公司產(chǎn)品僅供科研研究使用、不得用于臨床診斷!
產(chǎn)品介紹:
RNAfixer 無(wú)液氮 RNA 樣品儲(chǔ)存液保存條件:
室溫(18-25℃)保存1 年以上,如果使用時(shí)發(fā)現(xiàn)有沉淀或者析出,可以37℃水浴加熱重新溶解后使用,重新溶解后不會(huì)影響產(chǎn)品質(zhì)量。
產(chǎn)品介紹:
RNAfixer 是一種液態(tài)的無(wú)毒的組織保存液體,可以迅速滲入新鮮組織細(xì)胞的胞漿中,在非凍狀態(tài)下原位穩(wěn)定和保護(hù)細(xì)胞內(nèi)的RNA。取下組織薄片后立刻浸入RNAfixer 保存并不影響將來(lái)提取RNA 的質(zhì)量和數(shù)量。RNAfixer 消除了RNA 樣品需要立刻處理或者必須液氮保存的不方便。浸入RNAfixer 后,新鮮組織細(xì)胞中RNA 可以完好的在37℃下保存一天,在25℃下保存一周,4℃下保存一個(gè)月,在-20℃或-80℃下長(zhǎng)期保存。
RNA 病毒樣品(如HCV 和HIV)可在37℃保存一個(gè)月。適用于動(dòng)物組織(心、肝、腎、肌肉、睪丸、腦、脾等)、培養(yǎng)細(xì)胞、RNA 病毒、 果蠅、細(xì)菌、白細(xì)胞、一些植物組織等。
產(chǎn)品特點(diǎn):
1.操作容易:將組織成適當(dāng)大小,浸沒(méi)在RNAfixer 中即可使其RNA 不被降解。
2.無(wú)需液氮:使樣品的保存不需液氮,干冰或-80℃冰箱,尤其適用于臨床和野外樣品的快速和大規(guī)模采集。
3.方便運(yùn)輸:處理過(guò)的樣品能在25℃保存一周,使樣品郵寄和運(yùn)輸變得容易和便宜,有利學(xué)術(shù)合作和交流。
4.多次凍融: 經(jīng)RNAfixer 處理的樣品可反復(fù)凍融多次, 其間可對(duì)樣品進(jìn)行各種處理而不影響最終提取的RNA 的質(zhì)量。
5.可比性強(qiáng): RNAfixer 能減少大規(guī)模樣品處理中的誤差,增加各次實(shí)驗(yàn)數(shù)間的可比性, 對(duì)大規(guī)?;虮磉_(dá)譜的分析尤其有用。
使用說(shuō)明:
RNAfixer 只用于新鮮組織,浸泡入 RNAfixer 前禁止冷凍組織。只需要迅速將新鮮組織成長(zhǎng)、寬,高任意一邊厚度<0.5 厘米浸泡入 RNAfixer 即可(只要有一邊厚度不超過(guò) 0.5 厘米,RNAfixer 可以迅速滲透,其它兩邊的尺寸并不重要)。將新鮮組織浸泡 在 5 倍體積的 RNAfixer 中,按照指示存放在適當(dāng)?shù)臏囟取?/span>
1.動(dòng)物組織 RNAfixer 并不破壞或者溶解組織結(jié)構(gòu),因此浸泡在 RNAfixer 中達(dá)到滲透平衡的組織 可以從 RNAfixer 中取出,然后切成更小的塊,然后放回到 RNAfixer 中下次繼續(xù)使用。小器官如小鼠肝、腎、脾不需要剪切,可以完整的存放在 RNAfixer 中。
推薦不同組織樣品的 RNAstore 使用量:
2.植物組織很多植物組織直接浸泡入 RNAfixer 即可,有的植物有天然滲透屏障如臘質(zhì)保護(hù)層,需要先破壞掉臘質(zhì)層,便于 RNAfixer 滲透。
3.組織培養(yǎng)細(xì)胞細(xì)胞吹打下來(lái)后,離心收集細(xì)胞,棄上清,用冰浴的 PBS 緩沖液洗一次去除殘留培養(yǎng)液。將細(xì)胞懸浮在少量 PBS 緩沖液中。加入五到十倍體積 RNAfixer, 混均。
