ELISA方法被廣泛應(yīng)用于各種抗原和抗體測(cè)定。 但ELISA測(cè)定中影響因素較多，而且其操作中有一定的技術(shù)要求，在檢測(cè)過(guò)程中除正常反應(yīng)外，有時(shí)常見(jiàn)到一些錯(cuò)誤的結(jié)果。
引起ELISA測(cè)定錯(cuò)誤結(jié)果的原因主要有：
①標(biāo)本因素；
②試劑因素；
③操作因素。在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中請(qǐng)嚴(yán)格按照使用說(shuō)明操作，必能得出準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，可提供免費(fèi)技術(shù)咨詢服務(wù)！
產(chǎn)品名稱 | FE人鐵蛋白ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)原理 |
英文名稱 | Human ferritin, FE Elisa Kit |
貨號(hào) | FS-H63398 |
公司“質(zhì)量是企業(yè)是生命之源”，選購(gòu)優(yōu)勢(shì)如下：
1*抗體——、靈敏、特異
2操作——吸附均勻、吸附性好、空白值低、空底透明度高
3的優(yōu)化方案——回收利用率高、可靠性強(qiáng)
4適用于體液、組織勻漿，細(xì)胞培養(yǎng)上清液、尿液等各種類型的樣本。
5可檢測(cè)指標(biāo)齊全：生長(zhǎng)因子、炎癥因子、脂肪因子、基質(zhì)金屬蛋白酶等等
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樣本實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備：
ELISA試劑盒液體樣本：包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等。
（1）血清
室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
（2）血漿：
應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
（3）尿液：
用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實(shí)行。
（4）細(xì)胞培養(yǎng)上清：
檢測(cè)分泌性的成份時(shí)，用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。
（5）培養(yǎng)細(xì)胞
檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí)，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬(wàn)/ml左右。通過(guò)反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
（6）組織標(biāo)本
切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè)，其余冷凍備用。
Arthrinium│phaeospermum (Corda) M.B. Ellis 暗色節(jié)菱孢Arthrinium│phaeospermum (Corda) M.B. Ellis分離基物:南林351楊斜面培養(yǎng)物模式菌株:no14生長(zhǎng)條件:25存儲(chǔ)條件:定期移植法 純度：98%
Bacillus│mucilaginosus Avakyan et al 膠質(zhì)芽孢桿菌Bacillus│mucilaginosus Avakyan et al斜面培養(yǎng)物安全等級(jí):1模式菌株:no141生長(zhǎng)條件:30存儲(chǔ)條件:定期移植法 純度：96%
Streptomyces│avidinii Stapley et al 阿維丁鏈霉菌Streptomyces│avidinii Stapley et al分離基物:灘涂斜面培養(yǎng)物安全等級(jí):1模式菌株:no12生長(zhǎng)條件:28存儲(chǔ)條件:定期移植法 純度：96%
Trames robiniophila Murrill 槐多年臥孔菌（斜面）Trames robiniophila Murrill分離基物:子實(shí)體斜面培養(yǎng)物安全等級(jí):1模式菌株:no綜合PDA：馬鈴薯煮汁1000mL，磷二氫鉀 3.0g，七鎂 1.5g，葡萄糖 20.0g，維生素B1 10mg，瓊脂 20g，pH自然。馬鈴薯煮液：200g馬鈴薯，去皮，切塊，放入蒸餾中煮沸30min，取濾液定容至1000mL,備用。121℃，15min。生長(zhǎng)條件:25℃，好氧存儲(chǔ)條件:定期移植法 純度：98%
Diaporthe│vexans Gratz 茄褐紋擬莖點(diǎn)霉Diaporthe│vexans Gratz分離基物:茄子斜面培養(yǎng)物安全等級(jí):1模式菌株:no14生長(zhǎng)條件:26存儲(chǔ)條件:定期移植法 純度：98%
