組成及試劑配制:
1、假結(jié)核耶爾森菌PCR檢測試劑盒品牌 酶標板:一塊(96孔)
2、 標準品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復(fù)顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 價格 |
假結(jié)核耶爾森菌PCR檢測試劑盒品牌 | Yersinia pseudotuberculosisPCR | 電詢 |
樣本采集、存放及運輸:
1、樣本采集:各類型樣本按照常規(guī)方法采集;
2、存放:樣本在2~8℃條件下保存應(yīng)不超過72h,-70℃以下可長期保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融(多凍融3次);
3、運輸:采用泡沫箱加冰密封進行運輸。
【標本要求】
人體鼻腔或咽部分泌物:用無菌捻拭子拭取鼻腔或咽部分泌物,將分泌物或咽拭子置入無菌玻璃管(含0.4ml滅菌生理鹽水),用無菌棉球?qū)⒃嚬苋o后,密閉送檢。標本可立即用于檢測,也可保存于-20℃待測。
【檢驗方法】
1.標本、對照品的核酸裂解處理
用商品化(取得醫(yī)療器械許可證)的RNA提取試劑盒處理標本,具體操作參見該試劑盒說明書。
或用Trizol法提取,方法如下:取100?l樣品置于1.5ml 離心管中,加入300?l裂解液(Trizol),再加入100, 混勻器上振蕩混勻5sec或顛倒混勻15次; 13000rpm離心15min, 吸取上層液體,加入等體積異丙醇,顛倒混勻室溫靜置10min, 13000rpm離心10min,輕輕倒去上清;加入700?l 75%乙醇,顛倒洗滌,13000rpm離心5min,輕輕倒去上清,倒置于吸水紙上,棄盡液體或4000rpm離心5sec,將管壁上的殘余液體甩到管底部,用微量加樣器盡量吸干液體,加入20?l DEPC-H2O溶解RNA。
2.試劑配制
取n×19?l H7N9核酸熒光PCR檢測混合液與n×1?l RT-PCR酶(n為反應(yīng)管數(shù)),振蕩混勻數(shù)秒, 3000rpm離心數(shù)秒。
3.加樣取上述混合液20?l置于PCR管中,然后將樣品核酸提取液、DEPC-H2O、陽性對照品各5?l分別加入PCR管中,蓋好管蓋,立即進行PCR擴增反應(yīng)。
4. PCR擴增反應(yīng)管置于定量熒光PCR儀上,推薦循環(huán)參數(shù)設(shè)置:
45℃×10min; 95℃×15min;循環(huán)一次,再按95℃×15sec→60℃×60sec,循環(huán)45次;單點熒光檢測在60℃,反應(yīng)體系為25?l。
熒光通道檢測選擇:選用FAM通道。
CD134 ELISA KitⅡ型膠原α1蛋白/軟骨鈣素抗體CD134分子(CD134)ELISA試劑盒
CD117 ELISA KitCSMD2蛋白抗體CD117分子(CD117)ELISA試劑盒
CD10 ELISA KitCSMD3蛋白抗體CD10分子(CD10)ELISA試劑盒
CCR7 ELISA Kit鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶CSTP1抗體CC趨化因子受體7(CCR7)ELISA試劑盒
CCR5 ELISA KitCTAGE6蛋白抗體CC趨化因子受體5(CCR5)ELISA試劑盒
CCR2 ELISA Kit皮膚T細胞淋巴瘤相關(guān)抗原抗體4抗體CC趨化因子受體2(CCR2)ELISA試劑盒
CCR1 ELISA Kit膜蛋白CLDND2抗體CC趨化因子受體1(CCR1)ELISA試劑盒
CCL7/MCP3/SCYA6/SCYA7 ELISA Kit含半胱氨酸和組氨酸豐富域蛋白1抗體CC趨化因子7(CCL7/MCP3/SCYA6/SCYA7)ELISA試劑盒
CCL5/D17S136E/SCYA5 ELISA Kit豬圓環(huán)病毒Ⅱ型衣殼蛋白CC趨化因子5(CCL5/D17S136E/SCYA5)ELISA試劑盒
C/EBPε ELISA Kit抗菌肽CAMP抗體CCAAT增強子結(jié)合蛋白ε(C/EBPε)ELISA試劑盒
C/EBPδ ELISA Kit卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白134抗體CCAAT增強子結(jié)合蛋白δ(C/EBPδ)ELISA試劑盒
C/EBPα ELISA Kit卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白69抗體CCAAT增強子結(jié)合蛋白α(C/EBPα)ELISA試劑盒
CREB ELISA Kit卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白98抗體cAMP反應(yīng)元件結(jié)合蛋白(CREB)ELISA試劑盒
