公司產(chǎn)品僅用于科研提供的生化試劑盒,質(zhì)量信得過(guò)產(chǎn)品,售后完善。服務(wù)于高校及免疫學(xué)科研單位,竭誠(chéng)為您提供更周到的服務(wù)更優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品。
產(chǎn)品名稱(chēng):SOD超氧化物歧化酶檢測(cè)試劑盒微量法
規(guī)格:100管/96樣
檢測(cè)方法:微量法
貨號(hào):FS-01S63288
商品介紹:
測(cè)定意義 SOD(EC 1.15.1.1)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,催化超氧化物陰離子發(fā)生岐化作用,生成H2O2和O2。SOD不僅是超氧化物陰離子清除酶,也是H2O2主要生成酶,在生物抗氧化系統(tǒng)中具有重要作用。 測(cè)定原理: 通過(guò)氧化酶反應(yīng)系統(tǒng)產(chǎn)生超氧陰離子(O2-.),O2-.可還原氮藍(lán)四唑生成藍(lán)色甲臜,后者在560nm處有吸收;SOD可清除O2-.,從而抑制了甲臜的形成;反應(yīng)液藍(lán)色越深,說(shuō)明SOD活性愈低,反之活性越高。 需自備的儀器和用品: 可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。 |
操作步驟:
實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前,各試劑均應(yīng)平衡至室溫(試劑不能直接在37℃溶解);試劑或樣品稀釋時(shí),均需混勻,混勻時(shí)盡量避免起泡。實(shí)驗(yàn)前應(yīng)預(yù)測(cè)樣品含量,如樣品濃度過(guò)高時(shí),應(yīng)對(duì)樣品進(jìn)行稀釋?zhuān)允瓜♂尯蟮臉悠贩显噭┖械臋z測(cè)范圍,計(jì)算時(shí)再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。 1. 加樣:分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl,余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻,酶標(biāo)板加上蓋或覆膜,37℃反應(yīng)120分鐘。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性,每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。 2. 棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加檢測(cè)溶液A工作液 100μl(在使用前一小時(shí)內(nèi)配制),酶標(biāo)板加上覆膜, 37℃反應(yīng)60分鐘。 3. 溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,大約400μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。 4. 每孔加檢測(cè)溶液B工作液(同檢測(cè)A工作液) 100μl,酶標(biāo)板加上覆膜37℃反應(yīng)60分鐘。 5. 溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。 6. 依序每孔加底物溶液90μl,酶標(biāo)板加上覆膜37℃避光顯色(30分鐘內(nèi),此時(shí)肉眼可見(jiàn)標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色,后3-4孔梯度不明顯,即可終止)。 7. 依序每孔加終止溶液50μl,終止反應(yīng),此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性,底物反應(yīng)時(shí)間到后應(yīng)盡快加入終止液。 8. 用酶聯(lián)儀在450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的光密度(OD值)。在加終止液后立即進(jìn)行檢測(cè)。 |
粗酶液提取:
1、細(xì)胞或組織樣品的制備: 培養(yǎng)細(xì)胞:先收集細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):提取液體積(ml)為500~1000:1的比例(建議500萬(wàn)細(xì)胞加入1ml提取液),超聲波破碎細(xì)胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次);8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建議稱(chēng)取約0.1g組織,加入1ml提取液),進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 2、血清(漿)樣品:直接檢測(cè)。 |
試劑的組成和配制:
提取液:液體 100mL×1 瓶,4℃保存;
試劑一:液體 5mL×1 瓶,4℃保存;
試劑二:液體 200μL×1 支,4℃保存;
試劑三:液體 4mL×1 瓶,4℃保存;
試劑四:粉劑×2 瓶,4℃保存。
小鼠胰島樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白3(IGFBP-3)聯(lián)免疫試劑盒弗雷德里克斯堡假單胞Rap1B (36E1) Rabbit mAb
小鼠白介1α(IL-1α)聯(lián)免疫試劑盒枯草芽胞桿AE1/SLC4A1 (D3X1R) Rabbit mAb
小鼠白介1β(IL-1β)聯(lián)免疫試劑盒芽胞桿Phospho-SirT1 (Ser27) Antibody
小鼠白介1受體拮抗劑(IL-1ra)聯(lián)免疫試劑盒 穴形節(jié)皮PAR-4 Antibody
小鼠瘦(LEP)聯(lián)免疫試劑盒植物乳桿Merlin/Ezrin/Radixin/Moesin (D1P8I) Rabbit mAb
小鼠白血病抑制因子(LIF)聯(lián)免疫試劑盒盤(pán)孢屬Phospho-PAR-4 (Thr163) Antibody
小鼠白介2(IL-2)聯(lián)免疫試劑盒冠突曲霉Raf Family Antibody Sampler Kit
小鼠白介4(IL-4)聯(lián)免疫試劑盒沙生梭孢殼Phospho-eEF2 (Thr56) Antibody
小鼠白介6(IL-6)聯(lián)免疫試劑盒葡萄汁有孢漢遜酵母FGF Receptor 2 (D4L2V) Rabbit mAb
小鼠白介24(IL-24)聯(lián)免疫試劑盒牛舌、肝色牛排eEF2 Antibody
小鼠白介10(IL-10)聯(lián)免疫試劑盒白地霉Progesterone Receptor A/B (D8Q2J) XP® Rabbit mAb (PE Conjugate)
小鼠白介17(IL-17)聯(lián)免疫試劑盒谷棒桿Phospho-Akt (Ser473) (193H12) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjugate)
小鼠γ干擾(IFN-γ)聯(lián)免疫試劑盒黃桿Phospho-Akt (Ser473) (193H12) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjugate)
小鼠腫瘤壞死因子α(TNF-α)聯(lián)免疫試劑盒 腸炎沙門(mén)氏Phospho-MEK1/2 (Ser221) (166F8) Rabbit mAb
小鼠血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)聯(lián)免疫試劑盒 栗疫Phospho-MEK1/2 (Ser221) (166F8) Rabbit mAb
SOD超氧化物歧化酶檢測(cè)試劑盒微量法轉(zhuǎn)化因子樣蛋白4抗體Human ONECUT1 ELISA Kit仙人掌
NADH復(fù)合體5抗體Human OPA3 ELISA Kit鹽咪達(dá)普利
肌微管1抗體Human OPTN ELISA KitL-絲
髓性白血病蛋白1抗體Human OFD1 ELISA KitN-乙酰-L-半胱
磷化絲裂原活化蛋白激1抗體Human OGT ELISA KitL-甘-甘-纈三肽
組織相容性復(fù)合體2抗體Human OIP5 ELISA Kit馬尿-L-丙
磷化雷帕霉靶蛋白抗體Human OLFM1(Olfactomedin-1) ELISA Kit2′-脫氧鳥(niǎo)苷-5′-三磷三鈉鹽
甲基化CpG結(jié)合蛋白2抗體Human OL ELISA Kit2-萘-1-磺