Corticium│roseocarneum (Schwein.) Hjortstam 紅紫韌革菌Corticium│roseocarneum (Schwein.) Hjortstam斜面培養(yǎng)物安全等級(jí):1模式菌株:no14生長(zhǎng)條件:25存儲(chǔ)條件:定期移植法 純度：97%
Bacillus│larespore Laubach 側(cè)孢芽孢桿菌Bacillus│larespore Laubach分離基物:楊柴根系土壤斜面培養(yǎng)物安全等級(jí):1模式菌株:no141生長(zhǎng)條件:30存儲(chǔ)條件:定期移植法 純度：97%
Alrnaria│nuissima (Kunze) Wiltshire 細(xì)鏈格孢菌Alrnaria│nuissima (Kunze) Wiltshire分離基物:果實(shí)斜面培養(yǎng)物安全等級(jí):1模式菌株:no14生長(zhǎng)條件:25存儲(chǔ)條件:-80℃冰箱凍結(jié)法；真空冷凍干燥法；定期移植法 純度：≥97% (HPLC)
FE人鐵蛋白ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)原理Phospho-Caspase-9 (Thr125) 磷化半胱氨蛋白酶9抗體尼莫地平AprepitantHuman Gas6 (Growth Arrest Specific Protein 6) ELISA Kit
Phospho-Caspase-9 (Try153) 磷化半胱氨蛋白酶9抗體蒿甲雙-D-甘露糖Human G-CSF (Granulocyte Colony Stimulating Factor 3) ELISA Kit
Caveolin-1 質(zhì)膜微囊蛋白-1抗體金諾芬雙-D-甘露糖Human GDF15 (Growth Differentiation Factor 15) ELISA Kit
Phospho-Caveolin-1 (Tyr14) 磷化質(zhì)膜微囊蛋白-1抗體鹽卡特羅甲基-三[二甲基硅氧烷基]硅烷Human GM-CSF (Granulocyte Macrophage Colony Stimulating Factor) ELISA Kit
Caveolin-3 質(zhì)膜微囊蛋白-3抗體氨魯米特四[二甲基硅氧烷基]硅烷Human sgp130 (soluble Glucoprotein 130) ELISA Kit
Alpha-Catenin α-連環(huán)蛋白抗體大豆油四[二甲基硅氧烷基]硅烷Human HGF (Hepatocyte Growth Factor) ELISA Kit
Beta catenin β-連環(huán)蛋白抗體（β鏈接素）對(duì)羥基苯甲甲酯2，5-二Human IFN-β (Interferon Beta) ELISA Kit
phospho-Beta-catenin(Tyr142) 磷化β 連環(huán)素蛋白抗體泛鈉2，5-二Human IGF-1 (Insulin-Like Growth Factor 1) ELISA Kit
操作流程：
（1）待測(cè)樣品孔中每孔加入待測(cè)樣品100μl，每種樣品設(shè)3個(gè)平行孔；設(shè)兩個(gè)陰性對(duì)照孔，每孔加未處理組的細(xì)胞裂解液100μl；另設(shè)一個(gè)空白對(duì)照孔，加入純細(xì)胞裂解液100μl。
（2）酶標(biāo)板置4℃，包被過(guò)夜。
（3）洗板：吸干孔內(nèi)反應(yīng)液，用洗滌液過(guò)洗一遍（將洗滌液注滿板孔后，即甩去），之后將洗滌液注滿板孔，浸泡1-2分鐘，間歇搖動(dòng)。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。
（4）陰性對(duì)照孔每孔加入PBS 50μl，樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。
（5）酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。
（6）洗板，同（4）。
（7）每孔加1:5000稀釋的HRP-標(biāo)記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。
（8）酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。
（9）洗板，同（4）。
（10）每孔加TMB顯色液 100μl，輕輕混勻10s，置37℃暗處反應(yīng)15-20min。
（11）每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應(yīng)。
（12）分別測(cè)450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2，最終測(cè)得的OD值為兩者之差（W1-W2），以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
（13）數(shù)據(jù)處理：在得出標(biāo)本（S）和陰性對(duì)照（N）的 OD值后，計(jì)算S/N值。S/N≥2.1為陽(yáng)性判定標(biāo)準(zhǔn)
