實(shí)驗(yàn)操作步驟:
a.采用認(rèn)可的方案處死嚙齒動(dòng)物。
b.立即在無菌超凈臺(tái)內(nèi)用70%乙醇擦洗整個(gè)動(dòng)物。
c.用無菌的鑷子和剪子在前腿下作一腹部水平切口,用無菌鑷子將皮膚扯向后腿。
d.用另一無菌的剪刀和鑷子切開腹部,取出含有胚胎的子宮,置于無菌的培養(yǎng)皿上。
e.剔除胚胎周圍的包膜,將胚胎放于無菌的含有無菌PBS的100ml燒杯中。
f.漂洗胚胎,去掉PBS。繼續(xù)用PBS漂洗胚胎直至清洗液清亮為止。
產(chǎn)品屬性:
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 分類 | 貨號(hào) |
小鼠骨髓基質(zhì)細(xì)胞:OP9 | 1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶 | 細(xì)胞系 | GOY-01X0175 |
產(chǎn)品介紹:
名稱 小鼠骨髓基質(zhì)細(xì)胞:OP9
別稱OP-9
種屬小鼠
年齡(性別)胚胎
組織來源骨髓,基質(zhì)
生長(zhǎng)特性貼壁細(xì)胞
細(xì)胞形態(tài)成纖維細(xì)胞樣
背景描述OP9細(xì)胞源自新生的op/op小鼠顱蓋。因編碼M-CSF的基因中的一個(gè)突變,OP9細(xì)胞不能生成有功能的巨噬細(xì)胞克隆刺激因子(M-CSF)。M-CSF的存在對(duì)胚胎干細(xì)胞(ES)分化成血細(xì)胞而不是其他巨噬細(xì)胞有抑制功能。OP9細(xì)胞可以用于與小鼠胚胎干細(xì)胞共培養(yǎng)以誘導(dǎo)胚胎干細(xì)胞分化成成紅血球來源的、骨髓來源的和B細(xì)胞譜系的血細(xì)胞。與OP9細(xì)胞共培養(yǎng)不需要外源的生長(zhǎng)因子或復(fù)雜的胚胎結(jié)構(gòu),這個(gè)系統(tǒng)對(duì)研究造血細(xì)胞的發(fā)育和分化的分子機(jī)理有用。
生物安全等級(jí)1
生長(zhǎng)培養(yǎng)基MEMα+20% FBS+1% P/S
推薦傳代比例1:3-1:4
推薦換液頻率2~3次/周
倍增時(shí)間~26小時(shí)
凍存條件
凍存液:55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO
溫度:液氮
培養(yǎng)條件
氣相:空氣,95%;CO2,5%
溫度:37℃
處理方法:
收到細(xì)胞后,檢查外包裝是否完整,細(xì)胞培養(yǎng)瓶是否完好。如有破損漏液等問題,請(qǐng)即時(shí)聯(lián)系。并進(jìn)行以下操作:
1. 75%酒精棉球擦拭T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶外部。
2. 將細(xì)胞放入37度培養(yǎng)箱中預(yù)溫3-4小時(shí)后再做處理,以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
3. 預(yù)熱培養(yǎng)基(含10%胎牛血清,1%雙抗)。
4. 顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況,并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照保存(40×,100×,200×各一張)。
5. ①若細(xì)胞密度較小,無菌操作,去掉培養(yǎng)基。每瓶添加第四步中準(zhǔn)備的5-6ml培養(yǎng)基。放到37度培養(yǎng)箱培養(yǎng)。待細(xì)胞密度達(dá)到80%以上,進(jìn)行傳代。
注意事項(xiàng):
1. 正式實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)選取幾個(gè)樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn),以優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件,取得最佳實(shí)驗(yàn)效果。
2. 螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請(qǐng)短暫離心,將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底,
避免開蓋時(shí)試劑損失。
3. 禁止與其他品牌的試劑混用,否則會(huì)影響使用效果。
4. 樣品或試劑被細(xì)菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)誤的結(jié)果。
5. 最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿,可重復(fù)使用的玻璃器皿必須在使用前清洗
并*清除殘留清潔劑。
6. 實(shí)驗(yàn)后完成后所有樣品及接觸過的器皿應(yīng)按照規(guī)定程序處理。
細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn):
1.研究的對(duì)象是活細(xì)胞
在實(shí)驗(yàn)過程中,根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力,并可長(zhǎng)時(shí)間監(jiān)控、檢測(cè)甚至定量評(píng)估一部分活細(xì)胞的情況,包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動(dòng)等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件,可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制,同時(shí),可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察,這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。
3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性
通過細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后,所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞,需要時(shí),可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。
4.研究?jī)?nèi)容便于觀察、檢測(cè)和記錄
采用各種研究技術(shù):如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備
記錄方式可采用攝影照片、縮時(shí)電影、電視等多種手段。
5.研究的范圍比較廣泛
應(yīng)用的學(xué)科領(lǐng)域較為寬廣,如細(xì)胞學(xué)、免疫學(xué)、腫瘤學(xué)、生物化學(xué)、遺傳學(xué)、分子生物學(xué)等;
適用的對(duì)象范圍廣,從低等動(dòng)物到高等動(dòng)物,一種動(dòng)物的不同年齡階段以及不同組織,都可進(jìn)行有針對(duì)性的研究。
6.研究的費(fèi)用相對(duì)較經(jīng)濟(jì)
可提供大量、同一時(shí)期、重復(fù)性好的、生物學(xué)性狀相似的實(shí)驗(yàn)對(duì)象。
甲型流感 H7N7 (equine/Kentucky/1a/1975) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (密碼子優(yōu)化)(表達(dá)載體), 無標(biāo)簽
甲型流感 H7N2 (ruddy turnstone/New Jersey/563/2006) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (密碼子優(yōu)化)(表達(dá)載體), 無標(biāo)簽
甲型流感 H7N1 (turkey/Italy/4602/99) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 基因全長(zhǎng)O
小鼠骨髓基質(zhì)細(xì)胞:OP9 1g β- 氨基 β-Aminopropionitrile Fumarate Salt 常溫保存
PSCDBP/CYTIP 胞粘蛋白結(jié)合調(diào)節(jié)蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml
Rabbit Anti-Biotin/HRP 辣根過氧化物標(biāo)記的兔抗抗體IgG 規(guī)格: 0.1ml
MAP2/MAP-2a.b.c 微管相關(guān)蛋白2抗體 規(guī)格: 0.1ml
Rabbit Anti-Biotin/APC APC標(biāo)記的兔抗抗體IgG 規(guī)格: 0.1ml
phospho-CREB-1(Ser133) 磷酸化CREB-1抗體 規(guī)格: 0.1mlSox2 胚胎干細(xì)胞關(guān)鍵蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml
His tag(2D5) 小鼠抗聚單克隆抗體 規(guī)格: 0.1ml
phospho-MEF2D(Ser180) 磷酸化肌細(xì)胞特異性增強(qiáng)因子2D抗體 規(guī)格: 0.1ml
Goat Anti-Mouse IgG/Alexa Fluor 350 Alexa Fluor 350標(biāo)記的羊抗小鼠IgG 規(guī)格: 0.1ml
Cathelicidin 抗菌肽CAMP抗體 規(guī)格: 0.1ml
TPST1 酪蛋白硫酸轉(zhuǎn)移1抗體 規(guī)格: 0.2ml
酸水解酪蛋白 Casein acid Hydrolysate 250g