組成及試劑配制:
1、麻風分枝桿菌PCR檢測試劑盒說明書酶標板:一塊(96孔)
2、 標準品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 價格 |
麻風分枝桿菌PCR檢測試劑盒說明書 | Abalone Spherical VirusPCR | 電詢 |
樣本采集、存放及運輸:
1、樣本采集:各類型樣本按照常規(guī)方法采集;
2、存放:樣本在2~8℃條件下保存應(yīng)不超過72h,-70℃以下可長期保存,但應(yīng)避免反復凍融(多凍融3次);
3、運輸:采用泡沫箱加冰密封進行運輸。
【標本要求】
人體鼻腔或咽部分泌物:用無菌捻拭子拭取鼻腔或咽部分泌物,將分泌物或咽拭子置入無菌玻璃管(含0.4ml滅菌生理鹽水),用無菌棉球?qū)⒃嚬苋o后,密閉送檢。標本可立即用于檢測,也可保存于-20℃待測。
【檢驗方法】
1.標本、對照品的核酸裂解處理
用商品化(取得醫(yī)療器械許可證)的RNA提取試劑盒處理標本,具體操作參見該試劑盒說明書。
或用Trizol法提取,方法如下:取100?l樣品置于1.5ml 離心管中,加入300?l裂解液(Trizol),再加入100, 混勻器上振蕩混勻5sec或顛倒混勻15次; 13000rpm離心15min, 吸取上層液體,加入等體積異丙醇,顛倒混勻室溫靜置10min, 13000rpm離心10min,輕輕倒去上清;加入700?l 75%乙醇,顛倒洗滌,13000rpm離心5min,輕輕倒去上清,倒置于吸水紙上,棄盡液體或4000rpm離心5sec,將管壁上的殘余液體甩到管底部,用微量加樣器盡量吸干液體,加入20?l DEPC-H2O溶解RNA。
2.試劑配制
取n×19?l H7N9核酸熒光PCR檢測混合液與n×1?l RT-PCR酶(n為反應(yīng)管數(shù)),振蕩混勻數(shù)秒, 3000rpm離心數(shù)秒。
3.加樣取上述混合液20?l置于PCR管中,然后將樣品核酸提取液、DEPC-H2O、陽性對照品各5?l分別加入PCR管中,蓋好管蓋,立即進行PCR擴增反應(yīng)。
4. PCR擴增反應(yīng)管置于定量熒光PCR儀上,推薦循環(huán)參數(shù)設(shè)置:
45℃×10min; 95℃×15min;循環(huán)一次,再按95℃×15sec→60℃×60sec,循環(huán)45次;單點熒光檢測在60℃,反應(yīng)體系為25?l。
熒光通道檢測選擇:選用FAM通道。
Smad7 ELISA Kit胰島素受體抗體Smad同源物7(Smad7)ELISA試劑盒
Smad4 ELISA Kit胰島素受體α抗體Smad同源物4(Smad4)ELISA試劑盒
Smad3 ELISA Kit胰島素受體β抗體Smad同源物3(Smad3)ELISA試劑盒
Smad1 ELISA KitKB抑制蛋白激酶α/β抗體Smad同源物1(Smad1)ELISA試劑盒
Slit3 ELISA Kit白介素12抗體Slit同源物3(Slit3)ELISA試劑盒
Slit2 ELISA Kit干擾素誘導35蛋白抗體Slit同源物2(Slit2)ELISA試劑盒
Slit1 ELISA Kit完整膜蛋白E25A抗體Slit同源物1(Slit1)ELISA試劑盒
SSH3 ELISA Kit小腸型脂肪酸結(jié)合蛋白抗體Slingshot同源物3(SSH3)ELISA試劑盒
SSH2 ELISA Kit胰島素降解酶抗體Slingshot同源物2(SSH2)ELISA試劑盒
SSH1 ELISA KitKB抑制蛋白激酶β抗體Slingshot同源物1(SSH1)ELISA試劑盒
SFXN5 ELISA Kit白介素17受體D抗體Sideroflexin5蛋白(SFXN5)ELISA試劑盒
SFXN4 ELISA Kit白介素-17B抗體Sideroflexin4蛋白(SFXN4)ELISA試劑盒
SFXN3 ELISA Kit吲哚乙酸/植物生長素單克隆抗體Sideroflexin3蛋白(SFXN3)ELISA試劑盒
