產(chǎn)量和質(zhì)量都一直處于國(guó)內(nèi)水平，其中比較有代表性的產(chǎn)品如下：
AB204 農(nóng)殘速測(cè)試劑 按照標(biāo)準(zhǔn)GB/T5009.199-2003配制 500份裝/套
緩 沖 劑 10包 每包加500mL蒸餾水或純凈水溶解常溫存放
*酯酶 10瓶 不用配制，直接取用4℃冰箱保存 每份加100μL
顯 色 劑 2瓶 加25mL緩沖液溶解4℃冰箱保存 每份加100μL
底 物 4瓶 加12.5mL蒸餾水或純凈水溶解 4℃冰箱保存每份加100μL或者加2.5mL蒸餾水或純凈水溶解

4℃冰箱保存 每份加20μL
酶 活 力 空白對(duì)照1分鐘吸光度變化值(ΔΑ0）在0.15-0.3之間。
使用方法：請(qǐng)按照標(biāo)準(zhǔn)方法GB/T 5009.199-2003操作，或根據(jù)農(nóng)藥殘留測(cè)試儀的使用說(shuō)明進(jìn)行測(cè)試。

1、使用方法
取2g果蔬樣品（塊莖類(lèi)取4g)，葉菜剪成1cm左右見(jiàn)方的碎片，塊莖類(lèi)取橫截面樣品或取其表皮，放入三角瓶中，加入10mL緩沖液，振蕩1～2min，倒出提取液，靜置2min，待測(cè)。若提取液混濁或雜質(zhì)太多可過(guò)濾后再測(cè)。
2、測(cè)試
對(duì)照測(cè)試：于反應(yīng)瓶中加入2.5mL緩沖液，再分別加入100μL酶液和顯色劑，混勻，靜置反應(yīng)10min后加入100μL底物，搖勻并立即倒入比色杯中，及時(shí)放入儀器的測(cè)量室第1通道，合上蓋。按〈B〉鍵，顯示屏下方延遲10s后，測(cè)量時(shí)間開(kāi)始倒計(jì)時(shí)180s，計(jì)時(shí)完畢，顯示屏顯示吸光度增量及抑制率。在進(jìn)行對(duì)照測(cè)試時(shí)，2～8通道可同時(shí)進(jìn)行樣品測(cè)試。
樣品測(cè)試：于反應(yīng)瓶中加入2.5mL待測(cè)液，再分別加入100μL酶液和顯色劑，混勻，靜置反應(yīng)10min后加入100μL底物，搖勻并立即倒入比色杯中，及時(shí)放入儀器的測(cè)量室通道，合上蓋。按〈M〉鍵，顯示屏下方延遲10s后，測(cè)量時(shí)間開(kāi)始倒計(jì)時(shí)180s，計(jì)時(shí)完畢，顯示屏顯示吸光度增量及抑制率。數(shù)據(jù)自動(dòng)保存，如有需要按〈P〉鍵打印。
3、結(jié)果判定
以分光光度計(jì)測(cè)試(412 nm波長(zhǎng))時(shí)，按下式計(jì)算抑制率：
抑制率(%)=[(ΔΑ0－ΔΑt )/ΔΑ0]×100
以農(nóng)藥殘留快速測(cè)試儀檢測(cè)時(shí)其抑制率一般可自動(dòng)計(jì)算。若樣品抑制率≥50%，表示樣品農(nóng)殘標(biāo)，為陽(yáng)性結(jié)果。陽(yáng)性結(jié)果的樣品需做2次以上重復(fù)檢測(cè)，多次檢測(cè)仍呈陽(yáng)性需用氣相色譜等儀器做進(jìn)一步確認(rèn)。

二、檢測(cè)靈敏度
由于采用的標(biāo)準(zhǔn)方法的不同，取樣量、檢測(cè)程序和判定標(biāo)準(zhǔn)也有不同，如國(guó)標(biāo)法以抑制率≥50%判定為陽(yáng)性，而行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)則以抑制率≥70%判定為陽(yáng)性。我們進(jìn)行了大量的對(duì)比實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)在實(shí)際檢測(cè)中，兩種方法的終檢測(cè)靈敏度還是基本一致的。我們用農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)液對(duì)農(nóng)殘速測(cè)試劑的低檢測(cè)限進(jìn)行了多次測(cè)試，并通過(guò)了中國(guó)廣州分析測(cè)試中心和蔬菜水果質(zhì)量檢驗(yàn)測(cè)試中心(廣州)等檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)的檢測(cè)驗(yàn)證，結(jié)果如下：
農(nóng)殘速測(cè)試劑對(duì)幾種常見(jiàn)農(nóng)藥的低檢測(cè)限(mg/kg)

注：在實(shí)際生產(chǎn)過(guò)程中，低檢測(cè)限可能會(huì)隨產(chǎn)品種類(lèi)和酶活性的變化而有波動(dòng)，并可以根據(jù)客戶的具體需求做出調(diào)整。

三、保存條件及保質(zhì)期
本公司的農(nóng)殘速測(cè)試劑穩(wěn)定性較好，可以常溫運(yùn)輸或郵寄，長(zhǎng)期存放應(yīng)在4℃冰箱中，保質(zhì)期為12個(gè)月；室溫或常溫保存時(shí)，保質(zhì)期為3～6個(gè)月。

四、注意事項(xiàng)
1、任何試劑使用時(shí)，用一瓶打開(kāi)一瓶，用完后才使用新的，防止試劑變質(zhì)。
2、酶、底物和顯色劑碰到一起會(huì)馬上發(fā)生生化反應(yīng)，移液器和容器都應(yīng)各自貼上標(biāo)簽，單獨(dú)使用，以免交叉污染。
3、從任何試劑瓶吸出的試劑，禁止再次注射回試劑瓶。

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