ELISA方法被廣泛應(yīng)用于各種抗原和抗體測定。 但ELISA測定中影響因素較多，而且其操作中有一定的技術(shù)要求，在檢測過程中除正常反應(yīng)外，有時常見到一些錯誤的結(jié)果。
引起ELISA測定錯誤結(jié)果的原因主要有：
①標(biāo)本因素；
②試劑因素；
③操作因素。在實(shí)驗(yàn)過程中請嚴(yán)格按照使用說明操作，必能得出準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，可提供免費(fèi)技術(shù)咨詢服務(wù)！
產(chǎn)品名稱 | Gzms-A人顆粒酶AELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)原理 |
英文名稱 | Human granzymes A, Gzms-A Elisa Kit |
貨號 | FS-H63945 |
公司“質(zhì)量是企業(yè)是生命之源”，選購優(yōu)勢如下：
1*抗體——、靈敏、特異
2操作——吸附均勻、吸附性好、空白值低、空底透明度高
3的優(yōu)化方案——回收利用率高、可靠性強(qiáng)
4適用于體液、組織勻漿，細(xì)胞培養(yǎng)上清液、尿液等各種類型的樣本。
5可檢測指標(biāo)齊全：生長因子、炎癥因子、脂肪因子、基質(zhì)金屬蛋白酶等等
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樣本實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備：
ELISA試劑盒液體樣本：包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等。
（1）血清
室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
（2）血漿：
應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
（3）尿液：
用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實(shí)行。
（4）細(xì)胞培養(yǎng)上清：
檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。
（5）培養(yǎng)細(xì)胞
檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
（6）組織標(biāo)本
切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。
β-甘油磷二鈉五水合物有效期: 3年溶解性: 100mg/ml in War別名: 2-(二氫磷)-1,2,3-丙三醇二鈉鹽英文名稱: Glycero 2-phospha disodium salt
茶多酚有效期: 3年溶解性: 50 mg/mL in war別名: 綠茶提取物；茶鞣質(zhì)；茶單寧茶英文名稱: Green a Extract Powder
甜菜有效期: 2年溶解性: 1 g/mL in war別名: 甜菜素；銨乙內(nèi)酯；甘氨三內(nèi)鹽；英文名稱: Betaine
親和素有效期: 6年級別: Reagent Grade溶解性: 10 mg/mL War來源: Chicken egg whi
阿拉伯樹膠有效期: 2年級別: Biochnology Grade溶解性: 100mg/ml in war別名: 阿拉伯樹膠；Arabic gum
化乙酰膽有效期: 1年級別: Reagent Grade溶解性: 100mg/ml in War別名: 乙?；?； 2- (乙酰氧基)-N,N,N-基乙銨化物； 2-(Acetyloxy)-N,N,N-trimethylethanaminium chloride； ACh
微晶纖維素有效期: 3年別名: 微晶質(zhì) 微晶體 纖維素英文名稱: Microcrystalline cellulose: 9004-34-6
軟骨素有效期: 2年級別: 食品級來源: 牛骨溶解性: 100mg/ml in War
Gzms-A人顆粒酶AELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)原理CD3/RBITC 紅色熒光素羅丹明標(biāo)記CD3抗體IgGβ-連環(huán)蛋白/β-連環(huán)素/β鏈接素抗體5-溴-6-煙Mouse β-TG (β-Thromboglobulin) ELISA Kit
CD3/PE 熒光素PE標(biāo)記CD3抗體IgGβ-連環(huán)蛋白/β-連環(huán)素/β鏈接素抗體5-溴-6-煙Mouse GLTP (Glycolipid Transfer Protein) ELISA Kit
CD4/FITC 熒光素標(biāo)記CD4蛋白抗體IgG癌易感基因2和p21蛋白抑制因子抗體3-苯肼鹽鹽Mouse GDF6 (Growth Differentiation Factor 6) ELISA Kit
CD4/RBITC 紅色熒光素羅丹明(RBITC)標(biāo)記CD4抗體IgG血型抗原前體蛋白抗體3-苯肼鹽鹽Mouse ALT (Alanine Transaminase) ELISA Kit
CD4/PE 熒光素PE標(biāo)記CD4抗體IgG凱爾血型糖蛋白CD238抗體5-溴-2-煙Mouse IL-21 (Interleukin 21) ELISA Kit
CD5/FITC 熒光素標(biāo)記CD5抗體IgG嗜乳脂蛋白亞家族2成員A2抗體2,3,5,6-四-7,7,8,-四二甲基對苯醌Mouse PLAUR/uPAR (Plasminogen Activator, Urokinase Receptor) ELISA Kit
CD5L/Api6/FITC 熒光素標(biāo)記CD5L抗體IgG骨形態(tài)發(fā)生蛋白10抗體2,3,5,6-四-7,7,8,-四二甲基對苯醌Mouse αHBDH (α-Hydroxybutyrate Dehydrogenase) ELISA Kit
CD6/TP120/FITC 熒光素標(biāo)記CD6抗體IgG溴脫氧尿苷單克隆抗體（增殖標(biāo)志物）磺Mouse GLUT1 (Glucose Transporter 1) ELISA Kit
操作流程：
（1）待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl，每種樣品設(shè)3個平行孔；設(shè)兩個陰性對照孔，每孔加未處理組的細(xì)胞裂解液100μl；另設(shè)一個空白對照孔，加入純細(xì)胞裂解液100μl。
（2）酶標(biāo)板置4℃，包被過夜。
（3）洗板：吸干孔內(nèi)反應(yīng)液，用洗滌液過洗一遍（將洗滌液注滿板孔后，即甩去），之后將洗滌液注滿板孔，浸泡1-2分鐘，間歇搖動。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。
（4）陰性對照孔每孔加入PBS 50μl，樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。
（5）酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。
（6）洗板，同（4）。
（7）每孔加1:5000稀釋的HRP-標(biāo)記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。
（8）酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。
（9）洗板，同（4）。
（10）每孔加TMB顯色液 100μl，輕輕混勻10s，置37℃暗處反應(yīng)15-20min。
（11）每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應(yīng)。
（12）分別測450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2，最終測得的OD值為兩者之差（W1-W2），以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
（13）數(shù)據(jù)處理：在得出標(biāo)本（S）和陰性對照（N）的 OD值后，計(jì)算S/N值。S/N≥2.1為陽性判定標(biāo)準(zhǔn)
