ELISA方法被廣泛應(yīng)用于各種抗原和抗體測定。 但ELISA測定中影響因素較多，而且其操作中有一定的技術(shù)要求，在檢測過程中除正常反應(yīng)外，有時常見到一些錯誤的結(jié)果。
引起ELISA測定錯誤結(jié)果的原因主要有：
①標(biāo)本因素；
②試劑因素；
③操作因素。在實驗過程中請嚴(yán)格按照使用說明操作，必能得出準(zhǔn)確的實驗結(jié)果，可提供免費技術(shù)咨詢服務(wù)！
產(chǎn)品名稱 | ICA人胰島細(xì)胞抗體ELISA試劑盒實驗原理 |
英文名稱 | Human islet cell antibody, ICA Elisa Kit |
貨號 | FS-H63517 |
公司“質(zhì)量是企業(yè)是生命之源”，選購優(yōu)勢如下：
1*抗體——、靈敏、特異
2操作——吸附均勻、吸附性好、空白值低、空底透明度高
3的優(yōu)化方案——回收利用率高、可靠性強
4適用于體液、組織勻漿，細(xì)胞培養(yǎng)上清液、尿液等各種類型的樣本。
5可檢測指標(biāo)齊全：生長因子、炎癥因子、脂肪因子、基質(zhì)金屬蛋白酶等等
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樣本實驗前準(zhǔn)備：
ELISA試劑盒液體樣本：包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等。
（1）血清
室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
（2）血漿：
應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
（3）尿液：
用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。
（4）細(xì)胞培養(yǎng)上清：
檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。
（5）培養(yǎng)細(xì)胞
檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
（6）組織標(biāo)本
切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。
Chryseobacrium│gleum 粘金黃菌（不提供）Chryseobacrium│gleum分離基物:土壤凍干物安全等級:1模式菌株:no2生長條件:35℃存儲條件:-80℃冰箱凍結(jié)法；真空冷凍干燥法；礦物油法 純度：98%
Lactobacillus│animalis 動物乳桿菌Lactobacillus│animalis凍干物安全等級:1模式菌株:noType strain6生長條件:37℃存儲條件:-80℃冰箱凍結(jié)法；真空冷凍干燥法；礦物油法 純度：10.0μg/g
Nocardioides│simplex 簡單類諾卡氏菌Nocardioides│simplex分離基物:土壤凍干物安全等級:1Produces 3-keto Δ1,4 sroids (U.S. Pat. 3,010,876), 5-nucleotides by cell-culture on hydrocarbons and subsequent degradation of iacellular RNA at alkaline pH (U.S. Pat. 3,652,395), pregnadienes (U.S. Pat. 2,837,464), 7-cyano sroids (U. S. Pat. 3,050,534).441生長條件:30℃存儲條件:-80℃冰箱凍結(jié)法；真空冷凍干燥法；礦物油法；定期移植法 純度：98%
Blastococcus│aggregatus 成團(tuán)芽球菌Blastococcus│aggregatus分離基物:brackish war凍干物安全等級:1441生長條件:25℃存儲條件:-80℃冰箱凍結(jié)法；真空冷凍干燥法；定期移植法 純度：98%
Bacillus│thuringiensis subsp. morrisoni 蘇云金芽胞桿菌莫里遜亞種Bacillus│thuringiensis subsp. morrisoni凍干物安全等級:1模式菌株:no2生長條件:30-32℃存儲條件:真空冷凍干燥法；礦物油法；定期移植法 純度：98%
Bacillus│thuringiensis subsp. pakistani 蘇云金芽胞桿菌巴基斯坦亞種Bacillus│thuringiensis subsp. pakistani凍干物安全等級:1模式菌株:no2生長條件:30-32℃存儲條件:真空冷凍干燥法；礦物油法；定期移植法 純度：99%
Bifidobacrium│sp. 雙歧桿菌Bifidobacrium│sp.凍干物安全等級:1模式菌株:no飼料、奶6生長條件:37℃存儲條件:真空冷凍干燥法；礦物油法；定期移植法 純度：99%
Fusarium oxysporum f. sp. niveum 尖鐮孢西瓜化型(西瓜枯萎病菌)（斜面）Fusarium oxysporum f. sp. niveum斜面培養(yǎng)物安全等級:1模式菌株:no分類；研究。綜合PDA：馬鈴薯煮汁1000mL，磷二氫鉀 3g，鎂 1.5g，葡萄糖 20g，維生素B1 10mg，瓊脂 20g，pH自然。生長條件:24-28℃，好氧。存儲條件:2-8℃。 純度：99%
ICA人胰島細(xì)胞抗體ELISA試劑盒實驗原理Galectin 3 半乳糖凝集素3抗體木瓜（貼梗海棠）(4R)-(+)-異基-5,5-二苯基-2-惡唑烷Human PIK3Cσ (Phosphoinositide-3-Kinase Catalytic Delta Polypeptide) ELISA Kit
Galectin 半乳糖凝集素抗體太子參3-喹啉Human OBTF1 (Octamer Binding Tranion Factor 1) ELISA Kit
GAP43 神經(jīng)生長相關(guān)蛋白43止瀉木子3-喹啉Human OBTF2 (Octamer Binding Tranion Factor 2) ELISA Kit
phospho-GAP43(Ser41) 磷化神經(jīng)生長相關(guān)蛋白43抗體片姜黃2-氨基苯頻哪酯Human OCT4 (Octamer Binding Tranion Factor 4) ELISA Kit
GAPDH 3-磷甘油脫氫酶（兔來源免疫組化用抗體）節(jié)裂茴香2-氨基苯頻哪酯Human OTF2A (Octamer Tranion Factor 2A) ELISA Kit
GAPDH 3-磷甘油脫氫酶（兔來源免疫組化用抗體）玄參Pramipexole 2HCl MonohydrateHuman OTF2B (Octamer Tranion Factor 2B) ELISA Kit
GAPDH 3-磷甘油脫氫酶（兔來源免疫組化用抗體）西紅花Pramipexole 2HCl MonohydrateHuman TR (Targeted Ribonuclease) ELISA Kit
GAI3 抑制型G蛋白α3抗體合歡花苯并［g,h,i］芘Human PRDX5 (Peroxiredoxin 5) ELISA Kit
操作流程：
（1）待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl，每種樣品設(shè)3個平行孔；設(shè)兩個陰性對照孔，每孔加未處理組的細(xì)胞裂解液100μl；另設(shè)一個空白對照孔，加入純細(xì)胞裂解液100μl。
（2）酶標(biāo)板置4℃，包被過夜。
（3）洗板：吸干孔內(nèi)反應(yīng)液，用洗滌液過洗一遍（將洗滌液注滿板孔后，即甩去），之后將洗滌液注滿板孔，浸泡1-2分鐘，間歇搖動。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。
（4）陰性對照孔每孔加入PBS 50μl，樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。
（5）酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。
（6）洗板，同（4）。
（7）每孔加1:5000稀釋的HRP-標(biāo)記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。
（8）酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。
（9）洗板，同（4）。
（10）每孔加TMB顯色液 100μl，輕輕混勻10s，置37℃暗處反應(yīng)15-20min。
（11）每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應(yīng)。
（12）分別測450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2，最終測得的OD值為兩者之差（W1-W2），以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
（13）數(shù)據(jù)處理：在得出標(biāo)本（S）和陰性對照（N）的 OD值后，計算S/N值。S/N≥2.1為陽性判定標(biāo)準(zhǔn)
