組成及試劑配制:
1、漢坦病毒Ⅱ型(HTV-Ⅱ)核酸檢測試劑盒方法廠家酶標(biāo)板:一塊(96孔)
2、 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復(fù)顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 價格 |
漢坦病毒Ⅱ型(HTV-Ⅱ)核酸檢測試劑盒方法廠家 | 48T | 電詢 |
樣本采集、存放及運輸:
1、樣本采集:各類型樣本按照常規(guī)方法采集;
2、存放:樣本在2~8℃條件下保存應(yīng)不超過72h,-70℃以下可長期保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融(多凍融3次);
3、運輸:采用泡沫箱加冰密封進行運輸。
【標(biāo)本要求】
人體鼻腔或咽部分泌物:用無菌捻拭子拭取鼻腔或咽部分泌物,將分泌物或咽拭子置入無菌玻璃管(含0.4ml滅菌生理鹽水),用無菌棉球?qū)⒃嚬苋o后,密閉送檢。標(biāo)本可立即用于檢測,也可保存于-20℃待測。
【檢驗方法】
1.標(biāo)本、對照品的核酸裂解處理
用商品化(取得醫(yī)療器械許可證)的RNA提取試劑盒處理標(biāo)本,具體操作參見該試劑盒說明書。
或用Trizol法提取,方法如下:取100?l樣品置于1.5ml 離心管中,加入300?l裂解液(Trizol),再加入100, 混勻器上振蕩混勻5sec或顛倒混勻15次; 13000rpm離心15min, 吸取上層液體,加入等體積異丙醇,顛倒混勻室溫靜置10min, 13000rpm離心10min,輕輕倒去上清;加入700?l 75%乙醇,顛倒洗滌,13000rpm離心5min,輕輕倒去上清,倒置于吸水紙上,棄盡液體或4000rpm離心5sec,將管壁上的殘余液體甩到管底部,用微量加樣器盡量吸干液體,加入20?l DEPC-H2O溶解RNA。
2.試劑配制
取n×19?l H7N9核酸熒光PCR檢測混合液與n×1?l RT-PCR酶(n為反應(yīng)管數(shù)),振蕩混勻數(shù)秒, 3000rpm離心數(shù)秒。
3.加樣取上述混合液20?l置于PCR管中,然后將樣品核酸提取液、DEPC-H2O、陽性對照品各5?l分別加入PCR管中,蓋好管蓋,立即進行PCR擴增反應(yīng)。
4. PCR擴增反應(yīng)管置于定量熒光PCR儀上,推薦循環(huán)參數(shù)設(shè)置:
45℃×10min; 95℃×15min;循環(huán)一次,再按95℃×15sec→60℃×60sec,循環(huán)45次;單點熒光檢測在60℃,反應(yīng)體系為25?l。
熒光通道檢測選擇:選用FAM通道。
MDP1 ELISA Kit蛙皮素受體3抗體鎂依賴性磷酸酶1(MDP1)ELISA試劑盒
PWM ELISA Kit骨形態(tài)發(fā)生蛋白8抗體美洲商陸素(PWM)ELISA試劑盒
CED-3 ELISA Kit骨形態(tài)發(fā)生蛋白6抗體美麗線蟲凋亡基因(CED-3)ELISA試劑盒
Ank-B ELISA Kit磷酸化Bcl-2抗體錨蛋白B(Ank-B)ELISA試劑盒
ATM ELISA Kit磷酸化Bcl-2抗體毛細血管擴張性共濟失調(diào)突變基因(ATM)ELISA試劑盒
MPA ELISA Kit磷酸化Bcl-xL蛋白抗體麥考酚酸(MPA)ELISA試劑盒
Gliadin-IgA ELISA Kit神經(jīng)母細胞瘤相關(guān)蛋白ARID3B抗體麥角蛋白IgA(Gliadin-IgA)ELISA試劑盒
CLIC4 ELISA Kit微管蛋白β4抗體氯離子胞內(nèi)通道蛋白4(CLIC4)ELISA試劑盒
OVA sIgG ELISA Kit霍亂腸毒素β鏈抗體卵清蛋白特異性IgG(OVA sIgG)ELISA試劑盒
OVA sIgE ELISA Kitβ晶體蛋白B1抗體卵清蛋白特異性IgE(OVA sIgE)ELISA試劑盒
FSTL-1 ELISA Kit磷酸化Bax抗體卵泡抑素樣蛋白1(FSTL-1)ELISA試劑盒
FS ELISA Kit磷酸化癌抗雌激素耐藥蛋白1抗體卵泡抑素(FS)ELISA試劑盒
LCAT ELISA Kit磷酸化癌抗雌激素耐藥蛋白1抗體卵磷脂膽固醇?;D(zhuǎn)移酶(LCAT)ELISA試劑盒
OVX1 ELISA Kit磷酸化癌抗雌激素耐藥蛋白1抗體卵巢癌抗原X1(OVX1)ELISA試劑盒
Trx ELISA Kit磷酸化相關(guān)死亡促進因子抗體硫氧化還原蛋白(Trx)ELISA試劑盒
TXNDC6 ELISA Kit肌動蛋白樣蛋白6A抗體硫氧還蛋白域包含蛋白6(TXNDC6)ELISA試劑盒
TrxR ELISA Kit磷酸化紅細胞陰離子交換蛋白1抗體硫氧還蛋白還原酶(TrxR)ELISA試劑盒
HSPG2 ELISA Kit磷酸化紅細胞陰離子交換蛋白1抗體硫酸乙酰肝素蛋白多糖2(HSPG2)ELISA試劑盒
MS ELISA Kit障礙自整合蛋白BAF抗體硫酸褪黑色素(MS)ELISA試劑盒
CSPG5 ELISA Kit磷酸化轉(zhuǎn)錄因子MYB相關(guān)蛋白B抗體硫酸軟骨素蛋白聚糖5(CSPG5)ELISA試劑盒
CSGALNACT1 ELISA Kit磷酸化轉(zhuǎn)錄因子MYB相關(guān)蛋白B抗體硫酸軟骨素N-乙酰氨半乳糖胺基轉(zhuǎn)移酶1(CSGALNACT1)ELISA試劑盒
CS ELISA Kit磷酸化B-Raf抗體硫酸軟骨素(CS)ELISA試劑盒
DSCSPG ELISA Kit磷酸化B-Raf抗體硫酸皮膚素-硫酸軟骨素PG(DSCSPG)ELISA試劑盒
DS ELISA Kit磷酸化B-Raf抗體硫酸皮膚素(DS)ELISA試劑盒
SFT ELISA Kit磷酸化B-Raf抗體硫酸腦苷酯(SFT)ELISA試劑盒
HS/HPS ELISA Kit轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)蛋白BACH2抗體硫酸類肝素(HS/HPS)ELISA試劑盒
反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是末及倒數(shù)第二個堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以低引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。