組成及試劑配制:
1、雞敗血支原體PCR檢測試劑盒說明書 酶標板:一塊(96孔)
2、 標準品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復(fù)顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 價格 |
雞敗血支原體PCR檢測試劑盒說明書 | Abalone Spherical VirusPCR | 電詢 |
樣本采集、存放及運輸:
1、樣本采集:各類型樣本按照常規(guī)方法采集;
2、存放:樣本在2~8℃條件下保存應(yīng)不超過72h,-70℃以下可長期保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融(多凍融3次);
3、運輸:采用泡沫箱加冰密封進行運輸。
【標本要求】
人體鼻腔或咽部分泌物:用無菌捻拭子拭取鼻腔或咽部分泌物,將分泌物或咽拭子置入無菌玻璃管(含0.4ml滅菌生理鹽水),用無菌棉球?qū)⒃嚬苋o后,密閉送檢。標本可立即用于檢測,也可保存于-20℃待測。
【檢驗方法】
1.標本、對照品的核酸裂解處理
用商品化(取得醫(yī)療器械許可證)的RNA提取試劑盒處理標本,具體操作參見該試劑盒說明書。
或用Trizol法提取,方法如下:取100?l樣品置于1.5ml 離心管中,加入300?l裂解液(Trizol),再加入100, 混勻器上振蕩混勻5sec或顛倒混勻15次; 13000rpm離心15min, 吸取上層液體,加入等體積異丙醇,顛倒混勻室溫靜置10min, 13000rpm離心10min,輕輕倒去上清;加入700?l 75%乙醇,顛倒洗滌,13000rpm離心5min,輕輕倒去上清,倒置于吸水紙上,棄盡液體或4000rpm離心5sec,將管壁上的殘余液體甩到管底部,用微量加樣器盡量吸干液體,加入20?l DEPC-H2O溶解RNA。
2.試劑配制
取n×19?l H7N9核酸熒光PCR檢測混合液與n×1?l RT-PCR酶(n為反應(yīng)管數(shù)),振蕩混勻數(shù)秒, 3000rpm離心數(shù)秒。
3.加樣取上述混合液20?l置于PCR管中,然后將樣品核酸提取液、DEPC-H2O、陽性對照品各5?l分別加入PCR管中,蓋好管蓋,立即進行PCR擴增反應(yīng)。
4. PCR擴增反應(yīng)管置于定量熒光PCR儀上,推薦循環(huán)參數(shù)設(shè)置:
45℃×10min; 95℃×15min;循環(huán)一次,再按95℃×15sec→60℃×60sec,循環(huán)45次;單點熒光檢測在60℃,反應(yīng)體系為25?l。
熒光通道檢測選擇:選用FAM通道。
DEFβ127 ELISA Kit艾滋病病毒抗體防御素β127(DEFβ127)ELISA試劑盒
DEFβ126 ELISA Kit艾滋病病毒抗體防御素β126(DEFβ126)ELISA試劑盒
DEFβ125 ELISA Kit艾滋病病毒抗體防御素β125(DEFβ125)ELISA試劑盒
DEFβ124 ELISA Kit結(jié)合珠蛋白相關(guān)蛋白抗體防御素β124(DEFβ124)ELISA試劑盒
DEFβ123 ELISA KitL-組氨酸脫羧酶抗體防御素β123(DEFβ123)ELISA試劑盒
DEFβ121 ELISA Kit乙型肝炎病毒X蛋白相互作用蛋白防御素β121(DEFβ121)ELISA試劑盒
DEFβ119 ELISA Kit組蛋白H2B.s抗體防御素β119(DEFβ119)ELISA試劑盒
DEFβ118 ELISA Kit組蛋白去乙酰化酶4+5+9抗體防御素β118(DEFβ118)ELISA試劑盒
DEFβ116 ELISA Kit熱休克蛋白27相關(guān)蛋白1抗體防御素β116(DEFβ116)ELISA試劑盒
DEFβ115 ELISA Kit卟膽原脫氨酶抗體防御素β115(DEFβ115)ELISA試劑盒
DEFβ114 ELISA Kit異質(zhì)核糖核蛋白U2樣蛋白抗體防御素β114(DEFβ114)ELISA試劑盒
DEFβ113 ELISA Kit肝癌衍生生長因子2抗體防御素β113(DEFβ113)ELISA試劑盒
DEFβ112 ELISA Kit肝癌相關(guān)抗原抗體57抗體防御素β112(DEFβ112)ELISA試劑盒
DEFβ110 ELISA Kit補體C3抗體防御素β110(DEFβ110)ELISA試劑盒
DEFβ103B ELISA Kit甲型流感病毒血凝素抗體防御素β103B(DEFβ103B)ELISA試劑盒
DEFβ103A ELISA Kit甲狀旁腺功能亢進蛋白2/細胞分裂周期73抗體防御素β103A(DEFβ103A)ELISA試劑盒
DEFβ1 ELISA Kit線粒體絲氨酸蛋白酶抗體防御素β1(DEFβ1)ELISA試劑盒
