組成及試劑配制:
1、馬蛔蟲PCR檢測試劑盒說明書酶標板:一塊(96孔)
2、 標準品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復(fù)顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 價格 |
馬蛔蟲PCR檢測試劑盒說明書 | Parascaris equorumPCR | 電詢 |
樣本采集、存放及運輸:
1、樣本采集:各類型樣本按照常規(guī)方法采集;
2、存放:樣本在2~8℃條件下保存應(yīng)不超過72h,-70℃以下可長期保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融(多凍融3次);
3、運輸:采用泡沫箱加冰密封進行運輸。
【標本要求】
人體鼻腔或咽部分泌物:用無菌捻拭子拭取鼻腔或咽部分泌物,將分泌物或咽拭子置入無菌玻璃管(含0.4ml滅菌生理鹽水),用無菌棉球?qū)⒃嚬苋o后,密閉送檢。標本可立即用于檢測,也可保存于-20℃待測。
【檢驗方法】
1.標本、對照品的核酸裂解處理
用商品化(取得醫(yī)療器械許可證)的RNA提取試劑盒處理標本,具體操作參見該試劑盒說明書。
或用Trizol法提取,方法如下:取100?l樣品置于1.5ml 離心管中,加入300?l裂解液(Trizol),再加入100, 混勻器上振蕩混勻5sec或顛倒混勻15次; 13000rpm離心15min, 吸取上層液體,加入等體積異丙醇,顛倒混勻室溫靜置10min, 13000rpm離心10min,輕輕倒去上清;加入700?l 75%乙醇,顛倒洗滌,13000rpm離心5min,輕輕倒去上清,倒置于吸水紙上,棄盡液體或4000rpm離心5sec,將管壁上的殘余液體甩到管底部,用微量加樣器盡量吸干液體,加入20?l DEPC-H2O溶解RNA。
2.試劑配制
取n×19?l H7N9核酸熒光PCR檢測混合液與n×1?l RT-PCR酶(n為反應(yīng)管數(shù)),振蕩混勻數(shù)秒, 3000rpm離心數(shù)秒。
3.加樣取上述混合液20?l置于PCR管中,然后將樣品核酸提取液、DEPC-H2O、陽性對照品各5?l分別加入PCR管中,蓋好管蓋,立即進行PCR擴增反應(yīng)。
4. PCR擴增反應(yīng)管置于定量熒光PCR儀上,推薦循環(huán)參數(shù)設(shè)置:
45℃×10min; 95℃×15min;循環(huán)一次,再按95℃×15sec→60℃×60sec,循環(huán)45次;單點熒光檢測在60℃,反應(yīng)體系為25?l。
熒光通道檢測選擇:選用FAM通道。
劑盒
pMHC ELISA Kit載脂蛋白M抗體肽-主要組織相容性復(fù)合體復(fù)合物(pMHC)ELISA試劑盒
PPIL1 ELISA Kit載脂蛋白O抗體肽酰脯氨酰異構(gòu)酶(親環(huán)蛋白)樣1(PPIL1)ELISA試劑盒
PGRP-L ELISA Kitβ淀粉樣蛋白前體蛋白結(jié)合蛋白1抗體肽聚糖識別蛋白L(PGRP-L)ELISA試劑盒
PG ELISA Kit共濟失調(diào)性眼球運動功能喪失相關(guān)蛋白AOA1抗體肽聚糖(PG)ELISA試劑盒
PPI ELISA Kit三號染色體開放閱讀框抗體肽基脯氨酰順反異構(gòu)酶(PPI)ELISA試劑盒
Fetuin A ELISA Kit腺嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶抗體胎球蛋白A(Fetuin A)ELISA試劑盒
FETU-A ELISA Kit磷酸化水通道蛋白2抗體胎球蛋白A(FETU-A)ELISA試劑盒
PLGF ELISA KitADP核糖基化因子1抗體胎盤生長因子(PLGF)ELISA試劑盒
PL ELISA Kit乙型肝炎病毒X相關(guān)蛋白2抗體胎盤泌乳素(PL)ELISA試劑盒
PLAP ELISA KitADP核糖基化因子5抗體胎盤堿性磷酸酶(PLAP)ELISA試劑盒
HPRI ELISA KitADP核糖基化因子結(jié)合蛋白抗體胎盤核糖核酸抑止劑(HPRI)ELISA試劑盒
PP14 ELISA KitADP核糖基化因子GTP酶激活蛋白1抗體胎盤蛋白14(PP14)ELISA試劑盒
PP13 ELISA KitADP核糖基化因子相關(guān)蛋白1胎盤蛋白13(PP13)ELISA試劑盒
PP ELISA Kit琥珀酸裂解酶抗體胎盤蛋白(PP)ELISA試劑盒
HPL ELISA Kit精氨酰tRNA合成酶抗體胎盤催乳素(HPL)ELISA試劑盒
HBF ELISA Kit真核翻譯起始因子2C3抗體胎兒血紅蛋白(HBF)ELISA試劑盒
fFN ELISA Kit真核翻譯起始因子2C4抗體胎兒纖連蛋白(fFN)ELISA試劑盒
FK506 ELISA KitRho GTP酶激活蛋白15抗體他克莫司(FK506)ELISA試劑盒
