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產品屬性：
產品名稱 | 規(guī)格 | 檢測方法 | 貨號 |
50管/48樣 | 紫外分光光度法 | FS-01S63496 |
商品介紹：
測定意義 GAPDH催化3-磷酸甘油醛氧化生成1,3-二磷酸甘油酸，是糖酵解途徑的關鍵酶，與糖異生途徑、體內血糖濃度的維持和糖尿病的發(fā)生密切相關，在機體糖、脂、蛋白代謝紊亂疾病中發(fā)揮重要作用。 測定原理 3-磷酸甘油酸激酶催化三磷酸甘油酸和ATP生成1,3二磷酸甘油酸。GAPDH逆向催化1,3二磷酸甘油酸和NADH生成3磷酸甘油醛、無機磷和NAD，340nm處測定NADH的減少量可反映GADPH活性的高低。 需自備的儀器和用品 分光光度計、恒溫水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、1 mL石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。 |
樣本前處理步驟：
樣本處理前須知
處理任何樣本時,都必須注意:
(1) 實驗中必須使用一次性吸頭,在吸取不同的試劑時要更換吸頭(2)實驗前須檢查各種實驗器具是否干凈,必要時對實驗器具進 行清潔,避免污染干擾實驗結果。
(a)組織樣品處理方法: 1、 稱取5±0.05g組織樣品于50ml離心管中,先加入3ml已稀釋好的樣品提取液震蕩2min;再加入10ml乙腈,充分震蕩5min, 2、 加入2g中性氧化鋁;震蕩2min ,室溫4000r/min以上,離心10min;; 3、 取6ml上清液于干凈離心管中,加入5ml二氯甲烷震蕩3min ,室溫4000r/min以上,離心10min;; 4、 取下層清澈液體于玻璃管中,加入20ul氧化劑混勻,在56℃條件下氮氣或空氣流吹至*干燥; 5、 加入1ml復溶液,充分溶解干燥殘留物。 6、 取100ul 上清液與100ul 已稀釋好的復溶液充分混合30s, 7、 取50ul進行分析。 樣本稀釋倍數: 1倍 | (b)水樣品處理方法: 1、取50ul 上清液與450ul 已稀釋好的復溶液充分混合30s, 2、取50ul進行分析。 樣本稀釋倍數:10倍
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實驗通用規(guī)則:
1、將液體加到酶標孔中時，避免槍頭和孔內液體接觸，可使槍頭上的液滴和孔壁接觸，液滴會自然流下去。
2、用槍吸取液體時速度不能太快，以免產生氣泡而使吸取量不準確。
3、溫浴時，要用不干膠或膠帶紙封好酶標板，防止水分的蒸發(fā)。
4、洗液不夠時，可用蒸餾水自行配制PH7.4，0.02M的磷酸緩沖液，加入0.1%的吐溫20作為洗液。加入1/1000的疊氮鈉后可長期保存。
5、實驗時，要使底物避光保存。
6、洗板時，每次洗液加入后，應靜置1分鐘，使清洗更加*。沒有洗板機時，倒去液體后，要將酶標板在報紙或毛紙上用力拍干。
7、要在實驗前1小時將試劑盒從冰箱中取出，使各種試劑都恢復到室溫，以使結果更穩(wěn)定。
8、吸取液體時，要用量程和需要量接近的槍去吸，減少誤差。
9、要配備20ul、50ul、100ul、1000ul和排槍各一支。吸取不同的液體后，要更換槍頭。即使是吸取標準品時。
10、液體全部加完后，可將酶標板在桌子上平行輕輕晃動30秒，混勻液體。也可以用酶標儀的晃動功能。