DEFα6 ELISA Kit鉀/鈉超極化激活環(huán)核苷酸門控通道蛋白2抗體防御素α6(DEFα6)ELISA試劑盒
DEFα5 ELISA Kit熱休克蛋白β7抗體防御素α5(DEFα5)ELISA試劑盒
DEFα3 ELISA Kit鉀/鈉超極化激活環(huán)核苷酸門控通道蛋白3抗體防御素α3(DEFα3)ELISA試劑盒
DEFα1 ELISA Kit鐵調(diào)節(jié)蛋白25抗體防御素α1(DEFα1)ELISA試劑盒
AADAC ELISA KitHD域內(nèi)含蛋白2抗體芳乙酰胺去乙?;?AADAC)ELISA試劑盒
ARO ELISA Kit艾滋病病毒p55抗體芳香酶(ARO)ELISA試劑盒
AANAT ELISA Kit造血細胞激酶抗體芳香胺-N-乙?;D(zhuǎn)移酶(AANAT)ELISA試劑盒
AHRR ELISA KitHEAT重復(fù)內(nèi)含蛋白5B蛋白抗體芳烴受體抑制因子(AHRR)ELISA試劑盒
AFMID ELISA Kit缺氧誘導(dǎo)基因1B蛋白抗體芳犬尿氨酸甲酰胺酶(AFMID)ELISA試劑盒
ARSK ELISA Kit乙?;M蛋白H4抗體芳基硫酸酯酶K(ARSK)ELISA試劑盒
ARSJ ELISA Kit熱休克蛋白B2抗體芳基硫酸酯酶J(ARSJ)ELISA試劑盒
ARSI ELISA Kit人類白細胞抗原抗體B27芳基硫酸酯酶I(ARSI)ELISA試劑盒
ARSH ELISA Kit螺旋環(huán)螺旋轉(zhuǎn)錄因子HATH6抗體芳基硫酸酯酶H(ARSH)ELISA試劑盒
ARSG ELISA Kit神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白1β2抗體芳基硫酸酯酶G(ARSG)ELISA試劑盒
ARSF ELISA KitHDHD3蛋白抗體芳基硫酸酯酶F(ARSF)ELISA試劑盒
ARSE ELISA KitHEATR3蛋白抗體芳基硫酸酯酶E(ARSE)ELISA試劑盒
ARSD ELISA Kit癌增強蛋白抗體芳基硫酸酯酶D(ARSD)ELISA試劑盒
ARSB ELISA Kit單甲基組蛋白H3K9抗體芳基硫酸酯酶B(ARSB)ELISA試劑盒
ARSA ELISA KitHDHD2B蛋白抗體芳基硫酸酯酶A(ARSA)ELISA試劑盒
PANK4 ELISA Kit造血干細胞特異性相關(guān)結(jié)合蛋白1抗體泛酸激酶4(PANK4)ELISA試劑盒
PANK3 ELISA KitI類組織相容性H-2抗原抗體D-Dalpha鏈抗體泛酸激酶3(PANK3)ELISA試劑盒
PANK2 ELISA KitHEAT重復(fù)內(nèi)含蛋白5A蛋白抗體泛酸激酶2(PANK2)ELISA試劑盒
PANK1 ELISA Kit熱休克蛋白70抗體泛酸激酶1(PANK1)ELISA試劑盒
USP8 ELISA Kit羥類固醇脫氫酶17β抗體泛素特異性肽酶8(USP8)ELISA試劑盒
UCHL1 ELISA Kit透明質(zhì)酸結(jié)合蛋白4抗體泛素羧基端酯酶L1(UCHL1)ELISA試劑盒
UBE3A ELISA KitA型流感病毒H5N1凝集素抗體泛素連接酶E3A(UBE3A)ELISA試劑盒
UBE2L3 ELISA KitA型流感病毒核衣殼蛋白抗體泛素結(jié)合酶E2C結(jié)合蛋白E2L3(UBE2L3)ELISA試劑盒
UBE2C ELISA KitA型流感病毒核衣殼蛋白抗體泛素結(jié)合酶E2C(UBE2C)ELISA試劑盒
UBE2A ELISA KitA型流感病毒核衣殼蛋白抗體泛素結(jié)合酶E2A(UBE2A)ELISA試劑盒
UCRP ELISA KitB型流感病毒蛋白抗體泛素交叉反應(yīng)蛋白(UCRP)ELISA試劑盒
UBE1L ELISA Kit人類狀瘤病毒16-E7抗體泛素激活酶樣蛋白(UBE1L)ELISA試劑盒
UBAP2 ELISA Kit跨膜蛋白酶絲氨酸1抗體泛素關(guān)聯(lián)蛋白2(UBAP2)ELISA試劑盒
UBR4 ELISA Kit肺癌癌基因蛋白3抗體泛素蛋白連接酶E3成分N-識別蛋白4(UBR4)ELISA試劑盒
UBD ELISA Kit高密度脂蛋白抗體泛素D(UBD)ELISA試劑盒
UBC ELISA Kit蛋白激酶底物相關(guān)蛋白抗體泛素C(UBC)ELISA試劑盒
Ub ELISA Kit艾滋病病毒抗體泛素(Ub)ELISA試劑盒
反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是末及倒數(shù)第二個堿基,應(yīng)嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以低引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。