問:常用的DNA 濃度及純度檢測方法有哪些?
親和層析柱50 mL說明書稱答:回收得到的DNA段可用瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計檢測濃度與純度。瓊脂糖凝膠電泳通過對比定量的Marker 來定量濃度;紫外分光檢測OD260/280 比值,OD260/280 比值在1.7-1.9 之間說明所得 DNA 純度較好,如果洗脫時不使用溶液Eluent而使用去離子水,比值會偏低,因為pH 值和離子存在會影響光吸收值,但不表示純度低。
問:長片段回收時應(yīng)注意哪些問題?
答:親和層析柱50 mL說明書當(dāng)DNA 段長度較長(5 kb 以上)時,回收效率會有所下降,這是DNA 切膠回收時的常見現(xiàn)象。此時建議按以下方法解決問題:
1 適當(dāng)增加待回收DNA 樣品的點樣量;
2 由于長段DNA 不易從樹脂上洗脫下來,建議洗脫兩次,可以提高洗脫效率;
3 減少操作過程中對長段DNA 的物理損傷,如混合振蕩操作不要過于劇烈,切膠時不要將DNA 長時間暴露在紫外等下。
親和層析柱50 mL說明書的詳細(xì)介紹:
DNA提取流程圖:
?公司親和層析柱50 mL說明書的RNA/DNA提取目錄有下面10個系列,5000余種產(chǎn)品:點擊了解更蛋白質(zhì)研究。
1、RNA純化系列產(chǎn)品
2、DNA純化系列產(chǎn)品
3、電泳及回收系列產(chǎn)品
4、探針標(biāo)記及檢測系列產(chǎn)品
5、核酸擴增系列產(chǎn)品
6、克隆表達系列產(chǎn)品
7、基因組研究系列產(chǎn)品
8、蛋白質(zhì)研究系列產(chǎn)品
9、細(xì)胞生物學(xué)研究系列產(chǎn)品
10、即用型溶液、質(zhì)粒庫、菌種庫等等
實驗步驟:
(1)親和層析柱50 mL說明書實驗開始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預(yù)熱,離心管中加入ME(巰基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取約0.8g菌絲體(液體培養(yǎng)獲得的菌絲用真空抽濾即可!固體培養(yǎng)就更好說了),在液氮中迅速磨成精細(xì)粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預(yù)熱的RNA提取液,顛倒混勻
(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次
(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等體積的:(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過夜)
(7)10,000rpm,4℃離心20min
(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::(25:24:1)抽提兩次,:(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V體積的無水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃離心20 min
(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC處理水溶解
(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計掃描檢測RNA的質(zhì)量
注意事項:
● 親和層析柱50 mL說明書溶液PE *次使用前請按瓶上標(biāo)簽加入4 倍體積的無水乙醇,即15 ml 溶液PE 中加入60 ml 無水乙醇,20 ml 溶液PE 中加入80 ml 無水乙醇,使用后立即蓋緊蓋子。
● 本產(chǎn)品對電泳使用的Agarose 種類沒有嚴(yán)格限制,可以使用普通Agarose 。為了保證回收DNA 的質(zhì)量和DNA 回收效率,希望使用高純度的Agarose ,但沒有必要一定要使用低熔點的Agarose 等。
● 電泳時請使用新鮮配制的TAE 電泳緩沖液,以免影響電泳及回收效果。
● 請適當(dāng)延長電泳時間,在條帶分離清晰后進行切膠回收,以免回收到多余雜帶。
● 為提高DNA 回收收率,切膠時應(yīng)盡量除去多余的膠塊。
● 本試劑盒純化柱的DNA 吸附能力強。但如果DNA 濃度小,或DNA 初始量少,回收率將會偏低。
● 溶液Eluent(10 mM Tris-HCl, pH 8.5)中不含EDTA,其收集的DNA段可直接用于各種酶促反應(yīng)等,不會影響后續(xù)試驗。
● 為了保證回收效率,請不要使用未調(diào)整pH 值的超純水洗脫目的段。
● 請嚴(yán)格按照操作步驟操作。
免疫測定 現(xiàn)貨供應(yīng) 真菌/酵母細(xì)胞β-半乳糖苷酶活性濾膜染色試劑盒
免疫測定 現(xiàn)貨供應(yīng) 真菌/酵母細(xì)胞β-半乳糖苷酶活性比色法定量檢測試劑盒
免疫測定 現(xiàn)貨供應(yīng) 真菌/酵母細(xì)胞β-半乳糖苷酶活性化學(xué)發(fā)光法定量檢測試劑盒
免疫測定 現(xiàn)貨供應(yīng) 動物組織β-半乳糖苷酶活性比色法定量檢測試劑盒
免疫測定 現(xiàn)貨供應(yīng) 動物細(xì)胞β-半乳糖苷酶活性比色法定量檢測試劑盒
免疫測定 現(xiàn)貨供應(yīng) 細(xì)菌β-半乳糖苷酶活性化學(xué)發(fā)光法定量檢測試劑盒
免疫測定 現(xiàn)貨供應(yīng) 細(xì)菌β-半乳糖苷酶活性原位染色試劑盒
免疫測定 現(xiàn)貨供應(yīng) 通用型組織/細(xì)胞衰老特異性β-半乳糖苷酶原位染色試劑盒
免疫測定 現(xiàn)貨供應(yīng) 冰凍切片衰老特異性β-半乳糖苷酶原位染色試劑盒
免疫測定 現(xiàn)貨供應(yīng) 全組織衰老特異性β-半乳糖苷酶原位染色試劑盒
免疫測定 現(xiàn)貨供應(yīng) 細(xì)胞衰老特異性β-半乳糖苷酶原位染色試劑盒
免疫測定 現(xiàn)貨供應(yīng) 通用型組織/細(xì)胞β-半乳糖苷酶原位染色試劑盒
免疫測定 現(xiàn)貨供應(yīng) 冰凍切片β-半乳糖苷酶原位染色試劑盒
免疫測定 現(xiàn)貨供應(yīng) 全組織β-半乳糖苷酶原位染色試劑盒
免疫測定 現(xiàn)貨供應(yīng) 細(xì)胞β-半乳糖苷酶原位染色試劑盒
免疫測定 現(xiàn)貨供應(yīng) SiRNA大量SperfusinX脂質(zhì)體靜脈法動物轉(zhuǎn)染試劑盒
免疫測定 現(xiàn)貨供應(yīng) QuikFusin非脂質(zhì)體細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑盒
免疫測定 現(xiàn)貨供應(yīng) 小量Sperfusin脂質(zhì)體細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑盒
親和層析柱50 mL說明書小鼠胚胎成纖維細(xì)胞,3T3-L1細(xì)胞
小鼠胚胎成纖維細(xì)胞,BALB/3T3 clone A31細(xì)胞
小鼠胚胎成纖維細(xì)胞,MEF細(xì)胞
小鼠胚胎干細(xì)胞,E14細(xì)胞
小鼠胚胎干細(xì)胞,SOX1-GFP細(xì)胞
小鼠胚胎瘤細(xì)胞,ATDC5細(xì)胞
小鼠胚胎細(xì)胞,NIH/3T3細(xì)胞
小鼠前胃癌細(xì)胞,MFC細(xì)胞