反應(yīng)五要素:
遲鈍愛(ài)德華菌PCR檢測(cè)試劑盒品牌參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長(zhǎng)度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長(zhǎng)至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過(guò)多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC隨機(jī)分布,避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3'端的互補(bǔ),否則會(huì)形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是末及倒數(shù)第二個(gè)堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì),以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn), 被擴(kuò)增的靶序列有適宜的酶切位點(diǎn), 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫(kù)的其它序列無(wú)明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以低引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增,且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。
產(chǎn)品名稱(chēng) | 英文名稱(chēng) | 價(jià)格 |
遲鈍愛(ài)德華菌PCR檢測(cè)試劑盒品牌 | Edwardsiella tardaPCR | 電詢(xún) |
樣本采集、存放及運(yùn)輸:
1、遲鈍愛(ài)德華菌PCR檢測(cè)試劑盒品牌樣本采集:各類(lèi)型樣本按照常規(guī)方法采集;
2、存放:樣本在2~8℃條件下保存應(yīng)不超過(guò)72h,-70℃以下可長(zhǎng)期保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融(多凍融3次);
3、運(yùn)輸:采用泡沫箱加冰密封進(jìn)行運(yùn)輸。
【標(biāo)本要求】
遲鈍愛(ài)德華菌PCR檢測(cè)試劑盒品牌人體鼻腔或咽部分泌物:用無(wú)菌捻拭子拭取鼻腔或咽部分泌物,將分泌物或咽拭子置入無(wú)菌玻璃管(含0.4ml滅菌生理鹽水),用無(wú)菌棉球?qū)⒃嚬苋o后,密閉送檢。標(biāo)本可立即用于檢測(cè),也可保存于-20℃待測(cè)。
組成及試劑配制:
1、遲鈍愛(ài)德華菌PCR檢測(cè)試劑盒品牌酶標(biāo)板:一塊(96孔)
2、 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品): 2瓶,請(qǐng)臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋?zhuān)ㄗⅲ翰灰苯釉诎逯羞M(jìn)行倍比稀釋?zhuān)?,分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類(lèi)推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測(cè)稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測(cè)稀釋液B:1×10ml。
【檢驗(yàn)方法】
1.標(biāo)本、對(duì)照品的核酸裂解處理
用商品化(取得醫(yī)療器械許可證)的RNA提取試劑盒處理標(biāo)本,具體操作參見(jiàn)該試劑盒說(shuō)明書(shū)。
或用Trizol法提取,方法如下:取100?l樣品置于1.5ml 離心管中,加入300?l裂解液(Trizol),再加入100, 混勻器上振蕩混勻5sec或顛倒混勻15次; 13000rpm離心15min, 吸取上層液體,加入等體積異丙醇,顛倒混勻室溫靜置10min, 13000rpm離心10min,輕輕倒去上清;加入700?l 75%乙醇,顛倒洗滌,13000rpm離心5min,輕輕倒去上清,倒置于吸水紙上,棄盡液體或4000rpm離心5sec,將管壁上的殘余液體甩到管底部,用微量加樣器盡量吸干液體,加入20?l DEPC-H2O溶解RNA。
2.試劑配制
取n×19?l H7N9核酸熒光PCR檢測(cè)混合液與n×1?l RT-PCR酶(n為反應(yīng)管數(shù)),振蕩混勻數(shù)秒, 3000rpm離心數(shù)秒。
3.加樣取上述混合液20?l置于PCR管中,然后將樣品核酸提取液、DEPC-H2O、陽(yáng)性對(duì)照品各5?l分別加入PCR管中,蓋好管蓋,立即進(jìn)行PCR擴(kuò)增反應(yīng)。
4. PCR擴(kuò)增反應(yīng)管置于定量熒光PCR儀上,推薦循環(huán)參數(shù)設(shè)置:
