操作步驟(僅供參考):
1、貼壁細(xì)胞的消化
①吸除培養(yǎng)液,用無(wú)菌 PBS、Hanks 液或無(wú)血清培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞一次,以去除殘余的血清。
②加入少量 源葉生物 Trypsin-EDTA solution,略蓋過(guò)細(xì)胞即可,室溫放置 0.5~2min, 不同的細(xì)胞消化時(shí)間有所不同。
③顯微鏡下觀察,細(xì)胞明顯收縮,并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變
化;或者用槍吹打細(xì)胞發(fā)現(xiàn)細(xì)胞剛好可以被吹打下來(lái),吸除胰酶細(xì)胞消化液。加入含血清的 *細(xì)胞培養(yǎng)液,吹打下細(xì)胞,即可直接用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
④如果發(fā)現(xiàn)消化不足,則加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞消化時(shí)間過(guò)長(zhǎng),未及吹打細(xì)胞,細(xì)胞已經(jīng)有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落, 直接用胰酶細(xì)胞培養(yǎng)液把細(xì)胞全部吹打下來(lái)。1000~2000g 離心 1min,沉淀細(xì)胞,盡量去除胰酶細(xì)胞消化液后,加入含血清的*培養(yǎng)液重新懸浮細(xì)胞,即可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
2、組織的消化不同的組織需要消化的時(shí)間相差很大,通常以消化后可以充分打散組織為宜。
產(chǎn)品名稱:DAPI圖片
規(guī)格:5mg/ml×0.2ml
儲(chǔ)存條件:—20℃,12個(gè)月
用途:又稱培養(yǎng)細(xì)胞消化液,用于培養(yǎng)細(xì)胞的消化,或者一些組織的消化。
注意事項(xiàng):無(wú)菌溶液,經(jīng)過(guò)濾除菌處理。主要由胰酶或胰蛋白酶、EDTA組成,含酚紅。自備材料:
1、 PBS、Hanks液或無(wú)血清培養(yǎng)液
2、 顯微鏡
3、 離心機(jī)
注意事項(xiàng):
1、 盡量減少反復(fù)凍融的次數(shù),以免失效。
2、在使用 Trypsin-EDTA solution 過(guò)程中,要特別注意避免消化液被細(xì)菌污染。
3、Trypsin-EDTA solution 消化細(xì)胞時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng),否則細(xì)胞鋪板后生長(zhǎng)狀況會(huì)較差。
4、為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
使用說(shuō)明:
1. 貼壁細(xì)胞的消化:
a.吸去培養(yǎng)液,用無(wú)菌的PBS、Hanks液或無(wú)血清培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞一次,以去除殘余的血清。
b.加入少量胰酶細(xì)胞消化液(含酚紅,不含EDTA),略蓋過(guò)細(xì)胞,室溫放置30秒至2分鐘。不同的細(xì)胞消化時(shí)間有所不同。
c.顯微鏡下觀察,細(xì)胞明顯收縮,并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變化;或者用槍吹打細(xì)胞發(fā)現(xiàn)細(xì)胞剛好可以被吹打下來(lái)。此時(shí)吸除胰酶細(xì)胞消化液(含酚紅,不含EDTA)。加入含血清的*細(xì)胞培養(yǎng)液,吹打下細(xì)胞,即可直接用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
