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產(chǎn)品名稱 | 大鼠垂體瘤細胞：GH3 |
規(guī)格 | 1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶 |
分類 | 細胞系 |
貨號 | GOY-01X0338 |
商品介紹：
名稱 大鼠垂體瘤細胞：GH3 別稱GH 3 種屬大鼠 年齡（性別）7月齡 組織來源垂體 生長特性半貼半懸 細胞形態(tài)上皮細胞樣 背景描述GH3細胞是由Tashjian·A·H等人于1965年7月從一只7月齡的雌性Wistar-Furth大鼠的垂體腫瘤中分離建立的。GH3細胞不是直接來源于GH1細胞的克隆，而是從原代培養(yǎng)的GH1細胞在大鼠身上傳代兩次形成的腫瘤中建立的。上皮細胞樣的GH3細胞比GH1細胞分泌更高水平的生長激素，也可產(chǎn)生催乳素。對調(diào)控GH3細胞分泌蛋白類激素的研究表明，可以刺激GH3細胞生長激素的分泌、抑制催乳素的產(chǎn)生。 生物安全等級1 生長培養(yǎng)基Ham's F-12K＋15% HS＋2.5% FBS＋1% P/S 推薦傳代比例1:2-1:4 推薦換液頻率2~3次/周 倍增時間~60-90小時 凍存條件 凍存液：55% 基礎培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO 溫度：液氮 培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5% 溫度：37℃ 基因表達情況prolactin; growth hormone (somatotrophin) |
使用方法：
收到細胞后，請按照以下方法進行操作。
1. 取出25cm2培養(yǎng)瓶，75%酒精消毒，拆下封口膜，放入37℃，5% CO2細胞培養(yǎng)箱中靜置6-8小時或者過夜，以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
2. 待細胞達到80%匯合時準備進行傳代培養(yǎng)。
3. 細胞傳代
1) 吸出25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細胞一次；
2) 添加0.125%消化液約1mL至培養(yǎng)瓶中，37℃溫浴3min左右；倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后吸棄消化液，再加入*培養(yǎng)液終止消化；
3) 用吸管輕輕吹打混勻，按1:2或1:3等適當?shù)谋壤M行接種傳代，然后補充新鮮的*培養(yǎng)基至5mL，放入37℃，5% CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
4) 待細胞*貼壁后，培養(yǎng)觀察。之后每隔2-3天更換新鮮的*培養(yǎng)基。
培養(yǎng)操作：
1）復蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或將 細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并 檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類；
1. 細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞，根據(jù)細胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液，注意凍 存管做好標識。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
食蟹猴 CD2 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
食蟹猴 / 恒河猴 EpCAM / TROP-1 / TACSTD1 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
食蟹猴 / 恒河猴 EpCAM / TROP-1 / TACSTD1 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
食蟹猴 Semaphorin 4D / SEMA4D / CD100 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
食蟹猴 AMY2A / Alpha-amylase 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
小鼠 PKM2 / OIP3 桿狀病毒-昆ows\system32\EhStorShell.dll
大鼠垂體瘤細胞：GH3 phospho-ATG16A(Ser213) 磷酸化自噬相關蛋白16A抗體 規(guī)格: 0.1mlDNAPK/PRKDC DNA依賴蛋白激催化亞基抗體 規(guī)格: 0.2ml
phospho-NDEL1(Ser242) 磷酸化中心粒蛋白Nudel抗體 規(guī)格: 0.1mlC3a Receptor/C3aR 過敏毒素C3受體/補體C3受體抗體 0.2ml
1瓶 MOLT-4細胞株 MOLT-4 低溫運輸和保存
50T 沙眼衣原體和淋球菌PCR聯(lián)合測定試劑盒 低溫運輸，-20℃保存
100mL 大腸桿菌零誘導培養(yǎng)基
2 ug pET-41a(+) pET-41a(+) 低溫運輸，-20℃保存
無機鹽培養(yǎng)基 Inorganic Salt Medium 250g
5 mg H-89 . 2HCL（PKA抑制劑） Cell Apoptosis Inducer and Inhibitor -20℃保存
2 ug pQE-32 pQE-32 低溫運輸，-20℃保存
營養(yǎng)瓊脂平板（9cm） Nutrient Agar 10個/包
500mL Wash Buffer Wash Buffer 常溫保存
SSTR4 生抑素受體4抗體 規(guī)格: 0.1ml
