測(cè)定步驟:
1、 酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至450nm。
2、 試劑三的稀釋:將試劑三用蒸餾水稀釋50倍,用多少配多少。(試劑三和蒸餾水1:49稀釋。
3、 工作液配制:在試劑一加入100μl試劑二,充分混勻。配好的試劑4℃避光可保存一周。(若一次性測(cè)定樣本較少,可按照實(shí)際用量將試劑一和試劑二按照20ml:0.1ml的比例混勻配制)
4、 將一瓶試劑四用5ml蒸餾水溶解(溶解后一周內(nèi)用完)。
5、 樣本測(cè)定(在96孔板中依次加入下列試劑)
選擇抗凝的注意點(diǎn):
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時(shí)所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對(duì)較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后用于測(cè)定。
【友情提示】:本產(chǎn)品僅供科研研究使用,不得用于人體臨床直接檢測(cè)。避免給您帶來(lái)不必要的損失,請(qǐng)仔細(xì)閱讀購(gòu)買說明!
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 檢測(cè)方法 | 貨號(hào) |
100管/96樣 | 微量法 | GOY-01S6599 |
商品介紹
測(cè)定意義 蘋果酸合酶(MS,EC 4.1.3.2)是屬于轉(zhuǎn)移酶中酰基轉(zhuǎn)移酶的一類,主要存在于植物和微生物中。MS是乙醛酸循環(huán)的關(guān)鍵酶之一,在MS催化下乙醛酸與乙酰反應(yīng)生成蘋果酸。 測(cè)定原理: MS催化乙酰CoA和乙醛酸產(chǎn)生蘋果酸,同時(shí)生成,使無(wú)色的DTNB轉(zhuǎn)變成黃色的TNB,在 412nm處有特征吸光值。 需自備的儀器和用品: 酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、96孔板、研缽、冰、和蒸餾水 |
試劑的組成和配制:
提取液:液體 100mL×1 瓶,4℃保存;
試劑一:液體 5mL×1 瓶,4℃保存;
試劑二:液體 200μL×1 支,4℃保存;
試劑三:液體 4mL×1 瓶,4℃保存;
試劑四:粉劑×2 瓶,4℃保存。
所需的儀器和用品:
可見分光光度計(jì)、1mL 玻璃比色皿(光徑 1cm)、低溫離心機(jī)、移液器、研缽、冰和蒸餾水
四、超氧化物歧化酶(SOD)的測(cè)定:
建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個(gè)樣本做預(yù)測(cè)定,了解本批樣品情況,熟悉實(shí)驗(yàn)流程,避免實(shí)驗(yàn)
樣本和試劑浪費(fèi)!
1、樣本制備
① 組織樣本:
取約 0.1g 組織(水分充足的樣本可取 0.25g),加入 1mL 提取液,在 4oC 或冰浴進(jìn)行
勻漿(或使用各類常見勻漿器)。4oC×12000rpm 離心 10min,取上清作為待測(cè)液。
【注】:若增加樣本量,可按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例進(jìn)行提取
② 細(xì)菌/細(xì)胞樣本:
先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;取約 500 萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL
提取液,超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復(fù) 30 次);
12000rpm 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測(cè)。
【注】:若增加樣本量,可按照細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量(10
4):提取液(mL)為 500~1000:1 的比例進(jìn)行提取。 ③ 液體樣本:直接檢測(cè);若渾濁,離心后取上清檢測(cè)。
注意事項(xiàng):
1、試劑二為酶,不可冷凍,使用時(shí)在冰上放置。
2、對(duì)照管只需要做一管。
3、若對(duì)照管吸光值大于 1,建議將試劑二用蒸餾水稀釋 7 倍后使用(10μL 試劑二原液+60μL蒸餾水)。
4、SOD為什么有的樣本測(cè)定管大于對(duì)照管,對(duì)照管數(shù)值在什么范圍?對(duì)照管的范圍是 0.4-1。對(duì)照管吸光值過低可能是(1)試劑二或試劑四沒有現(xiàn)配現(xiàn)用;
(2)沒有按順序加試劑;(3)反應(yīng)時(shí)間不夠,可以延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間(反應(yīng)時(shí)間 30min可以延長(zhǎng)到 40min)。對(duì)照管吸光值過高可能是試劑二未按操作說明書稀釋相應(yīng)倍數(shù)。
若出現(xiàn)測(cè)定管大于對(duì)照管,可能是樣本中雜質(zhì)的影響太大,為了降低雜質(zhì)的影響一般
將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋 10倍后再測(cè),通??梢允箿y(cè)定正常。
A型流感病H9N1血凝素型抗體Human SMPDL3B(Sphingomyelin Phosphodiesterase Acid Like 3B) ELISA Kit桂皮
人類狀瘤病33抗體Human SMPX ELISA Kit地膽草
A型病H1N1蛋白抗體Human SNAPIN ELISA Kit
甲型肝炎病聚蛋白VP1抗體Human SNCAIP ELISA Kitα-