d.如果發(fā)現(xiàn)消化不足,則加入胰酶細(xì)胞消化液(含酚紅,不含EDTA)重新消化。 如果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞消化時(shí)間過(guò)長(zhǎng),未及吹打細(xì)胞,細(xì)胞已經(jīng)有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落,直接用胰酶細(xì)胞培養(yǎng)液把細(xì)胞全部吹打下來(lái)。1000-2000g離心1分鐘,沉淀細(xì)胞,盡量去除胰酶細(xì)胞消化液(含酚紅,不含EDTA)后,加入含血清的*培養(yǎng)液重新懸浮細(xì)胞,即可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
2. 組織的消化:
a.不同的組織需要消化的時(shí)間相差很大,通常以消化后可以充分打散組織為宜。 附錄:不同胰酶細(xì)胞消化液的比較和選擇
1. 如果希望消化能力比較強(qiáng),推薦選擇C0201胰酶細(xì)胞消化液(0.25%胰酶)和C0203 胰酶細(xì)胞消化液(0.25%胰酶,含酚紅),這兩種胰酶細(xì)胞消化液都含有EDTA,消化能力相對(duì)更強(qiáng)一些。
2. 如果希望觀察比較方便,推薦選擇含酚紅的C0203 胰酶細(xì)胞消化液(0.25%胰酶,含酚紅)和C0207 胰酶細(xì)胞消化液(0.25%胰酶,含酚紅,不含EDTA)。
3. 對(duì)于酚紅可能會(huì)干擾后續(xù)的測(cè)試分析,推薦選擇不含酚紅的C0201 胰酶細(xì)胞消化液(0.25%胰酶)和C0205 胰酶細(xì)胞消化液(0.25%胰酶,不含EDTA)。
4. 對(duì)于EDTA可能會(huì)干擾后續(xù)的測(cè)試分析時(shí),推薦選擇不含EDTA的C0205 胰酶細(xì)胞消化液(0.25%胰酶,不含EDTA)和C0207 胰酶細(xì)胞消化液(0.25%胰酶,含酚紅,不含EDTA)。
5. 對(duì)于胰酶特別敏感的細(xì)胞,即對(duì)于消化時(shí)間特別快、消化時(shí)間比較難控制的情況,推薦選擇C0202胰酶細(xì)胞消化液(0.05%胰酶)或C0204 胰酶細(xì)胞消化液(0.05%胰酶, 含酚紅)。
Cystatin A英文名稱:COX7A2人膜內(nèi)氨酰氨基肽酶(ANPEP)免疫試劑盒
CLIC1英文名稱:CACNA1F人膜聯(lián)蛋白A2(ANXA2/ANX2/ANX2L4/CAL1H/LPC2D)抗體免疫試劑盒
Claudin 8英文名稱:Calcineurin B人膜聯(lián)蛋白Ⅶ(ANX-Ⅶ)免疫試劑盒
Phospho-Caspase-9 (Ser196)英文名稱:CaMKK1人膜聯(lián)蛋白Ⅵ(ANX-Ⅵ)免疫試劑盒
phospho-Cdc25B (Ser353)英文名稱:CREB3L3人膜聯(lián)蛋白Ⅴ(ANX-Ⅴ)抗體(IgM)免疫試劑盒
phospho-CDKN1B (Thr157)英文名稱:Phospho-CHEK1 (Ser296)人膜聯(lián)蛋白Ⅴ(ANX-Ⅴ)抗體(IgG)免疫試劑盒
phospho-CDKN1B (Thr187)英文名稱:Calpain 12人膜聯(lián)蛋白Ⅴ(ANX-Ⅴ)免疫試劑盒
phospho-CDKN1B (Ser178)英文名稱:C20orf134人膜聯(lián)蛋白Ⅳ(ANX-Ⅳ)免疫試劑盒
DAPI圖片FXYD7英文名稱:DBH雞雌二醇(E2)免疫試劑盒
FABP5英文名稱:GP340雞傳染性支氣管炎(IB)抗體免疫試劑盒
FPRL1英文名稱:Dnmt1雞傳染性法氏囊病(IBD)抗體免疫試劑盒
FLASH英文名稱:Dnmt3a雞觸珠蛋白相關(guān)蛋白(HPR)免疫試劑盒
FOXF1英文名稱:Dnmt3 Beta雞超氧化物歧化酶(SOD)免疫試劑盒
FIP1L1英文名稱:DR3雞層連蛋白/板層素(LN)免疫試劑盒
FOXD4英文名稱:DR4/雞補(bǔ)體蛋白4(C4)免疫試劑盒
phospho-Filamin A (Ser1458)英文名稱:DTNBP1雞補(bǔ)體蛋白3(C3)免疫試劑盒