ELISA方法被廣泛應(yīng)用于各種抗原和抗體測(cè)定。 但ELISA測(cè)定中影響因素較多,而且其操作中有一定的技術(shù)要求,在檢測(cè)過(guò)程中除正常反應(yīng)外,有時(shí)常見到一些錯(cuò)誤的結(jié)果。
引起ELISA測(cè)定錯(cuò)誤結(jié)果的原因主要有:
①標(biāo)本因素;
②試劑因素;
③操作因素。在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中請(qǐng)嚴(yán)格按照使用說(shuō)明操作,必能得出準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,可提供免費(fèi)技術(shù)咨詢服務(wù)!
產(chǎn)品名稱 | CFD人補(bǔ)體因子DELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)原理 |
英文名稱 | Human complement factor D, CFD Elisa Kit |
貨號(hào) | FS-H64176 |
公司“質(zhì)量是企業(yè)是生命之源”,選購(gòu)優(yōu)勢(shì)如下:
1*抗體——、靈敏、特異
2操作——吸附均勻、吸附性好、空白值低、空底透明度高
3的優(yōu)化方案——回收利用率高、可靠性強(qiáng)
4適用于體液、組織勻漿,細(xì)胞培養(yǎng)上清液、尿液等各種類型的樣本。
5公司產(chǎn)品僅用于科研可檢測(cè)指標(biāo)齊全:生長(zhǎng)因子、炎癥因子、脂肪因子、基質(zhì)金屬蛋白酶等等?
樣本實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備:
ELISA試劑盒液體樣本:包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等。
(1)血清
室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(2)血漿:
應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(3)尿液:
用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實(shí)行。
(4)細(xì)胞培養(yǎng)上清:
檢測(cè)分泌性的成份時(shí),用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。
(5)培養(yǎng)細(xì)胞
檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí),用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達(dá)到100萬(wàn)/ml左右。通過(guò)反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(6)組織標(biāo)本
切割標(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè),其余冷凍備用。
血紅蛋白(HB) 規(guī)格:1g 英文:EGR3
血紅蛋白(HB) 規(guī)格:1g 英文:EGR2
血紅蛋白α1(HBα1) 規(guī)格:1g 英文:EGR1
血紅蛋白α2(HBα2) 規(guī)格:1g 英文:EEA1
血紅蛋白β(HBβ) 規(guī)格:1g 英文:EBF2
血紅蛋白γ1(HBγ1) 規(guī)格:20mg 英文:EBF1
血紅蛋白γ2(HBγ2) 規(guī)格:100mg 英文:PS2
血紅蛋白δ(HBδ) 規(guī)格:100mg 英文:PSEN1
血紅蛋白ε1(HBε1) 規(guī)格:20mg 英文:REG3γ
血紅蛋白ζ(HBζ) 規(guī)格:100mg 英文:REG3α
血紅蛋白θ1(HBθ1) 規(guī)格:20mg 英文:REG1β
血紅蛋白μ(HBμ) 規(guī)格:10mg 英文:NEO1
血型糖蛋白A(GYPA) 規(guī)格:100mg 英文:APOO
血型糖蛋白B(GYPB) 規(guī)格:20mg 英文:APOM
血型糖蛋白C(GYPC) 規(guī)格:100mg 英文:APOL6
Kadsurin A鹽地美環(huán)素;去甲基金霉素(標(biāo)準(zhǔn)品) 分子式:C38H48O19 性狀:Yellow powder 純度:98.5%
Bis-5,5-nortrachelogenin甲基帕羅西汀 分子式:C19H12O2 純度:98.5%
Denudanolide A頭孢喹諾 分子式:C39H50O19 性狀:Yellow powder 純度:99.0%
Fargesone B頭孢噻呋鈉 分子式:C22H22O9 純度:99.0%
Sanshodiol頭孢噻呋鈉(標(biāo)準(zhǔn)品) 分子式:C16H14O6 純度:99.0%
Piperenone5'-三磷胞苷二鈉鹽(二水) 分子式:C16H16O3 純度:98.0%
Mirandin B伏格列波糖 分子式:C25H28O5 純度:%
1,6-Dihydro-4,7'-epoxy-1-methoxy- 3',4'-methylenedioxy-6-oxo-3,8'-lignan伏格列波糖(標(biāo)準(zhǔn)品) 分子式:C30H36O5 純度:%
WallichinineBMS 582664 分子式:C33H40O18 性狀:Yellow powder 純度:98.5%
原肌球蛋白2β(TPM2)酶聯(lián)免疫試劑盒 ,英文名: TPM2 ELISA Kit
Mouse ovarian cancer marker CA125ELISA Kit 卵巢癌標(biāo)志物CA125酶聯(lián)免疫試劑盒
Mousemacrophageinflammatoryprotein3β,MIP-3βELISAkit 巨噬炎性蛋白3β(MIP-3β/ELC/CCL19)酶聯(lián)免疫試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