造血干特異性蛋白抗體Human CALB1(Calbindin) ELISA Kit
轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1誘導(dǎo)轉(zhuǎn)錄因子1抗體Human SMNDC1 ELISA Kit
同源盒蛋白C6抗體Human SNAP29 ELISA Kit
同源盒蛋白C4抗體Human SMO ELISA Kit甲氧氯普
蘋果酸合酶(MS)微量法檢測(cè)試劑盒藤黃 97% (HPLC)AACT(Alpha-1-Anti-chymotrypsin) α-1抗胰糜蛋白猴環(huán)腺苷二核糖水解(cADPRH/CD38)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
京尼平甙 分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥98%AACT protein(Alpha chymotrypsin protein) 胰糜蛋白猴神經(jīng)絲蛋白(NF)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
銀杏內(nèi)酯B 分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99%(HPLC)ACTH (Adrenorticotrophin hormons)(1-39) 促皮質(zhì)激素(1-39)(抗原)猴血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體2(VEGFR-2/KDR)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
銀杏內(nèi)酯 C 分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99%ADM 1-52/AM 1-52 (Adrenomedullin 1-52) 髓質(zhì)素(1-52)猴抗麥膠蛋白/麥溶蛋白抗體(AGA)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
沒食子,一水物 AR,98.5%ACTH (Adrenorticotrophin hormons)(18-39) 促皮質(zhì)激素(18-39)(抗原)猴胰島素樣生長(zhǎng)因子2(IGF-2)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
人參皂甙 Rb2 分析標(biāo)準(zhǔn)品SP (Substance P) P物質(zhì)(抗原)猴信號(hào)傳導(dǎo)轉(zhuǎn)錄激活因子6B(STAT56B)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
人參皂甙 Rh2 分析標(biāo)準(zhǔn)品,>98%Ghrelin 腦腸肽(一種新的生長(zhǎng)激素釋放肽)多肽抗原猴補(bǔ)體成分4a(C4a)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
人參皂甙 Rg1 分析標(biāo)準(zhǔn)品,>98% Gastrin(human)peptide(1-17) 胃泌素/蛙皮素(多肽人源)猴肝配蛋白A3 (EFNA3)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
人參皂甙 Rg2 分析標(biāo)準(zhǔn)品,>98%myelin P0 prothein( peripheral myelin prothein Zero;MPZ;MPP) 外周髓鞘蛋白0(P0蛋白)多肽抗原猴N-乙酰α-D-氨葡萄糖苷(NAGLU)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
人參皂甙 Rg3 分析標(biāo)準(zhǔn)品,>98% Insulin protein (from porcine pancreas) 豬胰島素蛋白猴斑型POZ蛋白(SPOP)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
人參皂甙 Rc 分析標(biāo)準(zhǔn)品,>98%bovine Insulin protein 牛胰島素蛋白猴質(zhì)金屬蛋白12(MMP-12)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
人參皂甙 Rd 分析標(biāo)準(zhǔn)品,>98%Tachyplesin I(Tachyplesin-1 precursor ) 抗菌肽猴周期素依賴性激8(CDK8)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
人參皂甙 Re 分析標(biāo)準(zhǔn)品,>98%TRH (Thyrotropin releasing hormone ) 促狀腺素釋放激素猴肝配蛋白A5 (EFNA5)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
人參皂苷Rh1 分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥98%PAR-2 AP (Protease-activated receptors-2 Activating polypeptide) 蛋白激活受體-2激活肽猴骨骼肌快肌肌鈣蛋白I(TNNI2)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
人參皂苷Rf 分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥98%Cygb (cytoglobin) 球蛋白抗原猴胸腺嘧核苷化(TP)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