45℃×10min; 95℃×15min;循環(huán)一次,再按95℃×15sec→60℃×60sec,循環(huán)45次;單點(diǎn)熒光檢測(cè)在60℃,反應(yīng)體系為25?l。
熒光通道檢測(cè)選擇:選用FAM通道。
脫氫酶/還原酶家族成員2抗體
牙本質(zhì)磷蛋白抗體
Dermokine β蛋白抗體
DPCR1蛋白抗體
表皮源性蛋白6抗體
雙特異性蛋白磷酸酶7抗體
雙特異性蛋白磷酸酶26抗體(絲裂原活化蛋白激酶磷酸酶8)
阿米洛利結(jié)合蛋白1抗體
S期激酶活化蛋白DBF4A抗體
著絲粒相關(guān)蛋白DSN1抗體
遲鈍愛(ài)德華菌PCR檢測(cè)試劑盒品牌2-(甲氧基羰基)硼酸374538-03-1
2-甲基喹啉鹽酸鹽3747-74-8
丙二酸甲酯酰37517-81-0
七氟丁酸375-22-4
5-溴-2-氟-6-甲基吡啶375368-83-5
全氟丁基磺酰氟375-72-4
alpha-氰基-鄰-乙腈3759-28-2
4-吡唑甲酸乙酯37622-90-5
1H-吡唑-3-硼酸376584-63-3
3-溴吡啶-5-甲醇37669-64-0
吲哚-2-羧酸乙酯3770-50-1
1H-吡唑-4-甲酸37718-11-9
單鏈,在DNA聚合酶與啟動(dòng)子的參與下,根據(jù)堿基互補(bǔ)配對(duì)原則復(fù)制成同樣的兩分子挎貝。
在聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn),DNA在高溫時(shí)也可以發(fā)生變性解鏈,當(dāng)溫度降低后又可以復(fù)性成為雙鏈。因此,通過(guò)溫度變化控制DNA的變性和復(fù)性,并設(shè)計(jì)引物做啟動(dòng)子,加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復(fù)制。( DNA高溫變性低溫復(fù)性)
發(fā)現(xiàn)耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對(duì)于PCR的應(yīng)用有里程碑的意義,該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活,不需要每個(gè)循環(huán)加酶,使PCR技術(shù)變得非常簡(jiǎn)捷、同時(shí)也大大降低了成本,PCR技術(shù)得以大量應(yīng)用,并逐步應(yīng)用于臨床。
槍狀肝吸蟲(chóng)PCR檢測(cè)試劑盒品牌注意事項(xiàng):1.基礎(chǔ)程序;2.?dāng)U增溫度和延伸溫度;3.反應(yīng)時(shí)間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應(yīng)液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué);8.PCR擴(kuò)增產(chǎn)物;9.PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。
以下是槍狀肝吸蟲(chóng)PCR檢測(cè)試劑盒品牌的相關(guān)產(chǎn)品。
磷酸化D酪氨酸激酶衰減蛋白1抗體
磷酸化Fas相關(guān)死亡結(jié)構(gòu)域蛋白抗體
磷酸化D酪氨酸激酶衰減蛋白1抗體
磷酸化Fas相關(guān)死亡結(jié)構(gòu)域蛋白抗體
磷酸化Fas相關(guān)死亡結(jié)構(gòu)域蛋白抗體
磷酸化Fas相關(guān)死亡結(jié)構(gòu)域蛋白抗體
磷酸化DNA基轉(zhuǎn)移酶1抗體
磷酸化DNA基轉(zhuǎn)移酶1抗體
磷酸化DNA基轉(zhuǎn)移酶1抗體
7脫氫膽固醇還原酶抗體
槍狀肝吸蟲(chóng)PCR檢測(cè)試劑盒品牌2-氟磺酰2905-21-7
2-磺酰2905-23-9
4-乙炔聯(lián)29079-00-3
間異氰酸酯2909-38-8
2-(*硅基)乙醇2916-68-9
三2923-18-4
2 , 3-二溴-5-甲基吡29232-39-1
三氟甲烷磺酸銀2923-28-6
4-三氟甲肼鹽酸鹽2923-56-0
5-溴-2-氟胺374259
3-氟肼鹽酸2924-16-5
2-氟-3-甲基-5-溴吡啶29312-98-9
特點(diǎn)優(yōu)勢(shì):
1. 槍狀肝吸蟲(chóng)PCR檢測(cè)試劑盒品牌特異性:
2. 重現(xiàn)性:
3. 靈敏性:
4. 實(shí)用性:
具有下列特點(diǎn):
1. 槍狀肝吸蟲(chóng)PCR檢測(cè)試劑盒品牌即開(kāi)即用,用戶(hù)只需要提供病毒 RNA 模板。
2. 兩管式 RT-PCR,一次 RT 反應(yīng)產(chǎn)物可以作為多次 PCR 的模板。本試劑盒提供 10 次的 RT 反應(yīng)試劑和 50 次的 PCR 試劑。
3. 引物經(jīng)過(guò)優(yōu)化,特異性高,引物是根據(jù)基因的保守區(qū)域設(shè)計(jì),適用于所有強(qiáng)、中、弱新城疫毒株,產(chǎn)物長(zhǎng)度為 421 bp。
4. PCR mix 中含上樣染料,PCR 后可以直接上樣電泳。