ELISA方法被廣泛應(yīng)用于各種抗原和抗體測定。 但ELISA測定中影響因素較多，而且其操作中有一定的技術(shù)要求，在檢測過程中除正常反應(yīng)外，有時(shí)常見到一些錯(cuò)誤的結(jié)果。
引起ELISA測定錯(cuò)誤結(jié)果的原因主要有：
①標(biāo)本因素；
②試劑因素；
③操作因素。在實(shí)驗(yàn)過程中請嚴(yán)格按照使用說明操作，必能得出準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，可提供免費(fèi)技術(shù)咨詢服務(wù)！
產(chǎn)品名稱 | Cryα人晶體蛋白αELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)原理 |
英文名稱 | Human crystal proteins α, Cryα Elisa Kit |
貨號 | FS-H63495 |
公司“質(zhì)量是企業(yè)是生命之源”，選購優(yōu)勢如下：
1*抗體——、靈敏、特異
2操作——吸附均勻、吸附性好、空白值低、空底透明度高
3的優(yōu)化方案——回收利用率高、可靠性強(qiáng)
4適用于體液、組織勻漿，細(xì)胞培養(yǎng)上清液、尿液等各種類型的樣本。
5可檢測指標(biāo)齊全：生長因子、炎癥因子、脂肪因子、基質(zhì)金屬蛋白酶等等
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樣本實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備：
ELISA試劑盒液體樣本：包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等。
（1）血清
室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
（2）血漿：
應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
（3）尿液：
用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實(shí)行。
（4）細(xì)胞培養(yǎng)上清：
檢測分泌性的成份時(shí)，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。
（5）培養(yǎng)細(xì)胞
檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí)，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
（6）組織標(biāo)本
切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。
Clostridium│propioni 丙梭菌Clostridium│propioni分離基物:黑泥漿斜面培養(yǎng)物安全等級:1模式菌株:no產(chǎn)CM-M21生長條件:37℃ 純度：98%
Thermoanaerobacr│siderophilus 嗜金屬熱厭氧桿菌Thermoanaerobacr│siderophilus分離基物:油田采出斜面培養(yǎng)物安全等級:1模式菌株:no產(chǎn)甲烷482生長條件:65℃存儲條件:定期移植法 純度：>95.0%(T)
Clostridium│papyrosolvens 溶紙梭菌Clostridium│papyrosolvens分離基物:稻草堆積物斜面培養(yǎng)物安全等級:1模式菌株:no纖維素降解717生長條件:25℃存儲條件:定期移植法 純度：>95.0%(T)
Thermotogales│sp. 熱袍菌Thermotogales│sp.分離基物:油井采出液斜面培養(yǎng)物安全等級:1模式菌株:no產(chǎn)氫產(chǎn)乙醇483生長條件:65℃ 純度：>95.0%(T)
Bacillus│thuringiensis 蘇云金芽胞桿菌Bacillus│thuringiensis分離基物:煤礦斜面培養(yǎng)物安全等級:1模式菌株:no纖維素降解菌2生長條件:30℃存儲條件:-80℃冰箱凍結(jié)法；定期移植法 純度：80%
Pseudomonas│marginalis 邊緣假單胞菌Pseudomonas│marginalis分離基物:土壤凍干物安全等級:1模式菌株:no分類、研究，具有處理養(yǎng)殖廢潛力。2生長條件:28℃存儲條件:-80℃冰箱凍結(jié)法；真空冷凍干燥法；礦物油法 純度：80%
Cellulosimicrobium│cellulans 纖維化纖維微細(xì)菌Cellulosimicrobium│cellulans分離基物:土壤凍干物安全等級:1模式菌株:no分類、研究，具有生物肥料潛力。2生長條件:28℃存儲條件:-80℃冰箱凍結(jié)法；真空冷凍干燥法；礦物油法 純度：80%
Pseudomonas│plecoglossicida 香魚假單胞菌Pseudomonas│plecoglossicida分離基物:土壤凍干物安全等級:1模式菌株:no分類、研究，具有處理養(yǎng)殖廢潛力。2生長條件:28℃存儲條件:-80℃冰箱凍結(jié)法；真空冷凍干燥法；礦物油法 純度：98%
Cryα人晶體蛋白αELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)原理ET-1 內(nèi)皮素-1抗體異阿魏(1S,2S,3R,5S)-(+)-2,3-蒎烷二Human COL1α1 (Collagen Type I Alpha 1) ELISA Kit
ET-1 內(nèi)皮素-1單克隆抗體高良姜素2-巰基-1，3，4-噻二唑（MTD）Human COL6α3 (Collagen Type VI Alpha 3) ELISA Kit
ET-1(whole serum) 內(nèi)皮素-1抗體（抗血清）梣2-巰基-1，3，4-噻二唑（MTD）Human COL13 (Collagen Type XIII) ELISA Kit
Ets1/ETS-1 Ets轉(zhuǎn)錄因子家族e(cuò)ts1抗體白楊素鄰Human COL14 (Collagen Type XIV) ELISA Kit
ETK/BMX 非受體性蛋白酪氨激酶ETK抗體芥子鹽鄰Human CTX-III (Cross Linked C-opeptide of Type III Collagen) ELISA Kit
Phospho-ETK (Tyr40) 磷化非受體性蛋白酪氨激酶ETK抗體芒柄花素鄰Human EJ/GlyRS (Anti-EJ-Antibody) ELISA Kit
Eukaryotic aspartyl protease(Rice) 天冬氨蛋白酶家族蛋白抗體(水稻蛋白的一種)染料木素2-溴Human EFNA1 (Ephrin A1) ELISA Kit
EV71 VP1 腸道病71型/手足口病病抗體(-)-薄荷2-溴Human SELE (E-Selectin) ELISA Kit
操作流程：
（1）待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl，每種樣品設(shè)3個(gè)平行孔；設(shè)兩個(gè)陰性對照孔，每孔加未處理組的細(xì)胞裂解液100μl；另設(shè)一個(gè)空白對照孔，加入純細(xì)胞裂解液100μl。
（2）酶標(biāo)板置4℃，包被過夜。
（3）洗板：吸干孔內(nèi)反應(yīng)液，用洗滌液過洗一遍（將洗滌液注滿板孔后，即甩去），之后將洗滌液注滿板孔，浸泡1-2分鐘，間歇搖動(dòng)。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。
（4）陰性對照孔每孔加入PBS 50μl，樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。
（5）酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。
（6）洗板，同（4）。
（7）每孔加1:5000稀釋的HRP-標(biāo)記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。
（8）酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。
（9）洗板，同（4）。
（10）每孔加TMB顯色液 100μl，輕輕混勻10s，置37℃暗處反應(yīng)15-20min。
（11）每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應(yīng)。
（12）分別測450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2，最終測得的OD值為兩者之差（W1-W2），以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
（13）數(shù)據(jù)處理：在得出標(biāo)本（S）和陰性對照（N）的 OD值后，計(jì)算S/N值。S/N≥2.1為陽性判定標(biāo)準(zhǔn)
