組成及試劑配制:
1、科研 (229E/NL63)核酸檢測試劑盒費(fèi)用說明書酶標(biāo)板：一塊（96孔）
2、 標(biāo)準(zhǔn)品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時反復(fù)顛倒/搓動以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測稀釋液B：1×10ml。

樣本采集、存放及運(yùn)輸：
1、樣本采集：各類型樣本按照常規(guī)方法采集；
2、存放：樣本在2~8℃條件下保存應(yīng)不超過72h，-70℃以下可長期保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融（多凍融3次）；
3、運(yùn)輸：采用泡沫箱加冰密封進(jìn)行運(yùn)輸。
【標(biāo)本要求】
人體鼻腔或咽部分泌物:用無菌捻拭子拭取鼻腔或咽部分泌物，將分泌物或咽拭子置入無菌玻璃管（含0.4ml滅菌生理鹽水），用無菌棉球?qū)⒃嚬苋o后，密閉送檢。標(biāo)本可立即用于檢測，也可保存于-20℃待測。
【檢驗(yàn)方法】
1.標(biāo)本、對照品的核酸裂解處理
用商品化（取得醫(yī)療器械許可證）的RNA提取試劑盒處理標(biāo)本，具體操作參見該試劑盒說明書。
或用Trizol法提取，方法如下：取100?l樣品置于1.5ml 離心管中，加入300?l裂解液（Trizol），再加入100， 混勻器上振蕩混勻5sec或顛倒混勻15次； 13000rpm離心15min， 吸取上層液體，加入等體積異丙醇，顛倒混勻室溫靜置10min， 13000rpm離心10min，輕輕倒去上清；加入700?l 75%乙醇，顛倒洗滌，13000rpm離心5min，輕輕倒去上清，倒置于吸水紙上，棄盡液體或4000rpm離心5sec，將管壁上的殘余液體甩到管底部，用微量加樣器盡量吸干液體，加入20?l DEPC-H2O溶解RNA。
2.試劑配制
取n×19?l H7N9核酸熒光PCR檢測混合液與n×1?l RT-PCR酶（n為反應(yīng)管數(shù)）,振蕩混勻數(shù)秒, 3000rpm離心數(shù)秒。
3.加樣取上述混合液20?l置于PCR管中，然后將樣品核酸提取液、DEPC-H2O、陽性對照品各5?l分別加入PCR管中，蓋好管蓋，立即進(jìn)行PCR擴(kuò)增反應(yīng)。
4. PCR擴(kuò)增反應(yīng)管置于定量熒光PCR儀上，推薦循環(huán)參數(shù)設(shè)置：
45℃×10min; 95℃×15min;循環(huán)一次，再按95℃×15sec→60℃×60sec，循環(huán)45次;單點(diǎn)熒光檢測在60℃，反應(yīng)體系為25?l。
熒光通道檢測選擇：選用FAM通道。

R1 ELISA Kit磷酸化cyclin D1抗體表達(dá)于SiSo細(xì)胞系的受體結(jié)合型腫瘤抗原(R1)ELISA試劑盒

MN ELISA KitCD13氨肽酶N抗體變腎上腺素(MN)ELISA試劑盒

flagellin ELISA Kit巨噬細(xì)胞炎性蛋白MIP-3a抗體鞭毛蛋白(flagellin)ELISA試劑盒

Sema 4C ELISA Kit間隙連接蛋白32抗體臂板蛋白4C(Sema 4C)ELISA試劑盒

S3F ELISA KitC端結(jié)合蛋白1抗體臂板蛋白3F(S3F)ELISA試劑盒

Sema 3A ELISA Kit高分子量角蛋白抗體臂板蛋白3A(Sema 3A)ELISA試劑盒

PDXP ELISA Kit22號染色體開放閱讀框39抗體吡哆醛/吡哆醇維生素B6磷酸酶(PDXP)ELISA試劑盒

PDXK ELISA Kit周期素G抗體吡哆醛/吡哆醇維生素B6激酶(PDXK)ELISA試劑盒

PY ELISA KitCrk p38抗體吡啶交聯(lián)物(PY)ELISA試劑盒

PYD ELISA Kit磷酸化Crk p38抗體吡啶酚(PYD)ELISA試劑盒

NPC ELISA Kit核心結(jié)合因子α1抗體Cbfα1鼻咽癌(NPC)ELISA試劑盒

NP ELISA Kit膽囊收縮素8抗體苯丙酸諾龍/苯丙酸去甲睪酮(NP)ELISA試劑盒

LPA ELISA Kit細(xì)胞表面趨化因子受體1抗體苯丙氨酸(LPA)ELISA試劑盒

BJP ELISA Kit細(xì)胞表面趨化因子受體2抗體本周蛋白(BJP)ELISA試劑盒

CD ELISA Kit細(xì)胞表面趨化因子受體3抗體胞質(zhì)動力蛋白(CD)ELISA試劑盒

SOD3 ELISA Kit細(xì)胞表面趨化因子受體4抗體胞外超氧化物歧化酶(SOD3)ELISA試劑盒

cPLA2-α ELISA Kit活化半胱胺酸蛋白酶蛋白-3抗體胞漿型磷脂酶A2-α(cPLA2-α)ELISA試劑盒

cPLA2 ELISA Kit抗Ⅵ型膠原抗體胞漿型磷脂酶A2(cPLA2)ELISA試劑盒

CIg ELISA Kit半胱氨酸蛋白酶8抗體胞漿免疫球蛋白(CIg)ELISA試劑盒

CPN10 ELISA Kit信號轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白亞基8抗體伴侶蛋白10(CPN10)ELISA試劑盒

Gal-7 ELISA Kit細(xì)胞表面趨化因子受體10抗體半乳糖凝集素7(Gal-7)ELISA試劑盒

Galectin3 ELISA Kit轉(zhuǎn)鐵蛋白受體抗體半乳糖凝集素3(Galectin3)ELISA試劑盒

Galactose ELISA Kit鈣粘蛋白相關(guān)的神經(jīng)受體2抗體半乳糖(Galactose)ELISA試劑盒

CysLTs ELISA Kit細(xì)胞周期檢測點(diǎn)激酶1抗體半胱氨酰白三烯(CysLTs)ELISA試劑盒

Cys-C ELISA Kit鈣粘蛋白相關(guān)的神經(jīng)受體1抗體半胱氨酸蛋白酶抑制劑/胱抑素C(Cys-C)ELISA試劑盒

TMPO ELISA Kit尾側(cè)型同源轉(zhuǎn)錄因子2/3抗體板層素相關(guān)多肽2亞型α(TMPO)ELISA試劑盒

反應(yīng)五要素:

參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則：
①引物長度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴(kuò)增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC隨機(jī)分布，避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補(bǔ)，特別是3'端的互補(bǔ)，否則會形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是末及倒數(shù)第二個堿基，應(yīng)嚴(yán)格要求配對，以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn)， 被擴(kuò)增的靶序列有適宜的酶切位點(diǎn)， 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以低引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴(kuò)增，且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會。