細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
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產(chǎn)品名稱 | 抗CD2：OKT 11 |
規(guī)格 | 1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶 |
分類 | 細胞系 |
貨號 | GOY-01X0342 |
商品介紹：
名稱 抗CD2：OKT 11 種屬小鼠 年齡（性別）不詳 組織來源小鼠B淋巴細胞，小鼠淋巴瘤細胞 生長特性懸浮細胞 細胞形態(tài)淋巴母細胞樣 背景描述OKT 11細胞是一株用人的T細胞白血病細胞(急性淋巴細胞白血病)對小鼠進行免疫，然后將免疫的小鼠脾細胞與P3X63Ag8.U1骨髓瘤細胞融合而建立的細胞系。免疫球蛋白；單克隆抗體；抗人T細胞(人T淋巴細胞)和人E玫瑰花環(huán)反應陽性胸腺細胞(人胸腺淋巴細胞)；抗CD2。 生長培養(yǎng)基IMDM＋20% FBS＋1% P/S 推薦傳代比例3×10^5-5×10^5cells/mL 推薦換液頻率2~3次/周 凍存條件 凍存液：55% 基礎培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO 溫度：液氮 培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5% 溫度：37℃ 注意事項該細胞為懸浮細胞，請注意離心收集細胞懸液；請勿直接倒掉細胞培養(yǎng)液。 |
使用方法：
收到細胞后，請按照以下方法進行操作。
1. 取出25cm2培養(yǎng)瓶，75%酒精消毒，拆下封口膜，放入37℃，5% CO2細胞培養(yǎng)箱中靜置6-8小時或者過夜，以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
2. 待細胞達到80%匯合時準備進行傳代培養(yǎng)。
3. 細胞傳代
1) 吸出25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細胞一次；
2) 添加0.125%消化液約1mL至培養(yǎng)瓶中，37℃溫浴3min左右；倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后吸棄消化液，再加入*培養(yǎng)液終止消化；
3) 用吸管輕輕吹打混勻，按1:2或1:3等適當?shù)谋壤M行接種傳代，然后補充新鮮的*培養(yǎng)基至5mL，放入37℃，5% CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
4) 待細胞*貼壁后，培養(yǎng)觀察。之后每隔2-3天更換新鮮的*培養(yǎng)基。
培養(yǎng)操作：
1）復蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或將 細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并 檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類；
1. 細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞，根據(jù)細胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液，注意凍 存管做好標識。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
人 MAGI1 / CNKSR3 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
人 MRPL44 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
人 VTI1A 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
人 B3GALT5 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
人 Citrate synthase / CS 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
人 IL17 / IL17A CHO細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
人 ROR1 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
大鼠 CD63 / Tsows\system32\EhStorShell.dll
抗CD2：OKT 11 100次 螢火蟲熒光素報告基因檢測試劑盒 Firefly Luciferase Assay Kit -20℃或-80℃避光保存
2 ug pSK1015 pSK1015 低溫運輸，-20℃保存
Bolton肉湯添加劑 Bolton Broth Supplement 1ml/支*5
PDE4A 磷酸二酯4A抗體 規(guī)格: 0.1ml
phospho-CAMK4(Thr196 + Thr200) 磷酸化鈣/鈣調蛋白依賴性蛋白激4抗體 規(guī)格: 0.1ml
GRM2+GRM4 促代謝型受體2+4抗體 規(guī)格: 0.2ml
Mast Cell Tryptase 肥大細胞蛋白7抗體 規(guī)格: 0.1mlFactor VII light chain 凝因子VII 規(guī)格: 0.2ml
FAIM2 FAS凋亡抑制分子2 規(guī)格: 0.2mlUCP-2 線粒體脫偶連蛋白2抗體 規(guī)格: 0.1ml
Mouse Anti-rabbit IgG/FITC FITC標記的小鼠抗兔IgG 規(guī)格: 0.3ml
PRKCQ/PKC theta 蛋白激C theta抗體 規(guī)格: 0.1ml
Phospho-MEK6 (Ser207) 磷酸化絲裂原活化蛋白激MKK6抗體 規(guī)格: 0.1ml
RERE 肌萎相關蛋白1抗體 規(guī)格: 0.2ml