CLIAKitforHumanEsogen-inducedproteinpS2ELISAKit雌激素誘導(dǎo)蛋白PS2規(guī)格:48T/96T
/組織線粒體DNA萃取試劑盒10次
ELISAKitMYO/MB肌紅蛋白規(guī)格:48T/96T
Ⅰ型前膠原羧基端肽(PⅠCP)酶聯(lián)免疫試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
兔白蛋白(Albumin)酶聯(lián)免疫試劑盒 Rabbit Albumin ELISA Kit
凝血因子Ⅹ(FⅩ)酶聯(lián)免疫試劑盒 ,英文名: FⅩ ELISA Kit
RabbitOsteopoin,OPN酶聯(lián)免疫試劑盒兔骨橋素(OPN)酶聯(lián)免疫試劑盒規(guī)格:96T/48T
HumanArginase,Arg酶聯(lián)免疫試劑盒精氨酶(Arg)酶聯(lián)免疫試劑盒規(guī)格:96T/48T
HumanComplemefragme3a,C3aELISAKit補(bǔ)體片斷3a(C3a)酶聯(lián)免疫試劑盒規(guī)格:96T/48T
CFD人補(bǔ)體因子DELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)原理MBP/FITC 熒光素標(biāo)記髓鞘性蛋白抗體IgG1號(hào)染色體開放閱讀框141抗體環(huán)戊Porcine PDGFA (Plaet Derived Growth Factor Subunit A ) ELISA Kit
MBP/HRP 辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記髓鞘性蛋白抗體IgG1號(hào)染色體開放閱讀框144抗體2--3-吡甲Porcine TDT (Terminal Deoxynucleotidyl Transferase) ELISA Kit
Mcl-1/FITC 熒光素標(biāo)記髓樣白血病-1抗體IgGCOPA蛋白抗體2--3-吡甲Porcine PLN (Phospholamban) ELISA Kit
Phospho-Mcl1 (Ser159/Thr163)/FITC 熒光素標(biāo)記磷化髓樣白血病-1抗體IgG1號(hào)染色體開放閱讀框185抗體2-(基)-1,4-亞苯基二胺Porcine I-TAC (Interferon Inducible T-cell Alpha Chemoattractant) ELISA Kit
MCM2/FITC 熒光素標(biāo)記微染色體維持缺陷蛋白2抗體IgG磷化熱休克蛋白β5/α晶狀體球蛋白B/αB-crystallin抗體2-(基)-1,4-亞苯基二胺Porcine CCL3L1 (Chemokine C-C-Motif Ligand 3 Like Protein 1) ELISA Kit
MCM3/FITC 熒光素標(biāo)記微染色體維持缺陷蛋白3抗體IgG磷化α晶狀體球蛋白B/αB-crystallin抗體茶螺烷Porcine GIP (Gastric Inhibitory Polypeptide) ELISA Kit
MCM5/CDC46/FITC 熒光素標(biāo)記微染色體維持缺陷蛋白5抗體IgG磷化熱休克蛋白β5/α晶狀體球蛋白B/αB-crystallin抗體4-溴-1--2-Porcine F2 (Coagulation Factor Ⅱ) ELISA Kit
MCM7/FITC 熒光素標(biāo)記微染色體維持缺陷蛋白7抗體IgG1號(hào)染色體開放閱讀框167抗體4-溴-1--2-Porcine ALDOA (Aldolase A, Fructose Bisphosphate) ELISA Kit
操作流程:
(1)待測(cè)樣品孔中每孔加入待測(cè)樣品100μl,每種樣品設(shè)3個(gè)平行孔;設(shè)兩個(gè)陰性對(duì)照孔,每孔加未處理組的細(xì)胞裂解液100μl;另設(shè)一個(gè)空白對(duì)照孔,加入純細(xì)胞裂解液100μl。
(2)酶標(biāo)板置4℃,包被過(guò)夜。
(3)洗板:吸干孔內(nèi)反應(yīng)液,用洗滌液過(guò)洗一遍(將洗滌液注滿板孔后,即甩去),之后將洗滌液注滿板孔,浸泡1-2分鐘,間歇搖動(dòng)。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。
(4)陰性對(duì)照孔每孔加入PBS 50μl,樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。
(5)酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
(6)洗板,同(4)。
(7)每孔加1:5000稀釋的HRP-標(biāo)記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。
(8)酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
(9)洗板,同(4)。
(10)每孔加TMB顯色液 100μl,輕輕混勻10s,置37℃暗處反應(yīng)15-20min。
(11)每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應(yīng)。
(12)分別測(cè)450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2,最終測(cè)得的OD值為兩者之差(W1-W2),以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
(13)數(shù)據(jù)處理:在得出標(biāo)本(S)和陰性對(duì)照(N)的 OD值后,計(jì)算S/N值。S/N≥2.1為陽(yáng)性判定標(biāo)準(zhǔn)