DES ELISA Kit抑癌基因結(jié)合蛋白ARID1B抗體鎖鏈素(DES)ELISA試劑盒
CML ELISA KitE3連接酶蛋白ARIH2抗體羧甲基賴氨酸(CML)ELISA試劑盒
ucMGP ELISA KitADP核糖基化樣因子1抗體羧化基質(zhì)谷氨酸蛋白(ucMGP)ELISA試劑盒
ucOC ELISA KitADP核糖基化因子樣蛋白4抗體羧化不全骨鈣素(ucOC)ELISA試劑盒
MYD88 ELISA Kit肌動蛋白相關(guān)蛋白2/3抗體髓樣分化因子初次應(yīng)答基因88(MYD88)ELISA試劑盒
MyD88 ELISA Kit肌動蛋白相關(guān)蛋白2/3亞型2抗體髓樣分化因子88(MyD88)ELISA試劑盒
MD-2 ELISA Kit肌動蛋白相關(guān)蛋白2/3亞型4抗體髓樣分化蛋白2(MD-2)ELISA試劑盒
MNDA ELISA Kit芳香基硫酸酯酶家族蛋白1抗體髓性細胞核分化抗原(MNDA)ELISA試劑盒
TREM-1 ELISA Kit腫瘤抑制相關(guān)蛋白PHEMX抗體髓系細胞觸發(fā)受體-1(TREM-1)ELISA試劑盒
MAG Ab ELISA Kit精神分裂癥與犰狳重復(fù)基因抗體髓鞘相關(guān)糖蛋白抗體(MAG Ab)ELISA試劑盒
MAG ELISA Kit乙醛脫氫酶1型抗體髓鞘相關(guān)糖蛋白(MAG)ELISA試劑盒
MBP ELISA Kit磷酸化乙酰輔酶A羧化酶抗體髓鞘堿性蛋白抗體(MBP)ELISA試劑盒
MBP antibody ELISA Kit磷酸化乙酰輔酶A羧化酶抗體髓鞘堿性蛋白抗體(MBP antibody)ELISA試劑盒
MPZ ELISA Kit磷酸化腺苷三磷酸結(jié)合盒轉(zhuǎn)運體A1抗體髓鞘蛋白P0(MPZ)ELISA試劑盒
MBP ELISA Kit磷酸化鐵調(diào)節(jié)蛋白1抗體髓磷脂堿性蛋白(MBP)ELISA試劑盒
PMP2 ELISA Kit磷酸化鐵調(diào)節(jié)蛋白1抗體髓磷脂P2蛋白(PMP2)ELISA試劑盒
MPO-ANCA IgG ELISA Kit磷酸化乙酰輔酶A羧化酶抗體髓過氧化物酶特異性抗中性粒細胞胞質(zhì)抗體IgG(MPO-ANCA IgG)ELISA試劑盒
MPO ELISA Kit膜粘連蛋白6抗體髓過氧化物酶(MPO)ELISA試劑盒
AIF ELISA Kit錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白42抗體酸性鐵蛋白(AIF)ELISA試劑盒
ASM ELISA Kit胞環(huán)蛋白肌動蛋白結(jié)合蛋白抗體酸性神經(jīng)鞘磷脂酶(ASM)ELISA試劑盒
ACP ELISA Kit腺病毒5結(jié)合蛋白BS69抗體酸性磷酸酶(ACP)ELISA試劑盒
ANP32E ELISA Kit載脂蛋白A1抗體酸性富亮氨酸核磷蛋白32家族成員E(ANP32E)ELISA試劑盒
aFGF-1 ELISA Kit自噬相關(guān)蛋白16A抗體酸性成纖維細胞生長因子1(aFGF-1)ELISA試劑盒
aFGF/FGF-1 ELISA Kit磷酸化自噬相關(guān)蛋白4D抗體酸性成纖維細胞生長因子(aFGF/FGF-1)ELISA試劑盒
aFGF ELISA Kit磷酸化自噬相關(guān)蛋白4C抗體酸性成纖維細胞生長因子(aFGF)ELISA試劑盒
RLN ELISA Kit磷酸化自噬相關(guān)蛋白7抗體松弛肽/松弛素(RLN)ELISA試劑盒
RLN ELISA Kit磷酸化自噬相關(guān)蛋白16A抗體松弛素(RLN)ELISA試劑盒
BH4 ELISA Kit磷酸化自噬相關(guān)蛋白9A抗體四氫生物蝶呤(BH4)ELISA試劑盒
CLEC3B ELISA Kit磷酸化自噬相關(guān)蛋白4D抗體四連接素(CLEC3B)ELISA試劑盒
DAP/DAP1 ELISA Kit磷酸化自噬相關(guān)蛋白4D抗體死亡相關(guān)蛋白1(DAP/DAP1)ELISA試劑盒
FHA ELISA Kit磷酸化腫瘤血管內(nèi)皮標志物8抗體絲狀血球凝集素(FHA)ELISA試劑盒
MAPK ELISA Kit磷酸化自噬相關(guān)蛋白4A抗體絲裂原激活的蛋白激酶/MAP激酶(MAPK)ELISA試劑盒
MKK6 ELISA Kit磷酸化自噬相關(guān)蛋白4C抗體絲裂
反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是末及倒數(shù)第二個堿基,應(yīng)嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以低引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。