4.白細(xì)胞對(duì)于全血中白細(xì)胞的保存,需將白細(xì)胞從紅細(xì)胞和血清中分離出來(lái),并按組織培養(yǎng)細(xì)胞一樣處理后,白細(xì)胞便能有效地保存在 RNAfixer 中。不要將全血、血漿或血清中的 RNA 保存在 RNAfixer 中,因?yàn)樗鼈兊鞍缀窟^(guò)高,與 RNAfixer 混合后易形成不溶的沉淀。
5.細(xì)菌
細(xì)菌并不能在 RNAfixer 中生長(zhǎng),但是 RNAfixer 并不破壞細(xì)菌,E. coli 在 4℃保存一個(gè)月仍舊可以提出完整的 RNA。
RNAfixer 中樣本的存放:
1.存放在-80℃樣品長(zhǎng)期保存用。將 RNA fixer 中樣本放置于 4℃過(guò)夜,然后將樣本撈出,盡量去除干凈 RNAfixer 液體,然后放置于-80℃。對(duì)于組織培養(yǎng)細(xì)胞,則不需要去除RNAfixer,直接冷凍于-80℃,并不會(huì)裂解細(xì)胞。樣品使用時(shí)可以在室溫融化,并且還可以再次冷凍而不影響 RNA 的完整性和產(chǎn)量。
2.存放在-20℃將 RNAfixer 中樣本放置于 4℃過(guò)夜,然后轉(zhuǎn)移到-20℃。在-20℃樣品并不會(huì)被冰凍,但是可能會(huì)形成一些結(jié)晶,這并不會(huì)影響將來(lái)的 RNA 提取。樣品使用時(shí)可以在室溫 融化,并且還可以再次冷凍而不影響 RNA 的完整性和產(chǎn)量。
3.存放在 4℃樣本可以在 4℃存放一個(gè)月。
4.存放于 25℃存放于 25℃樣本的 RNA 在一周內(nèi)保持完整,保存兩周的樣品 RNA 有輕微降解,勉強(qiáng)能用于northern analysis, 但是質(zhì)量足夠用于nuclease protection assay or RT-PCR 。
5.存放于 37℃存放于 37℃樣本的 RNA 在 24 小時(shí)內(nèi)保持完整,3 天的時(shí)候有部分降解。RNAfixer 保存樣本的 RNA 提?。?/span>將樣本從 RNAfixer 中取出,RNAfixer 可以直接倒入水池,用自來(lái)水沖即可,不需特殊處理。
1.組織
用干凈鑷子將樣本從 RNAfixer 中撈出,用吸水紙稍稍吸去殘留的 RNAfixer 后,可以和新鮮組織一樣按照液氮研磨,然后勻漿處理的標(biāo)準(zhǔn)程序進(jìn)行提取 RNA。
2.細(xì)胞
對(duì)于儲(chǔ)存在 RNAfixer 中的細(xì)胞有兩種選擇。一是去除 RNAfixer 后提取 RNA, 另一個(gè)是直接從細(xì)胞和 RNAfixer 的混合物提取。
1)去除 RNAfixer 后提取 RNA存放于 RNAfixer 中的細(xì)胞變得不那么脆弱,可以承受較高的離心速度而不被裂解。 我們有在 5000g 離心成功收集細(xì)胞的經(jīng)驗(yàn),由于每種細(xì)胞的強(qiáng)度不一樣,可以先用不重要的細(xì)胞做個(gè)預(yù)試驗(yàn),以保證在使用的速度下離心不會(huì)破壞細(xì)胞。另一個(gè)選擇是在離心前加等體積的 PBS 稀釋 RNAfixer 和細(xì)胞的混合物,以減少溶液的密度,使細(xì)胞溶液可以沉淀下來(lái)。
2)不去除 RNAfixer,直接提取 RNA
也可以直接加 10 倍體積的一步法提取試劑(如 TRIpure,TRI reagent)到細(xì)胞和RNAfixer 的混合物,然后按照正常步驟操作。
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