KCNN2 ELISA Kit卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白70抗體Ca2+激活K+通道蛋白2(KCNN2)ELISA試劑盒
C4BP ELISA Kit卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白51抗體C4結(jié)合蛋白(C4BP)ELISA試劑盒
Cartonectin/CTRP3/CORS-26 ELISA Kit卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白125抗體C1q/TNF相關(guān)蛋白3(Cartonectin/CTRP3/CORS-26)ELISA試劑盒
BF ELISA Kit卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白50抗體B因子(BF)ELISA試劑盒
BCAP31 ELISA Kit卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白90A抗體B細胞受體相關(guān)蛋白31(BCAP31)ELISA試劑盒
BCR ELISA Kit卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白71抗體B細胞受體(BCR)ELISA試劑盒
BCGF ELISA Kit卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白37抗體B細胞生長因子(BCGF)ELISA試劑盒
Bcl6 ELISA Kit卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白47抗體B細胞淋巴瘤因子6(Bcl6)ELISA試劑盒
Bcl3 ELISA Kit卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白17抗體B細胞淋巴瘤因子3(Bcl3)ELISA試劑盒
Bcl-2 ELISA Kit卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白58抗體B細胞淋巴瘤因子2(Bcl-2)ELISA試劑盒
Bcl-xl ELISA Kit卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白94抗體B細胞淋巴瘤-XL(Bcl-xl)ELISA試劑盒
BLNK ELISA Kit卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白82抗體B細胞連接蛋白(BLNK)ELISA試劑盒
BAFF-R ELISA KitCDK5激活結(jié)合蛋白2抗體B細胞活化因子受體(BAFF-R)ELISA試劑盒
BAFF ELISA KitCDK2相互作用蛋白抗體B細胞活化因子(BAFF)ELISA試劑盒
BCDF ELISA Kit周期蛋白依賴性激酶14抗體B細胞分化因子(BCDF)ELISA試劑盒
NFKBIE ELISA Kit癌胚抗原抗體相關(guān)細胞粘附分子19抗體B細胞κ輕肽基因增強子核因子抑制因子ε(NFKBIE)ELISA試劑盒
BLC-1/CXCL13 ELISA Kit先天性紅細胞生成異常性貧血蛋白1抗體B-淋巴細胞趨化因子1(BLC-1/CXCL13)ELISA試劑盒
CD20 ELISA Kit癌胚抗原抗體相關(guān)細胞粘附分子16抗體B淋巴細胞抗原(CD20)ELISA試劑盒
Bid ELISA Kit癌胚抗原抗體相關(guān)細胞粘附分子21抗體BH3結(jié)構(gòu)域凋亡誘導(dǎo)蛋白(Bid)ELISA試劑盒
BCL2L1 ELISA Kit貓眼綜合征染色體候選基因5抗體Bcl-2樣蛋白1(BCL2L1)ELISA試劑
BAX ELISA KitCUE結(jié)構(gòu)域蛋白1抗體Bcl-2相關(guān)X蛋白(BAX)ELISA試劑盒
ASP ELISA Kit卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白52抗體A組鏈球菌菌壁多糖抗體(ASP)ELISA試劑盒
ASP Ag ELISA Kit補體片段C3c抗體A組鏈球菌多糖抗原(ASP Ag)ELISA試劑盒
反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是末及倒數(shù)第二個堿基,應(yīng)嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以低引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。