SFXN2 ELISA Kit白細胞介素4受體抗體IL-4RαSideroflexin2蛋白(SFXN2)ELISA試劑盒
SFXN1 ELISA Kit白介素2受體γ鏈抗體Sideroflexin1蛋白(SFXN1)ELISA試劑盒
Shootin1 ELISA Kit白介素1受體1抗體Shootin1蛋白(Shootin1)ELISA試劑盒
SHISA5 ELISA Kit白介素1受體2抗體Shisa同源物5(SHISA5)ELISA試劑盒
SHC4 ELISA Kit白介素20受體α鏈抗體SHC-轉(zhuǎn)化蛋白4(SHC4)ELISA試劑盒
SHC3 ELISA Kit白介素20受體β鏈抗體SHC-轉(zhuǎn)化蛋白3(SHC3)ELISA試劑盒
SHC2 ELISA Kit吲哚乙酸抗體/植物生長素抗體SHC-轉(zhuǎn)化蛋白2(SHC2)ELISA試劑盒
SHC1 ELISA Kit整合素α6抗體SHC-轉(zhuǎn)化蛋白1(SHC1)ELISA試劑盒
SESN3 ELISA Kit擬南芥IKI3抗體Sestrin3蛋白(SESN3)ELISA試劑盒
SESN2 ELISA Kit白細胞介素5抗體Sestrin2蛋白(SESN2)ELISA試劑盒
SESN1 ELISA Kit白介素-1受體相關(guān)激酶1抗體Sestrin1蛋白(SESN1)ELISA試劑盒
Ses1 ELISA Kit整合素α5抗體Integrin α5Sesquipedalian1蛋白(Ses1)ELISA試劑盒
SRRT ELISA Kit整合素β1/Integrin β1抗體Serrate蛋白(SRRT)ELISA試劑盒
SNTN ELISA Kit整合素αVβ3抗體Sentan蛋白(SNTN)ELISA試劑盒
SETX ELISA Kit胰島素樣生長因子2 mRNA 結(jié)合蛋白3抗體Senataxin蛋白(SETX)ELISA試劑盒
SCEL ELISA Kit甲型流感病毒血凝素抗體Sciellin蛋白(SCEL)ELISA試劑盒
SATB1 ELISA Kit甲型流感病毒血凝素抗體SATB同源框蛋白1(SATB1)ELISA試劑盒
SRYP ELISA Kit整合素αVβ5抗體Sarcosynapsin蛋白(SRYP)ELISA試劑盒
Salusinβ ELISA Kit干擾素調(diào)節(jié)因子1抗體Salusinβ蛋白(Salusinβ)ELISA試劑盒
Salusinα ELISA Kit白介素6Salusinα蛋白(Salusinα)ELISA試劑盒
STH ELISA Kitγ干擾素誘導蛋白16抗體Saitohin蛋白(STH)ELISA試劑盒
SACS ELISA Kit整合素αVβ1抗體Sacsin蛋白(SACS)ELISA試劑盒
S100B ELISA Kit白細胞介素-20抗體S100鈣結(jié)合蛋白B(S100B)ELISA試劑盒
S100A9 ELISA Kit干擾素相關(guān)發(fā)育調(diào)節(jié)因子2抗體S100鈣結(jié)合蛋白A9(S100A9)ELISA試劑盒
S100A8 ELISA Kit白介素-1受體相關(guān)激酶2抗體S100鈣結(jié)合蛋白A8(S100A8)ELISA試劑盒
S100A7 ELISA Kit磷酸化胰島素受體β抗體S100鈣結(jié)合蛋白A7(S100A7)ELISA試劑盒
S100A6 ELISA Kit磷酸化胰島素受體β抗體S100鈣結(jié)合蛋白A6(S100A6)ELISA試劑盒
S100A5 ELISA Kit整合素alpha E2 抗體S100鈣結(jié)合蛋白A5(S100A5)ELISA試劑盒
反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是末及倒數(shù)第二個堿基,應(yīng)嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以低引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。